邁康片的毒理安全性研究

錢星文，伍小妹，譚轉換

（東方藥林藥業有限公司，廣東廣州 510515）

研究發現，血脂與心腦血管疾病之間關系密不可分，血脂異常是導致動脈粥樣硬化性疾病、心肌梗死、中風的原因之一[1]。高脂血癥是以血漿中膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白升高和高密度脂蛋白降低為主要特征的一種全身性代謝性紊亂疾病。WHO報告指出，膽固醇水平升高是全球五大主要致死原因之一，高脂血癥已成為一個日益嚴重的社會公共衛生問題[2]。目前，我國國民的血脂異常率總體水平偏高但知曉率較低[3]，兒童青少年的高膽固醇血癥患病率也呈上升趨勢，未來我國成人血脂異常相關疾病的發生率將繼續加重[4]，而長期使用降脂藥物，除了不能完全達到預期降脂目標，還可能會帶來如肝臟和腎臟損傷、橫紋肌溶解、血糖異常、腹脹、腹瀉、記憶力減退和認知障礙等一系列副作用[5-7]。因此，尋找一種安全、有效、無不良反應的預防和輔助降血脂的保健產品至關重要。邁康片是南方醫科大學教授團隊經過多年的臨床實踐總結出來的、能夠有效輔助降血脂的中藥保健制劑，為更好地保證產品的臨床應用，本研究通過觀察藥物對大、小鼠的生理、病理影響，為其安全食用提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

廣東省醫學實驗動物中心提供的SPF級NIH種小鼠和SD種大鼠，動物生產許可證號SCXK（粵）2013-0002，動物使用許可證號SYXK（粵）2013-0011。

實驗動物環境為SPF級實驗動物室，溫度20～25 ℃，濕度40%～70%RH。實驗過程中對動物的處置符合實驗動物倫理學規定。

1.2 藥物與試劑

東方藥林牌邁康片，批號為：20180601，由靈芝、西洋參、葛根、三七、山楂、玉竹、黃精為原料，添加輔料制備而成，推薦每日服用量為5.64 g/60 kg.bw，東方藥林藥業有限公司提供。絲裂霉素C，浙江海正藥業股份有限公司；環磷酰胺（CP），上海華聯制藥有限公司；疊氮鈉、2-氨基芴（2-AF），Fluka公司；1,8-二羥基蒽醌，Aladdin公司；Dexon，Absin公司；試劑盒，日立公司、雅培公司；菌株，美國Molecular Toxicology公司。

1.3 主要儀器

GR85DA高壓滅菌鍋，致微（廈門）儀器有限公司；XS6001S動物秤，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；SPX-250智能生化培養箱，金壇市醫療儀器廠；VS-1300L-U超凈工作臺，蘇州安泰公司；OLYMPUS顯微鏡，OL YMPUS公司；日立7600全自動生化分析儀，日立公司；TC20細胞計數儀，美國BIO-RAD公司；雅培3700全自動血球計數儀，雅培公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 小鼠經口急性毒性實驗

采用最大耐受量（MTD）法進行急性毒性實驗。試驗前稱取20.0 g樣品用純凈水稀釋至40.0 mL，得到20.0 g/kg.bw的實驗劑量。選用體重18～22 g的健康NIH種小白鼠20只，雌雄各半。依據該樣品的最大可灌胃濃度、灌胃容量和安全系數，受試物劑量為20.0 g/kg.bw，禁食不禁水16 h后，間隔4 h灌胃2次，記錄7 d中小鼠中毒表現及死亡情況。

1.4.2 遺傳毒性實驗

1.4.2.1 Ames實驗

采用合格的鼠傷害沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株試驗菌株進行實驗。體外代謝活化系統為多氯聯苯誘導后制備的肝勻漿S9液。根據受試物情況，實驗設8 μg/皿、40 μg/皿、200 μg/皿、1 000μg/皿、5 000 μg/皿 5 個劑量組和自發回變、溶劑對照和陽性對照組。

