辛伐他汀對狼瘡性腎炎小鼠腎組織中IL17、HMGB1、TLR4表達的作用研究

藍梅金

(龍巖市第二醫院腎內科，福建 龍巖 364030)

系統性紅斑狼瘡(SLE)作為常見的自身免疫性疾病中，其主要是因狼瘡性腎炎(LN)引發，嚴重時會導致殘疾、死亡等后果[1-2]。目前研究分析發現HMGB1(細胞因子高遷移率族蛋白1)為重要致病因素，而TLR4受體細胞及IL17表達也與病癥的致炎有著緊密的關系[3-4]。為分析辛伐他汀對狼瘡性腎炎小鼠腎組織中IL17、HMGB1、TLR4的影響，本文進行分組對照，報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗設計

選取14只16周齡雄性BSXSB小鼠為LN試驗模型，體質量均在18～24g之間，隨機標號均分成對照組(7只)和研究組(7只)，研究組根據用藥劑量不同分為研究A組(3只)、研究B組(2只)和研究C組(2只)，另外同時選取相同周齡7只C57BL/6小鼠為正常組，體質重18～24g，所有選取小鼠均引種自美國Jackson實驗室，實驗前先飼養一周，飼養期間均給予相同的環境，均自由飲食、飲水，實驗時間段：12～16周齡末。

1.2 主要試劑

免疫組化試劑盒、免抗小鼠TLR4多克隆抗體、免疫小鼠HMGB1多克隆抗體、免抗小鼠IL17多克隆抗體、辛伐他汀。

1.3 實驗及標本采集方法

1.3.1實驗方法

三組模型小組建立后，其中對照組和正常組小鼠均予常規飼養，不予其他處理，而研究組小鼠于試驗起點時，開始灌服含有辛伐他汀的0.1%PBS溶液，研究A組劑量為5mg·kg-1·d-1；研究B組劑量為10·kg-1·d-1，研究C組劑量為15mg·kg-1·d-1，每天灌服一次，直至實驗末期。

1.3.2標本采集方法

三組小鼠均于實驗終點時，行眼眶取血，常規血清分離致死。然后取小鼠腎皮質組織，用多聚甲醛(4%)和戊二醇(2%)固定。同時，部分組織被切割和冷凍，并儲存在-72℃下供日后使用。

1.4 檢測方法

對三組小鼠BUN水平進行檢測，同時對樣本腎臟組織中的IL17、HMGB1及TLR4蛋白的表達水平進行檢測：行常規切片→脫蠟水化→HE染色→抗原修復→稀釋后IL17多克隆抗體、HMGB1多克隆抗體及TLR4多克隆抗體處理→4℃過夜；陰性對照用PBS代替一抗，觀察和記錄陽性信號。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 BUN水平對比

對照組顯著高于正常組(P<0.05)。研究A組(8.34±0.80)、研究B組(7.67±0.82)、與對照組及正常組相比差異顯著(P<0.05)。研究C組與對照組相比差異顯著(P<0.05)，但與正常組相比差異較小(P>0.05)。病理圖如圖1，各組小鼠BUN水平見表1。

表1 各組小鼠BUN水平對比情況

2.2 腎組織中IL17、7、HMGB1、TLR4蛋白表達水平對比

研究組三項均值顯著低于對照組，但顯著高于正常組，組間比較差異顯著(P<0.05)。其中研究C組IL17、7、HMGB1、TLR4均顯著優于研究A組及B組(P<0.05),與正常組比較差異不顯著(P>0.05)。詳細見下表2、圖2、圖3。

表2 三組小鼠腎組織中IL17、HMGB1、TLR4蛋白表達水平對比

研究組(400×)對照組(400×)圖1 兩組小鼠腎組織IL17蛋白的表達

3 討論

狼瘡腎炎是SLE患者最常見的并發癥，病理改變多樣且不均勻，以腎小球、血管、小管和間質損傷為特征。急性或慢性進展為腎纖維化甚至腎功能衰竭是SLE患者死亡的主要原因之一[5]。

系統性狼瘡腎炎的發病機制復雜，與遺傳、T淋巴細胞和B淋巴細胞功能等諸多因素有關。此外，本病的早發相對隱蔽或突然，起病危險，治療后易復發，給臨床治療帶來困難[6-7]。目前，關于狼瘡性腎炎的發病機制還沒有得到證實和可重復的結論。大多數學者認為[8]，某些外來抗原(如逆轉錄病毒)和內源性抗原(如DNA、基本免疫蛋白和淋巴細胞表面抗原)具有異常免疫調節功能的患者導致B淋巴細胞高度活躍的增殖和大量自身抗體的產生。與相應抗原相關的免疫復合物沉積在腎小球是狼瘡性腎炎的主要發病機制[9-10]。DNA與腎小球基底膜結合，并與循環抗DNA抗體形成原位免疫復合物，這也可能與狼瘡性腎炎有關[11]。某些補體成分也會增加免疫復合物在組織中的沉積，加重組織損傷[12]。補體激活、趨化因子形成、白細胞聚集以及一系列炎癥介質和細胞因子的釋放導致小血管炎癥和腎小球損傷[13]。

狼瘡性腎炎的常規治療藥物是糖皮質激素與環磷酰胺，但療效并不穩定，長期使用還會導致感染、高血糖和肝毒性、性腺損害等不良反應[14-15]。辛伐他汀是HMG-CoA還原酶抑制劑，據報道，它可以減少蛋白尿和腎小球損傷。表1中的數據分析表明，狼瘡性腎炎可直接導致小鼠血液中BUN含量增加，表明該疾病可直接損害小鼠的腎功能[16]。但經辛伐他汀治療后，小鼠組BUN水平較對照組有所下降，表明辛伐他汀有助于改善小鼠腎功能，并且根據數據可知，劑量越大，腎功能改善越明顯[17-18]。而表2的數據分析顯示，與正常組相比，狼瘡性腎炎模型小鼠腎組織中IL17、HMGB1和TLR4蛋白表達水平顯著升高，提示三者可能在腎臟炎癥中起一定的炎癥作用，且三者具有協同作用。此外，研究小組在給小鼠服用辛伐他汀后，發現這組小鼠腎組織中三項指標的蛋白表達水平明顯低于對照組，表明辛伐他汀治療效果顯著，可抑制上述蛋白表達，具有抗炎作用，結果得到相關證實[19-20]。

綜上，辛伐他汀能抑制IL17、HMGB1、TLR4在腎臟組織中的表達，預防狼瘡性腎炎，且劑量越大，效果更優，可作臨床參考。