白芍不同采收期質量綜合評價

王斌 林欽賢 梁偉龍 康志英 王其豐 張華勇

摘要?[目的]考察安徽亳州白芍不同采收期有效成分含量的動態變化，結合藥材質量、產量和商品性狀等因素綜合考慮，確定其最佳采收期。[方法]采集亳州地區不同采收期的白芍藥材，測定其浸出物、沒食子酸、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷和苯甲酰芍藥苷的含量，綜合評價白芍藥材質量。[結果]白芍的有效成分含量隨著生長時間顯著變化，以5年生所含的有效成分含量最高，而同一年份中以9—10月所含的有效成分含量較高。[結論]綜合種植成本、經濟效益、藥材質量和產量考慮，亳州地區白芍應以4年生9—10月份采收為宜。

關鍵詞?白芍;采收期;有效成分;含量測定;質量評價;亳州

中圖分類號?R282.4;S567.2?文獻標識碼?A?文章編號?0517-6611（2021）03-0185-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.03.049

Abstract?[Objective]To?study?the?dynamic?changes?of?active?components?in?different?harvesting?time?of?Paeoniae?radix?alba?in?Bozhou?City?of?Anhui?Province.?The?best?harvesting?time?was?determined?based?on?the?factors?of?quality，?yield?and?commodity?character.?[Method]The?contents?of?extracts，?gallic?acid，?catechin，?albiflorin，?paeoniflorin?and?benzoyl?paeoniflorin?were?determined?by?collecting?the?medicinal?materials?of?Paeoniae?radix?alba?from?different?harvesting?time?in?Bozhou?area?and?the?quality?was?evaluated?comprehensively.?[Result]The?active?components?contents?of?Paeoniae?radix?alba?changed?significantly?with?growth?time.?The?content?in?five?years?old?was?the?highest，?while?the?content?in?the?same?year?was?higher?from?September?to?October.?[Conclusion]Considering?planting?costs，?economic?benefits，?medicinal?material?quality?and?yield?comprehensively，Paeoniae?radix?alba?in?Bozhou?area?should?be?harvested?for?four?years?old?from?September?to?October.

Key?words?Paeoniae?radix?alba;Harvesting?time;Active?components;Content?determination;Quality?evaluation;Bozhou

白芍始載于《神農本草經》[1]，為毛茛科植物芍藥（Paeonia?lactiflora?Pall.）的干燥根，味苦、酸，微寒，歸肝、脾經，具有養血調經、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽的功效[2]。白芍主產于浙江安陽、磐安（杭白芍）、安徽亳州（亳白芍）及四川中江、渠縣、廣安（川白芍），其中以安徽亳州產量大、質量好，是白芍道地藥材主產區[3]。現代藥理研究表明，白芍具有止痛、抗炎、保肝等藥理作用，中醫臨床上用于類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡等自身免疫病，療效確切[4]。

白芍總苷（total?glucosides?of?paeony，TGP）為白芍中提取的主要有效成分，主要含有芍藥苷、芍藥內酯苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等萜苷類化合物，其中以芍藥苷最為典型，含量占芍藥總苷中總苷量的90%以上，此外還含有沒食子酸、苯甲酸、兒茶素等[5]。基于此，該試驗采集亳州地區不同采收月份、不同生長年限的白芍藥材，測定其浸出物、沒食子酸、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷和苯甲酰芍藥苷的含量，結合多個有效成分含量綜合評價不同采收期的白芍藥材質量，以確定白芍的最佳采收期。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?儀器。DHG-9245A型電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）;HWS-26型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學儀器有限公司）;TC-500型電熱套（海寧市新華醫療器械廠）;XS-204型萬分之一電子天平（梅特勒-托利多國際貿易（上海）有限公司）;MX5型百萬分之一電子天平（梅特勒-托利多國際貿易（上海）有限公司）;KQ-500DA型數控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;DIONEX?Ultimate?3000高效液相色譜儀（賽默飛世爾（中國）科技有限公司）。

1.1.2?試劑。沒食子酸（110831-201605，中國食品藥品檢定研究院，純度90.8%）;兒茶素（110877-201604，中國食品藥品檢定研究院，純度99.2%）;芍藥內酯苷（MUST-16051601，成都曼斯特生物科技有限公司，純度99.09%）;芍藥苷（110736-201539，中國食品藥品檢定研究院，純度96.4%）;苯甲酰芍藥苷（MUST-16061803，成都曼斯特生物科技有限公司，純度99.28%）;甲醇（HPLC，Merck），磷酸（HPLC，阿拉丁），甲醇、乙醇等均為分析純，超純水。