1.4.2.2 小鼠骨髓細胞微核試驗和精子畸形試驗

根據急性毒性實驗結果，設受試物3個劑量分別為10.0 g/kg.bw、5.0 g/kg.bw、2.5 g/kg.bw，陽性對照組給予50 mg/kg.bw環磷酰胺，陰性對照組給予等量的純凈水。

骨髓細胞微核試驗采用30 h給受試物法進行。選小鼠50只，平均分為5組，雌雄各半，每組根據實驗劑量給予藥物染毒；24 h后以同劑量進行第二次染毒；6 h后，處死小鼠取胸骨骨髓材料制片、染色，油鏡下觀察每只小鼠1 000個嗜多染紅細胞（PCE），計數含有微核的嗜多染紅細胞數、各組微核發生率，同時計數200個PCE時觀察到的正染紅細胞（NCE），求出嗜多染紅細胞數與成熟紅細胞比值（PCE/RBC），按泊松分布法作統計學處理。

精子畸形試驗選擇25只雄性小鼠，平均分成5組，每組每天根據實驗劑量灌胃一次，連續灌胃5 d，于首次染毒后第35 d處死動物取雙側附睪按照常規制片、染色，每只小鼠觀察1 000條完整精子，計數畸變精子的數量和類型及各組畸變精子發生率，按Wilcoson秩和檢驗方法作統計學處理。

1.4.3 亞急性毒性

設低、中、高3個劑量組，分別為2.4 g/kg.bw、4.7 g/kg.bw、9.4 g/kg.bw，相當于人擬用劑量的25倍、50倍、100倍。每天按設計劑量分別稱取樣品14.1 g、28.2 g、56.4 g，分別用純凈水稀釋至120 mL，制成低、中、高劑量組受試物。

80只大鼠，體重為79.1±6.42 g，在實驗室條件下適應3 d后，隨機分為3個劑量組及純水對照品組，每組20只，雌雄各半，單籠喂養，每日灌胃給予各劑量組樣品溶液2.0 mL/100 g.bw，純水對照組每日按同樣的量灌胃給予純凈水，每鼠自由飲食，連續30 d。記錄實驗動物的一般情況，實驗結束并禁食16 h后，處死并檢查實驗動物的體重、血液學指標、生化指標以及病理變化。各組數據均采用SPSS11.0進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 小鼠急性毒性實驗

NIH種小白鼠7 d中毒表現及死亡情況見表1。結果未見動物出現不良反應，得到雌雄小鼠經口急性毒性MTD＞20.0 g/kg.bw，根據急性毒性分級，受試物邁康片屬于無毒級物質。

表1 邁康片急性毒性實驗結果（n=5，±s）

表1 邁康片急性毒性實驗結果（n=5，±s）

性別 始重/g 終重/g 死亡數/只 MTD/（g/kg.bw）雌 19.6±0.7 24.9±0.7 0 ＞20.0雄 19.8±0.9 27.1±0.8 0 ＞20.0

2.2 遺傳毒性實驗

2.2.1 Ames實驗

實驗結果表明，邁康片對鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株實驗菌株在加及不加S9時，5個劑量組回變菌落數均未超過溶解對照菌落數2倍，所有陽性物對照結果敏感，無可重復的、有統計學意義的陽性反應的測試點，受試物的Ames實驗結果為陰性。

2.2.2 小鼠骨髓微核試驗

小鼠骨髓微核試驗結果見表2。與陰性對照比較，邁康片各劑量組的微核率均無顯著性差異（P＞0.05），實驗結果為陰性。

表2 小鼠骨髓微核實驗結果（n=5，±s）

表2 小鼠骨髓微核實驗結果（n=5，±s）

注：**表示與陰性對照組比較P＜0.01。

性別 劑量/（g/kg·bw） PCE數/個 微核數/個 微核率/‰ PCE/NCE雄5 000 7 1.4±0.9 0.69±0.01 2.5 5 000 6 1.2±1.3 0.70±0.04 5.0 5 000 5 1.0±1.0 0.69±0.02 10.0 5 000 7 1.4±0.5 0.73±0.05 CP（0.05） 5 000 137 27.4±19.9** 0.65±0.02 0 5 000 8 1.6±1.1 0.71±0.05 2.5 5 000 6 1.2±0.4 0.70±0.04 5.0 5 000 5 1.0±0.7 0.71±0.02 10.0 5 000 5 1.0±0.7 0.68±0.06 CP（0.05） 5 000 120 24.0±11.0** 0.66±0.02 0雌

