新輔助化療對ⅠB～ⅡB期宮頸癌病灶內惡性生物學特征的影響

湯明，方春田，彭唯

作者單位：1洪湖市人民醫院，a腫瘤科，b婦產科，湖北 荊州433200；

2洪湖市婦幼保健院婦產科，湖北 荊州433200

宮頸癌作為女性發病率最高的惡性腫瘤性疾病之一，早期確診并采取恰當的治療方式是優化病人結局的最佳方式。對于腫瘤分期較早的ⅠB～ⅡB 期宮頸癌病人，根治性手術是首選方式，直接開展手術或是先行新輔助化療目前仍存在爭議。新輔助化療是一種術前應用的保守治療方式，通過靜脈給予化療藥物預先減小病灶體積，為后續手術實施奠定基礎。本研究選擇接受新輔助化療的宮頸癌病人作為研究對象，對比其化療前后宮頸癌組織惡性生物學行為的差異，具體從宮頸癌相關增殖基因、侵襲基因、自噬基因三方面展開闡述。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2015 年4 月至2018 年1 月間在洪湖市人民醫院接受治療的ⅠB～ⅡB 期宮頸癌病人157 例，均接受術前新輔助化療＋根治性手術治療。留取新輔助化療前后宮頸癌組織標本各157份作為研究對象。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 入組及排除標準

入組標準：（1）病理組織確診原發性宮頸癌；（2）首次確診、入院前未經任何治療；（3）順利完成新輔助化療及后續手術，標本保存完好、相關數據收集完整；（4）本人或近親屬簽署知情同意書。

排除標準：（1）合并其他類型原發惡性腫瘤性疾病；（2）合并宮頸組織嚴重感染；（3）無法耐受新輔助化療所致毒副作用或者自主中斷治療。

1.3 新輔助化療

入組病人接受紫杉醇、順鉑聯合化療，具體如下：紫杉醇140 mg/m溶入5%葡萄糖液500 mL 中，靜脈滴注，d1；順鉑75 mg/m溶入5%葡萄糖液250 mL 中，靜脈滴注，d3。以21 d 為1 療程，連續化療2療程后行根治性手術。

1.4 宮頸癌病灶中惡性生物學行為相關基因表達量檢測

新輔助化療前后，均留取病人的宮頸病灶組織標本，采用熒光定量PCR 法檢測其中惡性生物學行為相關基因的表達量，具體包括增殖相關基因：FOXP3、HOXA7、USP22、Sox2、TSLC1；侵襲相關基因：FAK、MACC1、GRP94、PRPS2、TPX2；自噬相關基因：Beclin1、LC3-B、PI3KC3。

1.5 統計學方法

數據分析選擇SPSS 19.0 統計軟件，以x ± s 描述定量資料，t 檢驗；以例數結合率描述定性資料，行χ檢驗。以α=0.05為檢驗水準。

2 結果

2.1 增殖相關基因

新輔助化療后，宮頸癌組織中FOXP3、HOXA7、USP22、Sox2 mRNA 的表達量低于新輔助化療前，TSLC1 mRNA 的表達量高于新輔助化療前，均差異有統計學意義（P ＜0.05）。見表1。

2.2 侵襲相關基因

新輔助化療后，宮頸癌組織中FAK、MACC1、GRP94、PRPS2、TPX2 mRNA 的表達量低于新輔助化療前，均差異有統計學意義（P ＜0.05）。見表2。

表1 ⅠB～ⅡB期宮頸癌病人157例新輔助化療前后各157份宮頸癌組織標本中增殖相關基因表達量的比較/x ± s

表2 ⅠB～ⅡB期宮頸癌病人157例新輔助化療前后各157份宮頸癌組織標本中侵襲相關基因表達量的比較/-x ± s

2.3 自噬相關基因

新輔助化療后，宮頸癌組織中Beclin1、LC3-B、PI3KC3 mRNA的表達量均高于新輔助化療前，均差異有統計學意義（P ＜0.05）。見表3。

表3 ⅠB～ⅡB期宮頸癌病人157例新輔助化療前后各157份宮頸癌組織標本中自噬相關基因表達量的比較/x ± s

3 討論

ⅠB～ⅡB 期宮頸癌病人的治療以根治性手術為主，目前較多學者推薦在術前應用新輔助化療，旨在殺滅微小轉移灶并縮小腫瘤體積，為后續手術實施創造便利條件。新輔助化療能否為早期宮頸癌病人帶來較大的臨床獲益存在爭議，本次研究對比新輔助化療前后原發性宮頸癌病人癌細胞的惡性生物學行為差異，為此類病人術前輔助治療提供借鑒。