1.1.3?試材。白芍藥材來自安徽省亳州市譙城區魏崗鎮高樓村白芍種植基地，經廣州市香雪制藥股份有限公司康志英制藥高級工程師鑒定為毛茛科植物芍藥（Paeonia?lactiflora?Pall.）的干燥根。

1.2?方法

1.2.1?樣品處理。

1.2.1.1?不同采收月份樣品。種子法繁殖的白芍植株，2017年3—12月定期采挖，每月按照梅花點法取樣，分別于固定的地塊每個點取樣6株，平均一株重量約0.35?kg，共30株。

1.2.1.2?不同生長年限樣品。種子法繁殖的白芍植株，2017年10月采挖，1～5年生，每生長年限各30株。

1.2.1.3?樣品處理。分別將以上的樣品抖凈泥土，測量鮮根重。白芍鮮品按《中國藥典》2015年版[2]白芍項下方法進行加工：洗凈，除去頭尾和細根，置沸水中煮后除去外皮，經曬干或烘干至水分合格，稱干重，粉碎過2號、4號篩。

1.2.2?浸出物含量測定。

1.2.2.1?水溶性浸出物。按《中國藥典》2015年版（通則2201）水溶性浸出物測定法項下的熱浸法測定。

1.2.2.2?醇溶性浸出物。按《中國藥典》2015年版（通則2201）醇溶性浸出物測定法項下的熱浸法測定，用75%乙醇作溶劑。

1.2.3?含量測定。

1.2.3.1?色譜條件。依利特Sino?Chrom?ODS-BP（4.6?mm?×?250?mm，5?μm）;流動相：乙腈（A）、0.1%磷酸（B），按照表1的洗脫程序進行洗脫;檢測波長：230?nm;流速：1.0?mL/min;柱溫：30?℃;進樣量：10?μL。

1.2.3.2?對照品溶液制備。分別精密稱取沒食子酸等5種對照品適量，加50%甲醇配制成含沒食子酸0.005?mg/mL、兒茶素0.01?mg/mL、苯甲酰芍藥苷0.005?mg/mL、芍藥苷0.1?mg/mL、芍藥內酯苷0.04?m/mL的混合對照品溶液。

1.2.3.3?供試品溶液制備。取白芍粉末（過四號篩）0.1?g，精密稱定，置于50?mL容量瓶中，加入50%乙醇約35?mL，超聲處理（功率240?W，頻率45?kHz）30?min，放冷，加50%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

1.2.3.4?線性關系考察。將“1.2.3.2”的混合標準溶液分別進樣1、3、5、7、10、15?μL檢測，在“1.2.3.1”色譜條件下進行分析，以進樣量為橫坐標（X）、峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線，進行線性回歸。

1.2.3.5?穩定性試驗。精密吸取“1.2.3.3”的供試品溶液10?μL，分別于0、2、4、6、8、12、24?h在“1.2.3.1”色譜條件進樣分析，測定各成分峰面積。

1.2.3.6?精密度試驗。取“1.2.3.2”的混合標準溶液，按“1.2.3.1”色譜條件進樣測定，連續進樣6次，計算各成分峰面積的RSD。

1.2.3.7?重復性試驗。取同一批藥材，按“1.2.3.3”方法平行制備供試品溶液6份，按“1.2.3.1”色譜條件進樣分析，測定各成分峰面積。

1.2.3.8?加樣回收試驗。精密稱取已知含量的白芍粉末共6份，每份0.05?g，分別精密添加與5個成分含量等量的對照品，按照“1.2.3.3”方法平行制備供試品溶液，在“1.2.3.1”色譜條件下進樣分析，計算加樣回收率。

1.2.3.9?樣品含量的測定。分別取不同生長年限、不同采收月份的白芍樣品，按“1.2.3.3”方法制備供試品溶液，再按“1.2.3.1”色譜條件進樣測定，平行操作3次，記錄峰面積并按標準曲線法計算樣品含量。

1.2.4?不同采收月份白芍物質的積累動態。用電子天平測定不同采收月份白芍的根鮮重、根干重，計算藥材折干率。

1.2.5?不同生長年限白芍物質的積累動態。分別用電子天平、游標卡尺測定不同生長年限白芍的根鮮重、根干重、藥材長短、直徑等，計算藥材的折干率。

2?結果與分析

2.1?色譜條件及系統適應性試驗

從對照品溶液與樣品溶液的液相色譜圖（圖1）可以看出，相同分析條件下，樣品溶液與對照品溶液中對應的分析時間下均有5個色譜峰出現，經計算樣品與其他各成分峰的分離度>1.5，理論板數按芍藥苷（峰4）計算不低于2?000，符合要求。