2.2.3 小鼠精子畸變試驗

小鼠精子畸變試驗結果如表3所示，與陰性對照組比較，邁康片各劑量組的精子畸變率的結果均為陰性，無統計學意義（P＞0.05）。

表3 小鼠精子畸變分析結果（n=5，±s）

表3 小鼠精子畸變分析結果（n=5，±s）

注：**表示與陰性對照組比較P＜0.01。

劑量/（g/kg·bw） 精子數/條 精子畸形類型 精子畸形數/條 精子畸形率/‰不定型 胖頭 香蕉型 其他10.0 5 000 51 3 3 11 68 13.6±4.3 5.0 5 000 43 3 4 9 59 11.8±2.2 2.5 5 000 50 2 3 9 64 12.8±2.2 0.0 5 000 35 3 4 11 53 10.6±2.5 CP（0.05） 5 000 189 33 35 34 291 58.2±4.4**

2.3 亞急性毒性實驗

2.3.1 一般情況觀察結果

實驗期間，各組大鼠未出現拒食現象，一般體征情況未見異常。如表4～6所示，與純水對照組比較，各組動物每周體重和總增重、進食量和總進食量、食物利用率和總食物利用率均差異無統計學意義（P＞0.05），表明受試物對大鼠生長無影響。

表4 實驗期間大鼠的體重變化（n=10，±s） 單位：g

表4 實驗期間大鼠的體重變化（n=10，±s） 單位：g

劑量/（g/kg.bw） 始重 第1周 第2周 第3周 第4周 總增重雄0 80.02±5.36 145.13±12.21 202.13±15.38 277.97±18.12 310.06±17.42 230.04±15.59 2.4 80.39±5.35 145.57±13.42 201.10±18.54 267.80±22.75 296.63±25.52 216.24±21.41 4.7 80.80±4.97 145.10±9.63 197.66±12.25 269.37±16.94 297.35±21.74 216.55±21.53 9.4 81.69±6.12 145.27±11.64 199.39±14.16 268.20±18.86 297.88±19.38 216.19±16.34雌0 81.19±3.22 131.10±5.57 165.72±10.78 184.62±7.15 206.44±9.29 125.25±9.59 2.4 76.47±5.01 132.44±7.22 158.65±8.36 182.25±8.17 198.54±7.99 122.07±9.02 4.7 75.18±10.07 125.77±12.17 161.95±8.93 183.01±10.50 206.67±9.07 131.49±8.74 9.4 76.23±5.76 127.08±5.14 161.00±4.88 182.44±9.53 202.55±8.02 126.32±5.28

表5 實驗期間大鼠每周的進食量及總進食量（n=5，±s） 單位：g

表5 實驗期間大鼠每周的進食量及總進食量（n=5，±s） 單位：g

性別 劑量/（g/kg.bw） 第1周 第2周 第3周 第4周 總進食量133.1±9.0 168.2±22.1 215.2±28.4 223.6±22.4 740.1±58.8 2.4 132.5±18.3 167.6±19.5 212.7±29.4 225.1±28.8 737.9±65.8 4.7 130.5±8.0 163.0±11.5 207.4±17.8 230.4±27.5 731.3±50.6 9.4 131.8±11.2 157.0±19.2 203.5±38.7 225.3±65.4 717.6±72.9 0雄133.0±13.5 145.2±10.0 167.0±9.9 179.1±24.4 624.3±23.5 2.4 130.7±17.9 144.7±27.2 163.8±25.9 175.9±10.8 615.1±55.1 4.7 128.2±14.7 151.6±22.4 163.2±23.8 166.2±25.3 609.2±26.7 9.4 133.7±11.8 143.1±15.8 169.0±32.9 181.7±30.1 627.5±60.6 0雌

