冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白與冠心病病人冠狀動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性

潘穎，戴力

作者單位：靈寶市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科，河南 三門峽472500

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，即冠心病，是最常見的心臟疾病，其發(fā)病率穩(wěn)步上升，是現(xiàn)代社會(huì)導(dǎo)致死亡的主要原因。冠狀動(dòng)脈（冠脈）造影是診斷冠心病的金標(biāo)準(zhǔn)，但是由于存在創(chuàng)傷較大、并發(fā)癥較多、射線防護(hù)困難、費(fèi)用高昂等缺陷，仍需要一些更簡單有效的生物標(biāo)志物來預(yù)測。冷誘導(dǎo)RNA結(jié) 合 蛋 白（cold-inducible RNA-binding protein，CIRP）是一種保守的RNA 結(jié)合蛋白，參與多種mRNA 的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，可在低溫、低氧、化學(xué)物質(zhì)等應(yīng)激環(huán)境中誘導(dǎo)表達(dá)。近年研究發(fā)現(xiàn)，CIRP 可促進(jìn)炎性因子的釋放，在腹主動(dòng)脈瘤、結(jié)腸炎等疾病中發(fā)揮重要的病理作用。CIRP 的促炎效應(yīng)可能也參與冠心病的發(fā)生發(fā)展，與冠脈狹窄程度有關(guān)，但是國內(nèi)外尚無報(bào)道。因此，本研究旨在探討血清中CIRP 水平與冠心病病人冠狀動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年3月至2019 年12 月靈寶市第一人民醫(yī)院冠脈造影確診為冠心病196 例。參照文獻(xiàn)報(bào)道，根據(jù)Gensini評(píng)分分為3組，即輕度組（＜18分）、中度組（18 ～41分）、重度組（≥41分），分別為52、41、103 例。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）心臟瓣膜病、心肌病、肺源性心臟病等其他心臟疾病；（2）既往行經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療術(shù)或冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)；（3）妊娠或哺乳期婦女；（4）嚴(yán)重的肝腎功能障礙；（5）合并動(dòng)脈瘤、甲狀腺或腎上腺功能異常、血液系統(tǒng)疾病、急慢性感染、免疫系統(tǒng)疾病、腫瘤等疾病。所有病人或其近親屬已簽署知情同意書。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2 方法

1.2.1 基線臨床資料的收集 所有病人均于入院后收集各項(xiàng)臨床資料，包括年齡、性別、體質(zhì)量、身高、心率、收縮壓、舒張壓、高血壓與糖尿病病史等。次日清晨采集空腹靜脈血，由檢驗(yàn)科采用全自動(dòng)生化分析儀測定各項(xiàng)生化指標(biāo)，包括總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）、載脂蛋白A、載脂蛋白B、超敏C 反應(yīng)蛋白（high-sensitivity C-reaction protein，hs-CRP）、空腹血糖、血肌酐、血尿素氮。采用超聲心動(dòng)圖測定左心室舒張末期內(nèi)徑（left ventricular end-diastolic dimension，LVEDd）、左心室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）。

1.2.2 血清中CIRP 水平與炎性因子含量的測定 采集3 mL空腹靜脈血，3 000 r/min離心20 min，分離血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定血清中CIRP 水平、白細(xì)胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）含量。試劑盒由江蘇晶美生物科技有限公司提供。

1.2.3 冠脈造影與Gensini 評(píng)分 經(jīng)橈動(dòng)脈或股動(dòng)脈途徑行冠脈造影，由2 名專業(yè)醫(yī)師對(duì)冠脈病變情況進(jìn)行評(píng)估。采用Gensini 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)定量評(píng)價(jià)冠脈狹窄程度，各冠脈分支Gensini評(píng)分=單支冠脈狹窄程度積分×該支冠脈系數(shù)，最后總的冠脈Gensini評(píng)分為各分支評(píng)分之和。冠脈狹窄程度積分：狹窄程度≤25%記為1 分，26%～50%記為2 分，51%～75%記為4 分，76%～90%記為8 分，91%～99%記為16 分，100%記為32 分。冠脈系數(shù)：左主干為5；左前降支近段為2.5，中段為1.5，遠(yuǎn)段為1；第一對(duì)角支為1，第二對(duì)角支為0.5；左回旋支近段為2.5，中段和遠(yuǎn)段均為1；鈍緣支為1；右冠脈近、中、遠(yuǎn)段和后降支均為1。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。定性資料采用病人例數(shù)進(jìn)行表示，χ檢驗(yàn)比較組間差異。定量資料均符合正態(tài)分布，采用x ± s表示，單因素方差分析比較多組間差異，組內(nèi)兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)。采用Pearson 法分析CIRP 水平與各炎性因子含量的相關(guān)性。采用有序多分類logistic回歸模型分析冠脈狹窄程度的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。采用ROC 工作曲線分析CIRP 水平對(duì)重度冠脈狹窄的診斷價(jià)值。當(dāng)P ＜0.05時(shí)認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3

