轉化糖電解質注射液中果糖與無水葡萄糖含量測定方法的研究

2021-03-05 13:59:44石妍

北方藥學 2021年8期

石妍

(內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院，內蒙古包頭 014000)

轉化糖電解質注射液為含多種糖的糖電解質輸液劑，具有提供能量迅速，血糖波動小，供能持續時間長的特點。同時，電解質與轉化糖具有協同效應。含維持性電解質消除了轉化糖被代謝后血漿滲透壓過分下降的風險；含轉化糖保證了電解質在輸注后的細胞內外離子轉運中需要的能量支持?？梢匀嫜a充電解質，既可補充細胞內液亦可補充細胞外液，所含緩沖鹽很好地維持了人體的酸堿平衡，真正做到了調節人體代謝紊亂。

轉化糖在人體內的代謝包括果糖代謝和葡萄糖代謝兩部分。葡萄糖與果糖的混合物在人體內的代謝具有以下三大優勢：1、迅速啟動代謝通路。果糖入血后迅速啟動肝臟代謝通路，在自身代謝的同時，也加快了葡萄糖代謝，而葡萄糖則直接進入細胞，兩者相加，使機體能量在短時間內得以提高。2、繞過胰島素抵抗環節。葡萄糖大量、短時輸注，使血中胰島素急劇升高，而有些患者存在胰島素抵抗，使葡萄糖不能有效代謝，反而造成血糖劇烈波動及高滲性的水、電解質丟失。果糖代謝通路不受胰島素影響，繞過了胰島素抵抗環節，從而有效提供能量。3、形成血糖緩釋庫。轉化糖中的葡萄糖可迅速改善機體的血糖平衡，而果糖進入人體后，除提供能量外，還能轉化為糖原儲存，成為血糖緩釋庫，并以緩慢速度釋放以保證血糖的穩定。

轉化糖電解質注射液共兩個規格。為500mL：果糖12.5g與葡萄糖12.5g與乳酸鈉1.4008g與氯化鈉0.7305g與氯化鉀0.9319g與氯化鎂0.1428g與磷酸二氫鈉0.3750g與亞硫酸氫鈉0.2602g。250mL：果糖6.25g與葡萄糖6.25g與乳酸鈉0.7004g與氯化鈉0.3652g與氯化鉀0.4660g與氯化鎂0.0714g與磷酸二氫鈉0.1875g與亞硫酸氫鈉0.1301g。

本品處方中果糖和無水葡萄糖作為能量補充劑，起到重要作用，需要對果糖和無水葡萄糖進行質量控制以確保本品用藥的有效性。轉化糖含量測定方法主要有氧化還原反應后稱重法、旋光法等，本品為等量的果糖與無水葡萄糖及氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、磷酸二氫鈉與乳酸鈉的滅菌水溶液，使用稱重法和旋光法測定的專屬性、靈敏度均較差。為了能準確測定果糖和無水葡萄糖含量，本研究選擇專屬性強、靈敏度高的高效液相色譜法直接對果糖和無水葡萄糖進行測定。

1 材料與方法

1.1 儀器與物料

儀器：LC-20AT型高效液相色譜儀，日本島津公司。

對照品：D-無水葡萄糖對照品，中國食品藥品檢定研究所；果糖對照品，中國食品藥品檢定研究所。

供試品：轉化糖電解質注射液(批號：20130101)，北京京衛信康醫藥科技發展有限公司；轉化糖電解質注射液(批號：130301～130303)，內蒙古白醫制藥股份有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1色譜條件選擇

果糖和無水葡萄糖沒有紫外吸收官能團，參考文獻[1]采用示差折光檢測器，對本品中果糖和無水葡萄糖同時進行測定。因果糖和無水葡萄糖均為小分子單糖，極性大，參考文獻[1]，以水為流動相，Xitmate Sugar-Ca柱即鈣型陽離子交換柱為色譜柱(適用于單糖和雙糖等低分子量糖的測定)。

色譜柱：磺酸基強陽離子交換樹脂Ca型(Xtimate Sugar-Ca，7.8×300mm，5μm)

檢測器：示差折光檢測器

柱溫：80℃

流動相：水

進樣量：10μL

流速：0.3mL/min

運行時間：35分鐘

1.2.2對照品溶液的配制

取果糖與無水葡萄糖對照品各約25mg，精密稱定，置1mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL 中含果糖和無水葡萄糖分別為25mg 的溶液，即得。

1.2.3系統適用性試驗溶液的配制

取果糖與無水葡萄糖各約25mg，精密稱定，置1mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為系統適用性試驗溶液。

1.2.4系統適用性試驗

取系統適用性試驗溶液10μL，注入液相色譜儀，出峰順序依次為無水葡萄糖峰、果糖峰，無水葡萄糖峰與果糖峰的分離度應大于1.5。

1.2.5測定法

取轉化糖電解質注射液作為供試品溶液，精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取上述對照品溶液，照高效液相色譜法同法測定。按外標法以峰面積計算果糖和無水葡萄糖的含量。

