靈芝雜交育種優勢親本篩選試驗

李希政 白中文 朱 琳 夏宏志

（吉林省生物研究所，吉林長春130012）

靈芝是我國從古至今常用的中藥材，在我國已有兩千多年的藥用歷史，被視為能治百病的“仙草”[1]。吉林省長白山區的紅靈芝譽滿海內外[2]。自20世紀90年代開始，靈芝棚栽技術發展迅速。雖然靈芝栽培技術不斷進步，但栽培菌株較雜[3]，并隨著轉代次數的增加，使用時間過長，出現了老化、退化、抗雜能力弱等問題[4]。雜交育種是新菌株選育的重要手段，而雜交親本性狀優選試驗是雜交選育的關鍵。

1 材料與方法

1.1 供試靈芝菌株

試驗靈芝菌株共計10個，均來自長白山菌株資源庫，其中包括采集的野生靈芝（編號為CJ12）（表1）。所有菌株均通過分離、提純、復壯，恢復至其最好性狀。試驗過程均采用菌齡相同的菌株且保證菌種管無污染。

1.2 供試培養基（料）配方

（1）母種培養基：馬鈴薯200 g，五維葡萄糖20 g，瓊脂25 g，磷酸二氫鉀3.5 g，硫酸鎂1.5 g，蛋白胨 5 g，加水 1 000 mL，pH 自然。（2）原種培養料：雜木屑78%，麩皮15%，玉米粉5%，稻殼粉1%，石膏1%。（3）栽培靈芝木段：栽培木段選用新鮮枝條（經濟林可砍伐硬木），將其截成同一長度段，捆成直徑25 cm、高22 cm 的圓木段狀，外包聚丙烯膜，常壓滅菌12 h后備用。

表1 供試靈芝親本菌株名稱及來源

1.3 試驗方法

1.3.1 母種菌絲比較試驗

母種培養基按配方制作后裝入試管，滅菌后，將其擺成長度為7 cm的斜面。每一菌株10支試管，每支試管接種0.5 cm2菌塊。培養條件為27 ℃恒溫。培養24 h 后觀察各試管中菌絲的萌發情況和生長狀態。當菌絲進入快速生長階段時，每兩天測一次長度，取平均值。同時，觀察菌絲色澤、長勢等，記錄滿管時間。

1.3.2 原種菌絲生長比較試驗

將原種培養料按配方稱好，先拌主料，再加輔料，主料、輔料混勻后，加水拌勻，控制料含水量為65%。將料裝入750 mL 玻璃瓶中壓實，然后封口、滅菌。每一菌株10 瓶。接入2 cm 長菌種塊后，27 ℃恒溫暗培養，培養至菌絲封蓋時，劃線記錄生長線。當菌絲長至距離瓶底2 cm 時，劃終止線（總長度為10 cm），記錄菌絲生長時間，計算菌絲平均生長速度。觀察菌絲色澤和長勢，記錄菌絲滿瓶時間。

1.3.3 出芝培養和生育期比較試驗

將原種轉接至1.2 制備的木段中，每瓶原種接6段，每段接種量一致。每個菌株3次重復，每次重復20段，共計60段。每段木段干重2.4 kg。

記錄木段中菌種萌發時間、菌絲封頂及長滿木段時間。

木段長滿菌絲后，移至陰涼干燥處后熟10～15 d（需覆膜防塵），然后移入棚覆土，同一天覆土、噴水。出芝管理條件同常規。

記錄子實體現蕾時間、子實體形態、菌蓋顏色，統計產量，按照常規方法計算生物學效率，并用新復極差法進行方差分析。

2 結果與分析

2.1 供試靈芝菌株菌絲生長情況

供試靈芝菌株菌絲生長情況見表2。

由表2可知，供試靈芝菌株的母種菌絲、原種菌絲生長速度有差異，菌絲的色澤和長勢也存在差異。SW6、SW9、CJ12菌株菌絲色澤好，萌發能力強，生長勢好，母種菌絲平均長速分別為1.000 cm/d、1.000 cm/d、1.167 cm/d，原種菌絲平均長速分別為0.284 cm/d、0.309 cm/d、0.356 cm/d，其中 CJ12 菌株菌絲生長最快。