表6 實驗期間大鼠每周食物利用率及總食物利用率（n=10，±s） 單位：%

表6 實驗期間大鼠每周食物利用率及總食物利用率（n=10，±s） 單位：%

性別 劑量（g/kg.bw） 第1周 第2周 第3周 第4周 總食物利用率49.14±7.67 34.24±4.27 35.74±4.90 14.48±1.93 31.24±3.06 2.4 49.95±9.51 33.52±6.01 32.05±6.07 13.02±2.54 29.60±4.77 4.7 49.44±6.06 32.38±3.69 34.86±5.69 12.30±3.23 29.75±3.77 9.4 48.29±3.68 34.99±6.60 34.78±7.03 13.85±3.32 30.34±3.35 0雄37.98±7.34 23.79±7.72 11.20±3.22 12.32±4.61 20.07±1.49 2.4 43.41±5.74 18.64±4.87 14.66±5.04 9.36±4.92 20.00±2.44 4.7 40.21±8.70 24.94±9.95 13.23±4.89 14.50±3.95 21.47±1.99 9.4 38.34±4.62 24.13±4.93 13.19±4.77 11.55±5.65 20.38±2.96 0雌

2.3.2 受試物對大鼠血液學指標的影響

由表7和表8可見，實驗末期，與純水對照組比較，雄性低、中劑量組的血紅蛋白、各劑量組的嗜酸性粒細胞，雌性低、中劑量組的血小板差異有統計學意義（P＜0.05），但數值仍在本實驗室參考值范圍內（雄性血紅蛋白130.6～174.5 g/L、嗜酸性粒細胞0.45%～1.55%；雌性血小板515.3～1 126.9 109cell/L）；其余指標各劑量組的各項指標與純水對照組比較均無統計學意義（P＞0.05），說明該受試樣品30 d喂養實驗血常規指標無異常。

表7 受試物30 d喂養實驗終期血液學指標（n=10，±s）

表7 受試物30 d喂養實驗終期血液學指標（n=10，±s）

注：*表示與純水對照組比較P＜0.05。

性別 劑量/（g/kg.bw） 白細胞數/（×109/L） 紅細胞數/（×1012/L） 血紅蛋白/（g/L） 血小板/（×109/L）11.41±3.45 6.86±0.42 151.0±7.8 821.71±29.4 2.4 11.72±1.99 7.20±0.48 158.3±9.3* 746.81±83.2 4.7 9.68±1.28 7.08±0.32 157.9±6.6* 807.21±53.1 9.4 10.45±1.78 6.95±0.17 151.6±4.7 858.61±19.9 0雄7.34±0.93 6.93±0.22 152.0±4.7 907.41±03.7 2.4 7.54±1.55 6.92±0.30 152.4±5.1 775.92±13.3*4.7 6.91±1.40 7.03±0.28 149.5±7.6 808.61±77.1*9.4 6.56±2.09 7.11±0.30 151.0±9.5 850.01±48.3 0雌

表8 受試物30 d喂養實驗終期白細胞分類指標（n=10，±s） 單位：%

表8 受試物30 d喂養實驗終期白細胞分類指標（n=10，±s） 單位：%

注：*表示與純水對照組比較，P＜0.05。

性別 劑量/（g/kg·bw） 中性 淋巴 單核 嗜酸 嗜堿0雄6.65±1.00 88.91±1.63 3.60±1.40 0.62±0.10 0.22±0.12 2.4 6.48±2.28 88.01±2.84 4.34±0.74 0.89±0.29* 0.29±0.13 4.7 8.37±3.09 85.22±6.06 5.11±3.18 0.87±0.27* 0.43±0.41 9.4 7.64±1.14 87.18±1.63 3.99±0.99 0.88±0.26* 0.32±0.17 5.33±1.80 89.32±3.01 3.93±1.06 1.24±0.37 0.20±0.08 2.4 5.51±2.68 89.50±3.25 3.58±1.33 0.15±0.34 0.25±0.15 4.7 5.04±1.80 89.82±2.28 3.59±0.95 1.25±1.05 0.26±0.16 9.4 4.55±2.28 90.68±3.30 3.38±1.47 1.18±0.48 0.21±0.16 0雌

