基于Nrf2/ARE信號通路探討血清AHSG、AQP1TIMP-1與急性腦梗死進展及復發的關系

劉建紅， 李珍珍， 劉江紅

流行病學調查顯示[1]，腦梗死的發病率呈現逐年上升的趨勢，同時疾病的發病年齡呈現顯著的年輕化趨勢。在疾病的進展中[2]，粥樣硬化、動脈血管狹窄均是造成疾病進展的重要原因。同時，腦梗死患者較高的致殘率以及致死率，已經成為臨床影響患者生命質量的疾病之一[3]。胎球蛋白A(fetuin-A，AHSG)是由肝臟分泌的糖球蛋白，通過對患者胰島素受體磷酸化的顯著抑制，進而導致患者的胰島素抵抗，在心腦血管局部病灶部位的炎性反應以及氧化應激反應中發揮重要作用[4]。

水通道蛋白1(aquaporin 1，AQP1)是腦血流灌注的重要指標。金屬蛋白酶組織抑制因子1(tissue inhibitor of metalloprot Einase-1，TIMP-1)在一定程度上反映了患者的腦組織的纖維化程度[5]。核因子E2相關因子2(uclear factor ervthroid 2 related factor 2,Nrf2)與抗氧化反應元件(antioxidant response element,ARE)反映了機體的局部病灶部位的神經細胞的凋亡情況[6]，本研究主要通過探討血清AHSG、AQP1、TIMP-1與急性腦梗死進展及復發的關系進行分析，為臨床診斷以及治療效果進行分析。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本研究采取前瞻性研究，以2017年1月-2019年12月在本院進行治療的老年腦梗死患者120例作為研究對象，其中男性患者50例，女性患者70例，年齡在65～75歲，平均年齡為(66.55±2.57)歲，體重指數平均為(24.56±2.52)kg/m2，高血壓患者59例，糖尿病患者41例，血脂異?；颊?3例，根據美國國立衛生研究院卒中量表(NIHSS)評分，NIHSS評分在5分以下則為輕度;5～15分則為中度;15分以上為重度。輕度患者32例，中度患者46例，重度患者42例，另選取同期進行健康體檢的患者120例作為對照組，兩組的性別、年齡以及體重指數之間的差異不存在統計學意義(P>0.05)(見表1)。所有患者均簽署知情同意書，并經倫理委員會論證通過。納入標準：(1)所有患者均符合腦梗死診斷標準[7]；(2)所有患者均由CT或磁共振檢查確診為腦梗死；(3)所有患者從發病到入院時間均小于12 h；(4)所有患者腦梗死前均無認知障礙。排除標準：(1)經CT或核磁檢查診斷為出血性腦梗死患者或腦出血患者；(2)大面積梗死患者；(3)顱內感染或者腫瘤患者；(4)對本研究藥物過敏或者不耐受患者。

1.2 研究方法 所有研究對象入組后均進行靜脈采血4 ml，3500 r/min離心15 min后，取上清液，采用酶聯免疫法對患者的血清進行AHSG、AQP1、TIMP-1水平檢測。

分別對以上樣本采用免疫組化法以1∶100的濃度對Nrf2、ARE抗體進行滴加，在4 ℃下進行孵育過夜，采用多聚物酶標二抗進行滴加后，在37 ℃下繼續孵育45 min，采用DAB進行顯色，蘇木精進行復染。細胞漿內出現棕黃色或棕褐色顆粒物即為Nrf2、ARE陽性。采用染色強度以及陽性細胞的二級計數法Nrf2、ARE進行評分，無染色則為0分;淡黃色則為1分;黃褐色則為2分;深褐色則為3分。陽性細胞數目比例為10%則為0分;10%～25%則為1分;26%～50%則為2分;51%～100%則為3分。染色強度以及染色比例的評分乘積可作為以上蛋白表達程度的評價依據，6分以下則為低表達;6分及6分以上則為高表達。

1.3 觀察指標

1.3.1 兩組研究對象的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平 分別對觀察組以及對照組的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平進行比較。

1.3.2 不同嚴重程度患者的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平比較 分別對輕度、中度以及重度患者的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平比較。

1.3.3 不同復發情況患者的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平比較 分別對所有患者開展為期1 y的隨訪，以患者發生腦梗復發作為研究的終點事件，比較復發組以及非復發組患者的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平進行比較。

1.3.4 相關性分析 采用Spearman相關性分析，研究AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE與疾病嚴重程度以及復發情況的相關性。