2.2?標準曲線的繪制?以進樣量（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，數據經過回歸處理，得各成分的回歸方程，結果見表2。

2.3?穩定性試驗?按照“1.2.3.5”方法進行操作，測定各成分峰面積。結果顯示，沒食子酸、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷5個成分峰面積的RSD均小于2.0%，說明供試品溶液在室溫下24?h內基本穩定。

2.4?精密度試驗?按照“1.2.3.6”方法進行操作，重復進樣6次，定量測定沒食子酸、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷5個成分的含量，計算其RSD分別為1.2%、1.4%、0.8%、0.4%、1.5%，說明儀器精密度良好。

2.5?重復性試驗?按照“1.2.3.7”方法進行操作，測定沒食子酸、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷的含量分別為0.103%、0.459%、1.303%、2.607%、0.126%，RSD分別為1.3%、1.1%、0.7%、0.6%、0.9%，符合規定。

2.6?加樣回收率試驗

按照“1.2.3.3”方法平行制備供試品溶液，在“1.2.3.1”色譜條件下進樣分析，計算加樣回收率，結果符合規定，見表3。

2.7?不同采收月份白芍物質的積累動態

測定不同采收月份的白芍生長量，結合每公頃種植白芍45?000～60?000株，以3?500株計算白芍的產量，產量（kg/hm2）=單株藥材干重×3?500×15，結果見表4。從表4可以看出，9—10月白芍藥材根部干物質積累量達到最高峰，平均為0.187?kg/株，產量也較高，此時白芍藥材粉性足、商品性狀良好、經濟附加值高，可以作為最佳采收期。

2.8?不同采收月份白芍各成分含量的測定

從表5可以看出，5個成分含量總和以4月份含量為最高，4月份之后含量開始下降，9—10月份含量變化較為平穩，12月份含量回升，水溶性浸出物、醇溶性浸出物變化規律與有效成分含量基本一致。在采收月份內，白芍的有效成分含量呈現出波動的趨勢，9—10月份處于相對穩定的狀態，且藥材粉性足、指標成分芍藥苷含量較高、折干率較高、產量高，此時采收較為合理，可作為最佳采收期。

2.9?不同生長年限白芍物質的積累動態

從表6可以看出，白芍2年生干物質增加較快，較1年生白芍干重增加了122.9%，3年生、4年生白芍干重比前一年的增加率均在30%以上，5年生白芍干重比前一年的增加率僅為8.1%，與4年生比較產量增加不多。

2.10?不同生長年限白芍各成分含量的測定

從表7可以看出，5個成分含量總和以栽后生長5年的白芍中含量最高，4年生含量最低，但芍藥苷含量仍高達1.842%，符合《中國藥典》芍藥苷不得低于1.6%的規定。1～2年生白芍的有效成分含量較高，但產量較低，且白芍藥材根細小、質地疏松捏之下陷、性狀不佳，經濟效益差;3年生白芍雖有效成分含量較高，但產量一般，經濟效益較差;5年生白芍雖產量及有效成分含量都較好，但有部分根莖出現木質化和空心，降低了藥材品質，且比前一年產量增加不多，種植成本過高。確定最佳采收期需要從藥材的產量與質量2個方面進行綜合考慮，當產量與質量的變化趨勢不一致時，就要考慮活性成分的總獲得量[6]。綜合種植成本、經濟效益、藥材質量和產量考慮，白芍藥材最佳采收年限應為4年，這樣既能保證藥材的質量，又有較高的產量。

3?結論與討論

該研究建立了HPLC法同步測定白芍藥材中沒食子酸、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷和苯甲酰芍藥苷的含量，方法準確可靠、重復性良好，為建立白芍的多成分質量控制方法提供了科學依據。

關于白芍適宜采收期的研究[7-13]，一般為2～5年、6—10月不等。該試驗綜合分析了白芍植株的生長情況以及白芍中多種有效成分含量累積、浸出物的變化情況，確定白芍以4年生較好，而同一年份中以9—10月較好，此時采收的白芍藥材形體飽滿、粉性足，質量和產量均高，可作為最佳的采收期，這與金傳山等[9]的研究結果基本一致。

此次試驗研究結果表明，不同采收期白芍的有效成分含量存在差別，結合白芍藥材有效成分的積累量、種植成本、土地利用率、產量和經濟效益等因素綜合考慮，亳州地區白芍應在移栽4年后的9—10月晴天采收，此時收獲的白芍藥材多種有效成分較為穩定、粉性足、商品性狀良好、產量高，經濟附加值也高。

參考文獻

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