1.3 方法學驗證

1.3.1空白溶液的干擾試驗

取空白溶液(不含無水葡萄糖和果糖)10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；同時取供試品10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察空白組份峰對兩個主峰的干擾情況。

1.3.2系統適用性

分別取無水葡萄糖對照品和果糖對照品適量，加水溶解并稀釋制成25mg/mL的溶液，作為無水葡萄糖溶液和果糖溶液；另取無水葡萄糖對照品和果糖對照品適量混合后加水溶解并稀釋制成各含25mg/mL的混合對照品溶液；取轉化糖電解質注射液20130101批作為供試品溶液。

在確定的液相色譜條件下，分別取空白溶液(不含無水葡萄糖和果糖)、無水葡萄糖溶液、果糖溶液、混合對照品溶液、供試品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察空白組份、無水葡萄糖和果糖的出峰情況及空白組份峰與主峰的分離情況。

1.3.3線性范圍

取果糖和無水葡萄糖對照品各約250mg，精密稱定，置5mL量瓶中，加水溶解并定量稀釋制成每1mL約含無水葡萄糖和果糖均為50mg的溶液，作為貯備液；分別精密量取貯備液0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL置1mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為溶液①②③④，取貯備液作為溶液⑤，分別精密量取各溶液10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積與對應無水葡萄糖和果糖的濃度進行線性回歸，繪制標準曲線。

1.3.4對照品溶液進樣精密度

精密稱取無水葡萄糖和果糖對照品各適量，加水溶解并定量稀釋制成每1mL含無水葡萄糖和果糖均各約25mg的溶液作為對照品溶液，精密量取對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，連續進針6次，記錄色譜圖。計算峰面積RSD值。

1.3.5對照品溶液穩定性

取“對照品溶液進樣精密度”項下溶液，于室溫下放置，分別于放置的第0、2、4、6、8、12、24小時取樣檢測，考察無水葡萄糖峰和果糖峰面積隨放置時間的變化情況。

1.3.6溶液穩定性

取轉化糖電解質注射液20130101批作為供試品溶液，于室溫下放置，分別于放置的第0、2、4、6、8、12、24小時取樣檢測，考察無水葡萄糖峰和果糖峰面積隨放置時間的變化情況。

1.3.7重復性

取轉化糖電解質注射液20130101批照確定的方法進行測定，平行測定6份。6份測定值計算RSD值。

1.3.8中間精密度

取轉化糖電解質注射液20130101批照確定的方法由兩人分別進行測定，各平行測定6份。12份測定值計算RSD值。

1.3.9準確度

分別精密稱取無水葡萄糖和果糖對照品約20mg、25mg、30mg各三份置1mL量瓶中，加入空白溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為低(80%)、中(100%)、高(120%)檢測濃度的供試品溶液。另分別精密稱取無水葡萄糖和果糖對照品各約25mg，置1mL量瓶中，加水溶解并定量稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別精密量取供試品溶液和對照品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法計算無水葡萄糖和果糖測得量，將測得量與加入量進行比較，計算無水葡萄糖和果糖的回收率。

1.3.10定量限

精密量取“線性與范圍”項下的溶液① 1mL置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL置50mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。當信噪比為10∶1時注入儀器的量作為定量限。

2 結果與分析

2.1 空白溶液的干擾試驗

空白溶液在18.999、20.682分鐘出峰，本品主峰無水葡萄糖和果糖的保留時間分別為23.103、26.790分鐘，空白溶液不干擾本品的檢測。

2.2 系統適用性

無水葡萄糖峰和果糖峰的保留時間分別為23.103分鐘和26.790分鐘；混合對照品溶液中兩峰的分離度為3.237，大于2.0；供試品溶液中，無水葡萄糖峰與相鄰峰的分離度為2.136和3.169，大于2.0；果糖峰與相鄰峰的分離度為3.169，大于2.0；無水葡萄糖峰和果糖峰拖尾因子分別為1.045和1.041，對稱性好；理論板數分別為6918、7782，大于2500，故本方法對無水葡萄糖和果糖含量測定的系統適用性良好。見圖1。

圖1 系統適用性HPLC圖的比較

2.3 線性與范圍

結果表明，無水葡萄糖在4.9231～49.2306mg/mL濃度范圍內，無水葡萄糖的濃度與峰面積線性關系良好，線性方程為Y=287569X+ 10201，相關系數r=0.9994。果糖在5.2019～52.0191mg/mL濃度范圍內，無水葡萄糖的濃度與峰面積線性關系良好，線性方程為Y=271009X+ 8074.3，相關系數r=0.9994。以峰面積為縱坐標，以糖濃度為橫坐標，繪制標準曲線(圖2、圖3)。