表1 兩組患者一般資料比較

2 結 果

2.1 兩組研究對象的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平比較 觀察組患者的AHSG(t=79.456，P<0.001)、AQP1(t=25.668，P<0.001)、TIMP-1(t=29.429，P<0.001)、Nrf2(t=24.583，P<0.001)、ARE(t=88.561，P<0.001)水平顯著高于對照組(見表2)。

2.2 不同嚴重程度患者的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平比較 不同嚴重程度患者的AHSG(F=4.171，P<0.001)、AQP1(F=15.482，P<0.001)、TIMP-1(F=48.098，P<0.001)、Nrf2(F=12.063，P<0.001)、ARE(F=11.022，P<0.001)水平之間差異存在統計學意義；通過兩兩比較，不同嚴重程度患者的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平之間差異存在統計學意義(見表3)。

2.3 不同復發情況患者的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平比較 復發組患者的AHSG(t=69.316，P<0.001)、AQP1(t=9.779，P<0.001)、TIMP-1(t=23.197，P<0.001)、Nrf2(t=5.972，P<0.001)、ARE(t=11.436，P<0.001)水平顯著高于非復發組(見表4)。

2.4 相關性分析 通過相關性分析，腦梗死患者的疾病嚴重程度與復發情況與AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平呈現正相關(見表5)。

表2 兩組研究對象的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平比較

表3 不同嚴重程度患者的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平比較

表4 不同復發情況患者的AHSG、AQP1、TIMP-1、Nrf2、ARE水平比較

表5 相關性分析

3 討 論

腦梗死是臨床較為常見的神經系統疾病之一，主要是由于大腦的血管閉塞造成局部腦組織的缺血以及氧氣的供應不足[8]，進而引起一系列的神經細胞凋亡、腦組織損傷以及炎性反應[9]。而在其疾病的進展過程中往往造成患者的神經功能障礙，其較高的發病率以及致殘率、致死率已經成為臨床嚴重影響患者生命質量的疾病之一[10]。目前對于腦梗死的危險因素的研究較多，但是在實際的診斷過程中，由于多種因素對于腦梗死的預測價值不一，其穩定性不佳，所以在臨床中尋找穩定性較強的指標，進一步對患者的診斷進行預測，對于患者的預后具有積極的意義[11]。

AHSG主要在患者的肝臟進行合成，通過對AHSG的分泌量的增加，在一定程度上降低機體的糖代謝水平，同時肝臟對于葡萄糖的攝取能力以及利用效能顯著降低，同時腦組織對于糖分以及氧氣的攝取的能力顯著下降，進一步造成腦組織的損傷。同時也有研究報道顯示，AHSG可通過對患者的胰島素抵抗的調控作用，進一步對患者的受損腦組織的損傷。在本研究中，隨著疾病的進展，患者的AHSG水平顯著升高，同時AHSG水平與疾病的復發呈現顯著的相關性。范磊等[12]通過對腦梗死患者的AHSG水平分析，隨著患者的疾病進展，AHSG水平呈現顯著的上升趨勢，與本研究結果一致。TIMP-1與腦部損傷組織纖維化的進程有明顯的相關性[13]，在腦梗死的疾病狀態下，腦組織的損傷后的修復處于較為活躍的狀態，而在此過程中，患者的TIMP-1水平呈現顯著的上升的趨勢。而在炎性反應水平的分析，隨著疾病的進展，患者的Nrf2、ARE呈現顯著的上升趨勢。有研究報道顯示[14]，Nrf2/ARE是機體氧化應激反應的重要指標，在疾病的進展中，隨著局部氧化應激反應水平的顯著升高，Nrf2向機體的細胞核中進行移動，進一步對機體的NO水平進行有效調控，隨著機體的損傷的加重，大量的活性氧被Nrf2進行攻擊以及偶聯，并向機體的血清內大量釋放ARE，所以隨著疾病的進展，患者的Nrf2、ARE呈現顯著的升高趨勢。而在對患者的AQP1水平的分析中，隨著疾病的進展，患者的AQP1呈現顯著的升高趨勢。在損傷的腦組織中，局部病灶部位的血管的破壞，大量的新生血管以及神經元細胞進行恢復，患者的AQP1呈現顯著的上升趨勢。安宏娜等[15]在對急性腦梗死患者的腦水腫與AQP1水平的相關性分析中，患者的AQP1與腦水腫的疾病進展呈現顯著的相關性，與本研究結果一致。

但是本研究還存在一定的局限性，由于納入研究的樣本量較低，在臨床的推廣存在局限性，有待在日后的大樣本研究中進行驗證。

綜上所述，在腦梗死疾病的進展以及復發中，通過對Nrf2/ARE信號通路的調控作用，血清AHSG、AQP1、TIMP-1水平呈現顯著的上升趨勢。