2.3.3 受試物對大鼠生化指標的影響

由表9可見，實驗末期，與純水對照組比較，雌性低、高劑量組肌酐、低劑量組尿素氮差異有統計學意義（P＜0.05），但數值仍在本實驗室參考值范圍內；各劑量組其余指標與純水對照組比較，差異無統計學意義（P＞0.05），說明該受試物樣品30 d喂養實驗生化指標無異常。

表9 受試物30 d喂養實驗終期生化指標（n=10，±s）

表9 受試物30 d喂養實驗終期生化指標（n=10，±s）

注：*表示與純水對照組比較P＜0.05。

2.4 4.7 9.4 0 2.4 4.7 9.4谷丙轉氮酶 /（U/L） 29.3±7.4 27.3±6.2 23.7±3.2 24.6±2.8 22.1±5.5 27.4±6.3 23.1±4.3 23.2±6.0谷草轉氮酶 /（U/L） 113.5±25.7 90.7±8.8 105.1±22.0 108.5±17.0 95.5±20.7 93.5±11.2 85.3±19.7 77.1±15.4總蛋白 /（g/L） 56.91±3.12 54.03±1.30 55.02±2.26 55.01±1.98 58.08±2.06 58.34±2.09 58.62±2.05 59.33±1.87白蛋白 /（g/L） 27.41±1.35 26.40±0.67 26.73±1.12 26.59±0.71 28.93±1.30 28.73±0.98 28.97±1.08 29.46±1.34 A/G 0.93±0.04 0.96±0.03 0.95±0.04 0.94±0.05 0.99±0.03 0.97±0.04 0.98±0.03 0.99±0.04劑量 /（g/kg·bw） 0 2.4 4.7 9.4 0 2.4 4.7 9.4肌酐 /（μmmol/L） 64.60±4.2557.90±1.37* 62.20±3.99 60.50±2.46* 66.80±3.97 71.80±3.71 68.90±5.11 67.70±4.85尿素氮 /（mmol/L） 7.12±0.66 6.43±0.60 6.74±0.46 7.16±0.77 7.96±0.93 7.35±0.83 7.61±1.02 6.77±1.06血糖 /（mmol/L） 4.59±0.68 4.76±0.44 4.23±0.54 4.92±0.75 5.34±0.50 5.16±0.33 5.28±0.66 5.98±1.14甘油三酯 /（mmol/L） 1.12±0.30 0.98±0.43 1.45±0.63 1.22±0.37 1.05±0.29 1.14±0.29 1.16±0.47 1.48±0.75總膽固醇 /（mmol/L） 1.69±0.19 1.52±0.25 1.71±0.15 1.65±0.21 1.70±0.20 1.77±0.35 1.81±0.29 1.69±0.36指標 雄 雌0

2.3.4 臟器重量和臟體比值

受試物各劑量組動物的大體解剖檢查未發現異常和明顯病變。如表10和表11所示，臟器重量及臟體比值與純水對照組比較，差異無統計學意義，該受試物樣品30 d喂養實驗臟器重量和臟體比值指標正常。

