黑果腺肋花楸組培快繁體系研究

彭琳

（山西潞安石圪節智華生物科技有限公司，山西長治 046204）

黑果腺肋花楸（Aronia melanocarpa Elliot）是一種多年生落葉花灌木，屬于薔薇科腺肋花楸屬[1]，原產自美國的東北部，歐洲已經對其引種栽培100 年，20 世紀90 年代引入我國[2]。黑果腺肋花楸的果實中含有豐富的營養物質，例如花色苷、多酚類物質、黃酮類化合物等，對心腦血管疾病和糖尿病都具有良好的療效[3]。因為其具有很好的發展前景，因此國內有很多學者致力于研究黑果腺肋花楸的組培快繁技術、栽培管理技術和果實果酒發酵技術，為其推廣種植的推行及生產加工做出鋪墊[4-6]。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗材料來源

本實驗的材料取自潞安石圪節智華生物科技有限公司溫室中，外植體為黑果腺肋花楸的幼嫩莖段。

1.2 實驗方法

1.2.1 外植體處理

將帶有頂芽和腋芽的幼嫩枝條去掉葉片留下葉柄，將枝條剪切為每兩個腋芽為一截，外植體的滅菌處理方式為在超凈工作臺中先用75%酒精處理30s，無菌水沖洗一遍，20%NaClO 消毒20min，消毒過程中每隔5min 搖晃一次消毒容器，之后無菌水沖洗4～5 次待接種。

1.2.2 快繁過程

在初代培養基中培養7d、14d、21d 后將新生長出來的幼嫩枝條剪下來轉入增殖培養基中培養30d，之后轉入生根培養基中培養30d 后進行煉苗。

培養溫度25℃，每天光照16h，光強2000lx。

1.2.3 培養基制作

（1）初代培養基：MS 培養基。

（2）增殖培養基：MS 培養基+6-BA，6-BA 濃度分別為0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L。

（3）生根培養基：1/2MS 培養基+2.0mg/L 6-BA+NAA，NAA 的濃度分別為0.03mg/L、0.04mg/L、0.05mg/L、0.06mg/L。

1.2.4 煉苗及移栽

將生根瓶苗放在大棚中，在大棚中一周后擰松瓶蓋，2d 后將瓶蓋反蓋，其間瓶中培養基干裂的話適量在瓶內加些水，2d 后打開瓶蓋后將小苗從瓶中拿出清洗，在500～800 倍多菌靈中將根部浸10min，移栽入大棚中的不同基質中，移栽前將基質用0.1%的高錳酸鉀溶液進行噴淋消毒。

不同基質：珍珠巖:沙:蛭石=1:1:1，珍珠巖:沙:珍珠巖=1:1:1，珍珠巖:沙:草炭土=1:1:1。每種基質中種植300 株，種植初期將大棚覆蓋遮陽網，對植株進行適量的噴霧，增加大棚內的濕度。

1.3 數據統計及分析方法

在繼代培養30d 統計繼代增殖系數，馴化后的組培生根苗移栽進入不同基質中，兩個月后統計成活率。

繼代增殖系數=增殖周期結束時株數/接種株數

成活率=成活株數/移植株數×100%

2 結果與分析

2.1 不同初代培養時間對組培苗分化的影響

將外植體接種在初代培養基中，分別在7d、14d、21d 后將新生長出來的幼嫩枝條剪下來轉入增殖培養基中，實驗發現如表1，7d后接種的幼嫩枝條細嫩，繼代培養中繼代增殖系數為8.4；14d 接種后幼嫩枝條株株高、莖粗和繼代增殖系數都明顯高于7d 后進行繼代培養的；初代培養21d 的枝條已經出現木質化，表皮呈棕色，部分枝條末端已經有須根長出，后期繼代培養中增殖能力明顯下降，僅為3.5。因此，初代培養14d 是最適宜的繼代轉接時間，具體數據見表1。

2.2 不同濃度6-BA 對對組培苗分化的影響

將初代培養14d 后新長出來的枝條剪下接種進入含有不同濃度6-BA 的MS 培養基中，當6-BA 濃度分別為0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L，組培苗的繼代增殖系數分別為6.9、9.2、12.9、16.1、13.4。當6-BA 濃度在2.0mg/L 范圍內，隨著6-BA 濃度的升高，組培苗的繼代增殖系數越來越高，分化出的植株顏色隨著濃度升高由淺綠變為嫩綠；當濃度升到2.5mg/L，組培苗的繼代增殖系數反而下降，顏色也成為深綠，說明6-BA 濃度過高不利于組培苗的分化。因此，在分化過程中，2.0mg/L 是MS培養基中6-BA 的最適濃度。

表1 不同初代培養時間對組培苗繼代增殖系數的影響

2.3 不同濃度NAA 對組培苗生根的影響

繼代培養5 次之后，組培苗的分化能力下降，將組培苗接種進入含有不同濃度NAA 和2.0mg/L 6-BA 的1/2MS 培養基中。NAA 濃度為0.3mg/L 時，組培苗的生根率為89.1%；當NAA 濃度為0.4mg/L、0.5mg/L、0.6mg/L 時，組培苗的生根率都可以達到100%，但是NAA 濃度為0.5mg/L 時，生根條數最多且須根數量多，有利于后期的馴化移栽。因此1/2MS 培養基+2.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA 是最適宜的生根培養基。

圖1 組培苗的繼代培養

圖2 培養兩周后組培苗的生根情況

2.4 不同基質對成活率的影響

生根培養30d 后，株高6～12cm，馴化后的生根組培苗會有少數弱苗不能適應外界環境而死亡。將馴化后的組培苗移入不同基質中生長兩個月后發現：移植進入1 號基質（珍珠巖:沙=1:1）的植株成活率只有42.3%，其成活率明顯小于2 號基質（珍珠巖:沙:蛭石=1:1:1）和3 號基質（珍珠巖:沙:草炭土=1:1:1）。2 號基質和3 號基質中植株的成活率分別為83.4%和84.1%，兩種基質中的植株成活率接近，但是3 號基質植株成活率略高于2 號基質。因此珍珠巖:沙:草炭土=1:1:1 是最適宜的種植基質。

3 結論

對黑果腺肋花楸進行組培快速繁殖，可以大批量生產黑果腺肋花楸植株，還可以大大縮短生產時間。實驗證明，初代培養時間會影響后期外植體的分化能力，初代培養14d 進行繼代培養是最佳的。不同的生長素濃度對影響組培苗的分化和生根，實驗證明，MS 培養基+2.0mg/L 6-BA 是最佳的增殖培養基，而1/2MS 培養基+2.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA 是最佳的生根培養基。組培生根苗馴化后移植的基質對組培苗的成活率有很大的影響，草炭土和蛭石都可以為植株提供營養，提高其成活率，但是珍珠巖:沙:草炭土=1:1:1 基質中的植株成活率達到84.1%，是馴化后生根組培苗的最佳移植基質。

圖3 煉苗馴化后的組培生根苗

圖4 在基質中生長的黑果腺肋花楸

在本實驗中發現在組培生根苗馴化過程中，一些較弱的莖葉細小的植株不能適應周圍環境，葉片會干黃，植株很快死亡，其死亡率為7.2%。如果批量生產，也將是不小的損失，這是本實驗遇到的瓶頸，有待解決。

目前，本公司已種植黑果腺肋花楸1000 余畝，單株產量可達30 斤，并已研發出黑果腺肋花楸原漿和干紅推向市場。