組病人基線臨床資料的比較 3 組病人TC、TG、LDL-C、HDL-C、hs-CRP、LVEDd、LVEF 比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），其余指標(biāo)比較均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。見表1。

2.2 血清中CIRP及炎性因子含量的檢測

與輕度組和中度組相比較，重度組血清中CIRP、IL-1β、IL-6、TNF-α 含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見表2。

2.3 CIRP水平與各炎性因子含量的相關(guān)性

相關(guān)分析結(jié)果顯示，CIRP 水平與IL-1β（r = 0.785，P ＜0.001）、IL-6（r=0.736，P ＜0.001）、TNF-α（r=0.739，P ＜0.001）含量呈正相關(guān)，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見圖1。

表2 冠心病196例血清中CIRP及炎性因子含量比較/（ng/L，x ± s）

2.4 冠脈狹窄程度的獨(dú)立危險(xiǎn)因素

將CIRP 及2.1 中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納入多因素logistic回歸 分析，結(jié) 果 顯 示CIRP（OR = 1.242，95%CI：1.134～1.361，P ＜ 0.001）、hs-CRP（OR = 1.774，95%CI：1.372～2.293，P ＜0.001）是冠脈狹窄程度的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，HDL-C（OR = 0.012，95%CI：0.000～0.493，P=0.020）是保護(hù)性因素，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

表1 冠心病196例基線臨床資料的比較

圖1 冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白（CIRP）水平與各炎性因子含量的相關(guān)性

表3 有序多分類logistic回歸模型分析冠脈狹窄程度的獨(dú)立危險(xiǎn)因素

2.5 CIRP水平對(duì)重度冠脈狹窄的診斷價(jià)值

采用ROC工作曲線評(píng)價(jià)CIRP水平對(duì)重度冠脈狹窄（Gensini 評(píng)分≥41 分）的診斷效能，結(jié)果顯示ROC 曲線下面積為0.972（95%CI：0.954～0.991，P ＜0.001），以血清CIRP水平＞110.70 ng/L作為截?cái)嘀禃r(shí)，對(duì)重度冠脈狹窄的診斷敏感度為0.854，特異度為0.968。見圖2。

圖2 ROC工作曲線分析冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白（CIRP）水平對(duì)重度冠脈狹窄的診斷價(jià)值

3 討論

CIRP 最初是在篩查紫外線誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子的過程中發(fā)現(xiàn)，后來被認(rèn)為是哺乳動(dòng)物中的第一個(gè)冷休克蛋白，屬于富含甘氨酸蛋白家族，氨基末端含有一個(gè)RNA 識(shí)別與結(jié)合域，羧基末端含有一個(gè)富含甘氨酸與精氨酸結(jié)構(gòu)域。隨后的研究表明，CIRP在包括心臟在內(nèi)的不同組織中表達(dá)，而且可在各種細(xì)胞

應(yīng)激中響應(yīng)，如低溫、缺氧，紫外線照射、氧化、高滲、熱休克、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等。在應(yīng)激條件下，CIRP的表達(dá)水平和定位發(fā)生改變，可從細(xì)胞核向細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移，在各種應(yīng)激中發(fā)揮保護(hù)作用。除了緩解應(yīng)激壓力，CIRP還參與細(xì)胞增殖、組織發(fā)育、晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)以及腫瘤的形成和發(fā)展。此外，CIRP還可以釋放到細(xì)胞外基質(zhì)與血液循環(huán)系統(tǒng)，作為一種損傷相關(guān)分子模式誘導(dǎo)促炎因子表達(dá)，參與急慢性炎癥疾病的病理過程。