接種后，SW6、SW9、CJ12 菌株母種 6～7 d 均可長滿試管，其原種 30～32 d 長滿瓶。SW11、SW1、SW5、SW4、SW2 菌株菌絲生長速度、顏色、長勢、萌發能力較SW6、SW9、CJ12菌株稍差，但比SW8、SW7表現好。SW8、SW7 菌株表現最差，生長速度最慢，萌發最晚，長勢最弱，其母種經過11 d 才長滿試管，原種48～49 d才長滿瓶。

表2 供試靈芝菌株母種、原種菌絲生長對比

2.2 供試靈芝菌株生育期

由表 3 可知，供試 10 個靈芝菌株中，SW7、SW8菌株萌發能力最弱，接入木段后第3天才萌發菌絲，其他菌株均在接種后第2 天萌發。在木段上，菌絲生長最快的是CJ12 菌株，接種7 d 菌絲封面，37.3 d后菌絲長滿木段；SW9、SW6 菌株菌絲生長很快，接種 7 d 封面，38.7～39.3 d 后菌絲長滿木段；SW11、SW5、SW1、SW4、SW2 菌株菌絲生長速度較快，接種8～9 d 后菌絲封面，42～43.7 d 均能長滿木段；SW8、SW7菌株菌絲生長速度最慢。

CJ12、SW9、SW6菌株生育期為114～115 d，三者間差異不顯著，與其他菌株呈顯著差異；SW11、SW5、SW1、SW4、SW2 菌株生育期為 122～123 d，相互之間生育期無顯著差異，與其他菌株呈顯著差異；SW7、SW8菌株生育期為131、133 d，兩者間無顯著差異，但與其他菌株呈顯著差異。從出現原基開始，CJ12 菌株菌絲吸收木段營養最快，僅用36 d 靈芝子實體就已經成熟并彈射孢子；SW11、SW5、SW1、SW4、SW2 菌株子實體成熟時間僅次于CJ12菌株；SW7、SW8 菌株子實體成熟最晚，因此管理投入人力物力也最多。

表3 供試靈芝菌株生育期比較

2.3 供試靈芝菌株產量

圖1 部分試驗靈芝菌株子實體

由表 4 可知，CJ12、SW9、SW6 菌株平均產量較高，與其他菌株達顯著性差異；其次是SW11、SW5、SW1、SW4、SW2菌株，產量和生物學效率表現次之；最差的是SW7、SW8兩個菌株。

2.4 供試靈芝菌株生物性狀比較

供試靈芝菌株的生物性狀見表4、表5。

試驗發現CJ12、SW9、SW6菌株原基長勢強，原基粗壯，菌柄較短或中等，原基至子實體成熟天數為36.0～36.7 d，時間較短，菌絲抗雜能力強，子實體褐色，外形各異，產量高。SW11菌株的生物性狀表現次之，再后是SW4、SW1、SW2、SW5菌株，生物性狀表現較好，原基長勢較強，菌柄朵形有差異，原基至子實體成熟天數為39.3～40.0 d，產量一般。生物性狀最差的是SW7、SW8菌株，產量低，抗雜能力最弱，原基至子實體成熟天數最長，原基長勢最弱，子實體外形一般。

表4 供試靈芝菌株平均產量

表5 供試靈芝菌株的生物性狀比較

3 小結

菌絲培養試驗結果表明，CJ12、SW9、SW6 菌株表現較優，其母種、原種、木段培養的菌絲生長表現較佳。出芝試驗結果，CJ12、SW9、SW6 菌株表現較優，生育期適中，產量較高，子實體性狀較好，可以作為靈芝新品種雜交的親本材料。