宮頸癌細胞的惡性生物學行為首先表現為其無限增殖潛能，多種增殖相關基因共同調控癌細胞的這一行為。FOXP3 對維持Treg 細胞功能具有重要作用，推測其在腫瘤細胞的免疫逃逸過程中發揮重要作用，目前已經在人類胰腺癌、肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤性疾病中存在該基因的過度表達。HOXA7包含轉錄因子，在早期發育過程中扮演重要作用，已經在胃腸道惡性腫瘤細胞中發現該基因異常高表達，敲低該基因后腫瘤細胞增殖活力下降。USP22參與組蛋白H2A的泛素化，可調控基因轉錄、表達。研究發現，在宮頸癌組織中存在USP22 基因異常高表達，可促進Hela 細胞增殖且降低機體對化療藥物的敏感性。Sox2 是發現最早的干細胞轉錄因子，可維持胚胎干細胞多潛能性、器官發生及細胞分化。作為原癌基因，Sox2 可促進細胞周期進展并增強其增殖能力、抑制細胞凋亡。TSLC1 是最先發現于肺癌組織中的抑癌基因，該基因有助于保持上皮間緊密連接并抑制細胞遷移。目前已經在膀胱癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤組織中發現其表達減少甚至缺失，且在宮頸癌細胞實驗中利用腺病毒過表達TSLC1 后，發現癌細胞的增殖能力下降。文中宮頸癌病人接受術前新輔助化療后，病灶組織中FOXP3、HOXA7、USP22、Sox2 mRNA 的表達量較治療前下降，TSLC1 mRNA的表達量較治療前增加，證實新輔助化療可有效抑制宮頸癌細胞的增殖活力。

宮頸癌進展必然伴隨著癌細胞的侵襲轉移，其本質是多種促侵襲基因異常高表達、侵襲抑制基因異常低表達。FAK 是存在于細胞質中的非受體酪氨酸激酶，參與細胞內多條信號通路傳導。研究發現FAK 在多種實體瘤及非實體瘤中國均存在異常高表達，在調節癌細胞運動、遷移方面具有重要意義。MACC1 是HGF/c-Met 信號通路中的關鍵調節因子，與啟動子結合激活該通路后，可調控下游分子轉錄并促使c-Met 本身發生磷酸化，促使腫瘤細胞發生侵襲轉移。GRP94 屬于葡萄糖調節蛋白，具有調控新陳代謝等重要作用，目前該基因在腫瘤發生發展中的作用備受關注，研究證實其過度表達與癌細胞淋巴結轉移及腫瘤復發相關。PRPS2 是核苷酸合成關鍵酶，是促進腫瘤發生的關鍵基因，在Burkitt’s 淋巴瘤模型中存在PRPS2 過表達，且特異性敲低PRPS2 基因表達后Burkitt’s 淋巴瘤細胞凋亡活性增加。TPX2 的表達水平與細胞周期密切相關，是調節細胞有絲分裂的蛋白質，在宮頸癌細胞中過表達TPX2 可抑制癌細胞凋亡并增強其侵襲能力。文中宮頸癌病人接受術前新輔助 化 療 后，病 灶 組 織 中FAK、MACC1、GRP94、PRPS2、TPX2 mRNA 的表達量較治療前大幅下降，證實新輔助化療可有效抑制宮頸癌細胞的侵襲活力。

自噬參與惡性腫瘤的發生發展，在腫瘤發生早期自噬可清除致癌分子并防止其在細胞內堆積、發揮抑癌作用；隨腫瘤進展，自噬可幫助腫瘤細胞逃避缺血缺氧等造成的應激狀態并提高其生存能力、促進腫瘤發展及耐藥性形成。Beclin1 是一種重要的自噬相關基因，經活化PI3K 而形成自噬小體、增加細胞自噬活性。研究發現，Beclin1 基因表達缺失的小鼠易發生腫瘤性疾病。LC3-B 是細胞自噬的標記性分子，其表達量與細胞自噬活性相關，與Beclin1 聯合形成細胞自噬中心，其異常低表達參與多種惡性腫瘤發生。PI3KC3 是PI3K 的核心結構，可促進Atg21 等自噬蛋白結合到膜上并形成PAS，參與自噬延伸，將受損、變性蛋白質運輸到溶酶體中進行消化降解。文中宮頸癌病人接受術前新輔助化療后，病灶組織中自噬相關基因Beclin1、LC3-B、PI3KC3 mRNA的表達量均大幅增加，證實新輔助化療可有效增強宮頸癌細胞的自噬活力。

綜上所述，ⅠB～ⅡB期宮頸癌病人接受術前新輔助化療，可有效抑制癌細胞的增殖及侵襲活力、增強自噬活性，為后續根治性手術實施創造良好條件，推薦在日后同類病人中普及應用。