考慮到CIRP 在細(xì)胞過程和疾病狀態(tài)中的多重作用，我們推測CIRP 可能參與冠心病的發(fā)生發(fā)展。因此，本研究對(duì)CIRP在冠心病病人中的水平進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)隨著冠脈狹窄程度的加重，血清CIRP 水平也明顯升高。通過多因素logistic 回歸分析，進(jìn)一步確定CIRP是冠脈狹窄程度的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。此外，hs-CRP 也作為危險(xiǎn)性因素被篩選出來，HDL-C 則是保護(hù)性因素，與其他文獻(xiàn)報(bào)道相一致。但是，LDL-C 納入模型后卻無顯著性差異，有研究報(bào)道LDL-C、HDL-C 在納入logistic 回歸模型后均無顯著性差異，本研究認(rèn)為該結(jié)果的不一致可能與納入因素的不同有關(guān)。此外，LDL-C/HDL-C 可能較兩單獨(dú)指標(biāo)更具有穩(wěn)定性，其應(yīng)用價(jià)值仍有待探討。ROC 工作曲線結(jié)果顯示，CIRP 具有較好的診斷效能，以血清CIRP 水平＞110.70 ng/L 作為截?cái)嘀禃r(shí)，對(duì)重度冠脈狹窄的診斷敏感度和特異度分別為0.854、0.968，為未來的臨床應(yīng)用提供了具體的參考數(shù)值。

冠心病是由基因、環(huán)境等多種因素共同引起的復(fù)雜異質(zhì)性疾病，其發(fā)病機(jī)制尚未明確，與炎癥、動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中新血管形成、血小板活化等多種病理過程有關(guān)。近年來，冠心病被認(rèn)為是一種慢性炎癥性疾病，炎癥細(xì)胞可被募集至受損的血管系統(tǒng)，分泌炎癥介質(zhì)，促進(jìn)斑塊形成，導(dǎo)致心肌細(xì)胞缺血缺氧，甚至壞死。本研究結(jié)果顯示，重度組病人血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 含量顯著高于輕度組和中度組，證實(shí)了炎癥反應(yīng)在冠脈狹窄程度中的病理作用。CIRP在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，如Qiang 等采用CIRP 重組蛋白刺激巨噬細(xì)胞，可促進(jìn)TNF-α 和高遷移率族蛋白1 大量釋放，并在體內(nèi)注射時(shí)引起炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致嚴(yán)重的組織損傷；Zhou 等發(fā)現(xiàn)CIRP 在敗血癥病人的外周血含量明顯升高，可作為預(yù)后預(yù)測的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；Sakurai等發(fā)現(xiàn)CIRP通過調(diào)節(jié)TNF-α和IL-23的產(chǎn)生來促進(jìn)腸道炎癥和結(jié)直腸腫瘤的發(fā)展。本文對(duì)CIRP 水平與各炎性因子含量進(jìn)行Pearson相關(guān)分析，結(jié)果顯示CIRP水平與IL-1β、IL-6、TNF-α含量均呈正相關(guān)，表明CIRP 可能通過炎癥反應(yīng)促進(jìn)冠脈狹窄。上述結(jié)果提示，CIRP可能是炎性因子表達(dá)上調(diào)的重要上游分子，其作用機(jī)制可能與細(xì)胞表明Toll 樣受體4結(jié)合，激活下游NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。

本研究的不足與展望：（1）本研究屬于單中心臨床研究，未來若能實(shí)施多中心研究，將為本文結(jié)論提供更多的證據(jù)支持；（2）未對(duì)CIRP 在冠脈狹窄中的作用機(jī)制進(jìn)行深入探討，下一步需要在體外細(xì)胞模型與體內(nèi)動(dòng)物模型中，通過RNA 干擾或敲基因等方法探討CIRP 的上下游調(diào)控機(jī)制，為CIRP 的應(yīng)用提供堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)；（3）CIRP 對(duì)冠心病病人遠(yuǎn)期預(yù)后的影響仍有待研究。

綜上所述，血清中CIRP水平與炎性因子含量呈正相關(guān)，與冠狀動(dòng)脈狹窄程度密切相關(guān)，有較好的預(yù)測與診斷價(jià)值。