表11 受試物30 d喂養實驗大鼠臟體比的結果（n=10，±s） 單位：%

表11 受試物30 d喂養實驗大鼠臟體比的結果（n=10，±s） 單位：%

性別 劑量（g/kg·bw） 肝體比 脾體比 腎體比 睪丸體比雄0.30±0.02 2.82±0.14 0.72±0.04 1.04±0.10 2.4 0.31±0.02 2.96±0.35 0.75±0.07 1.05±0.07 4.7 0.31±0.02 3.04±0.29 0.74±0.06 1.05±0.08 9.4 0.33±0.02 3.03±0.23 0.75±0.04 1.05±0.07 0 0.34±0.03 2.97±0.39 0.71±0.12 2.4 0.36±0.05 2.94±0.14 0.68±0.06 4.7 0.34±0.03 2.99±0.18 0.73±0.04 9.4 0.35±0.03 3.19±0.27 0.73±0.03 0雌

表10 受試物30 d喂養實驗大鼠臟器重量結果（n=10，±s） 單位：g

表10 受試物30 d喂養實驗大鼠臟器重量結果（n=10，±s） 單位：g

性別 劑量（g/kg·bw） 心重 肝重 脾重 腎重 睪丸重0.94±0.07 8.73±0.55 0.81±0.08 2.23±0.18 3.21±0.19 2.4 0.92±0.09 8.76±1.25 0.79±0.14 2.22±0.19 3.12±0.17 4.7 0.93±0.08 9.00±0.62 0.73±0.07 2.19±0.23 3.11±0.18 9.4 0.97±0.08 9.05±1.10 0.77±0.11 2.24±0.23 3.12±0.26 0雄雌0.71±0.04 6.12±0.78 0.59±0.08 1.46±0.24 2.4 0.72±0.10 5.83±0.22 0.53±0.06 1.34±0.12 4.7 0.71±0.08 6.18±0.47 0.58±0.08 1.50±0.11 9.4 0.70±0.07 6.48±0.70 0.60±0.08 1.47±0.06 0

2.3.5 組織學檢查結果

試驗結束時，通過鏡下觀察，對各劑量組實驗動物進行重要臟腑、器官的大體組織學檢查。結果如下：雄性對照組1例動物肝臟見3個小壞死灶、雌性高劑量組1例動物肝臟見1個小壞死灶，均伴有炎細胞浸潤；雌雄對照組各1例動物腎皮質間質見1個小灶有炎細胞浸潤；其余動物臟體組織學檢查結果無病變、無異常表現。對照組與高劑量組大鼠的肝臟、腎臟、胃及小腸、脾臟和性腺組織病理學觀察結果大致相同，未見與受試物有關的病理改變，說明邁康片不會引起大鼠的亞急性中毒。

《中國心血管病報告2018》指出，2016年的統計數據顯示，我國居民心血管?。–VD）死亡率居首位，占居民死因構成比的40%以上，而高脂血癥已明確是CVD的主要危險因素，預計2010—2030年期間我國人群血清膽固醇水平的異常將導致心血管病事件增加920萬[8-9]。血脂異常的影響因素眾多，如不健康的生活方式、超重、中心性肥胖、高血壓、糖尿病患者、冠心病家族史、血脂異常家族史等，還與性別、年齡、民族、水產品食用頻度、奶類食用頻度、生活工作緊張度、體質指數等因素有關[10-12]。高脂血癥還有可能會加大非酒精脂肪性肝病[13]、慢性腎?。–KD）[14]、急性胰腺炎（AP）[15]等疾病的風險。邁康片由靈芝、西洋參、葛根、三七、山楂、玉竹、黃精為主要原料組成，主要成分為多糖、皂苷類化合物，具有降血脂、降血糖的功效，收列在可用于保健食品的原料目錄中。

3 結語

邁康片對雌性和雄性小鼠的MTD均＞20.0 g/kg.bw，屬于無毒級；3項遺傳毒性實驗結果均為陰性；30 d喂飼試驗期間，各項指標正常，未發現與受試樣品相關的病理組織學改變。綜上所述，本產品是一種具有輔助降血脂作用的、食用安全的保健食品，具有良好的開發前景，可以為中藥在治療高血脂癥的研究提供參考依據，推動我國中醫藥的發展。