規模豬場副豬嗜血桿菌病防控免疫試驗研究

楊國麗，王克才，王 軍，陳 峰，董素鳳，郝運河，李曉娥，張繼一

（1．遼寧省農業發展服務中心，遼寧 沈陽110000；2．山東省動物疫病預防與控制中心，山東 濟南250000；3．阜新市現代農業發展服務中心，遼寧 阜新123000）

副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）引起的一種豬的傳染病，臨床以體溫升高、關節膿腫、呼吸困難、多發性漿膜炎和高死亡率為特征[1]，嚴重危害仔豬和青年豬的健康。斷奶仔豬和保育階段的5～8周齡的豬易患病[2]，發病率一般在10%～15%，嚴重時死亡率可達50%。此外，HPS還可引起敗血癥，在急性感染后可能留下后遺癥，即母豬流產、公豬慢性跛行。HPS屬革蘭氏陰性短小桿菌，其形態多變，有15個以上血清型[3]，其中血清型4、5、13最為常見（占70%以上）。該菌生長時嚴格需要煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD），不需要X因子（血紅素或其他卟啉類物質），在血液培養基和巧克力培養基上生長，菌落小而透明，在血液培養基上無溶血現象；在葡萄球菌菌苔周圍生長良好，形成衛星現象。據報道，副豬嗜血桿菌病的真實發病率可能為實際確診的10倍之多[4]。

副豬嗜血桿菌與其他病毒，如豬繁殖與呼吸綜合征、圓環病毒、豬流感和豬呼吸道冠狀病毒[5-6]或細菌協同時比較容易引發動物一些疾病[7-8]。近年來，從患肺炎的豬中分離出HPS的概率越來越高，與支原體肺炎的日趨流行有關，也與病毒性肺炎的日趨流行有關[9-10]。研究表明，副豬嗜血桿菌病在支原體感染豬肺中的檢出率可達51.2%[5]。針對副豬嗜血桿菌病防控通常的做法是采用藥物預防、治療及進行免疫[11]。而針對該病的免疫目前面臨的主要問題是HPS對誘發疾病的免疫效果不清，誘發疾病免疫不佳。因此，文章進行HPS防控中的免疫試驗研究。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗在沈陽博睿農牧科技有限公司進行。選取21日齡臨床健康保育仔豬共300頭，分成3組，每組100頭，分別為試驗組、對照組和空白組。使用Trizol快速提取核酸DNA和/或RNA的方法，對采集的臨床樣品進行核酸提取，用核酸檢測方法和測序分析，分離到該場的主要HPS血清型是1型和5型。

1.2 試驗疫苗

針對性免疫疫苗使用嗜凈諾（副豬嗜血桿菌病二價滅活疫苗1型LC株+5型LZ株）購自浙江諾倍威生物技術有限公司（No.2017010）。肌肉注射3 mL/頭，3周后加強免疫1次。

副豬嗜血桿菌病滅活疫苗（4型JS株+5型ZJ株）疫苗購自普萊柯生物工程股份有限公司（No.171009）。肌肉注射2 mL/頭，3周后加強免疫1次，試驗結束后統計HPS的發病率。

1.3 測定指標

1.3.1 生長性能

記錄3組試驗豬的初始窩重（21日齡）計算個體均重，記錄3組試驗豬在試驗結束時（70日齡）的窩重，計算總增重和個體平均增重情況。記錄3組試驗豬試驗初始至試驗結束總消耗飼料情況，計算料重比。具體計算公式如下：

1.3.2 細菌分離培養

無菌采集臨床發病試驗豬的肝、肺、脾、淋巴結等臟器樣品，接種于TSA培養基，37℃培養24～48 h，觀察菌落形態，鏡檢。將純化的細菌接種于生化反應鑒定管中，37℃過夜培養，觀察結果并記錄。

1.4 數據統計與分析

利用生物學卡方檢驗和t檢驗統計法，比較試驗組、對照組和空白組在發病率、成活率、個體均重和飼料轉化方面的差異性，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 副豬嗜血桿菌病針對性免疫同期對比試驗結果（見表1）

由表1可知，試驗組的豬出現四肢腫脹、氣喘、咳嗽等癥狀的數量顯著少于對照組和空白組（P＜0.05）；保育結束后（70日齡），試驗組的仔豬成活率及個體均重均顯著高于對照組和空白組（P＜0.05）；試驗組的仔豬料重比顯著低于對照組和空白組（P＜0.05）；其他試驗指標未產生顯著影響（P＞0.05）。

表1 副豬嗜血桿菌病針對性免疫同期對比試驗Tab.1 Comparison of correspondingimmunizationschedulesfor Haemophilus parasuis

2.2 細菌分離鑒定結果（見圖1、圖2、表2）

由圖1可知，菌落呈圓形、針尖狀、表面光滑透明隆起。由圖2可知，挑選形態較好的單一的菌落用革蘭氏染色法染色，鏡檢呈略彎曲短桿狀。

由表2可知，根據陰、陽性結果結合細菌培養結果，可初步綜合判定分離的細菌為副豬嗜血桿菌。

圖1 細菌培養Fig.1 Bacterial culture

圖2 染色鏡檢Fig.2 Gram staining microscopic examination

表2 生化試驗結果tab.2 Results of biochemical tests

2.3 免疫保護結果

同期免疫對比試驗場，試驗組的豬發病率5%，仔豬成活率94%，發病率比對照組和空白組分別降低9%和12%，成活率比對照組和空白組分別提高10%和13%。對照組和空白組的發病率和成活率差別很小。

3 討論

保證豬健康也是減少該病發生的基本前提。在開展本病針對性免疫試驗過程中，還對其他引起呼吸道損傷的混合或繼發性常見疫病進行了綜合防控，常見疫病造成的呼吸道損傷極易對HPS的繼發感染創造機會，從而加重HPS的流行[12]。因為HPS是豬場常在菌，我國80%以上的規模豬場都存在該菌[13]。日常飼養管理中應該防止其他疫病發生繼發感染HPS。因此，在HPS流行豬場，做好豬藍耳病、豬氣喘病、豬偽狂犬病、豬圓環病毒病、豬鏈球菌病及各種寄生蟲等疾病的免疫和綜合防控是重中之重，合理防控可有效降低規模豬場養殖過程中的HPS感染和流行的風險[14-15]。

4 結論

開展針對性同期對比試驗具有顯著的防控效果，可減輕HPS病的發生率，提高生產性能。本研究使豬群的HPS發病率控制在6%以下，減少規模場HPS病的發生，提高保育仔豬的生長性能和飼料轉化率，從而節省養殖成本。