辣蓼黃酮對小鼠抗炎作用的研究

關靜淵，李 璐，于美玲，韋英益，胡庭俊

（廣西大學動物科學技術學院，廣西 南寧530005）

辣蓼（Polygonum hydropoperL.）又名水蓼、柳蓼、白辣蓼、紅辣、蓼牙菜等，廣泛存在于我國南北各地，多生于溪邊、山坡、濕地，是傳統中草藥之一。《本草綱目》中記載：“蓼葉，辛、溫、無毒”，具有止痢止痛、解毒化瘀等功效。研究發現，辣蓼主要化學成分有黃酮類、揮發油類、三萜類、蒽醌類和蓼酸等，具有抗微生物、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤和殺蟲等生物活性，在醫藥、食品、植物源農藥等方面有良好的開發前景[1]。大量研究表明，黃酮類化合物具有生物抗氧化性、清除自由基作用、抗炎、免疫、抗菌、降血脂、降血壓、降血糖和鎮痛等生理活性[2]。研究發現，辣蓼黃酮的主要成分槲皮素與山柰酚，在RAW264.7細胞中能有效抑制脂多糖（LPS）誘導的NO釋放，表明該黃酮具有體外抗炎活性[3]。文章對辣蓼黃酮的體內抗炎活性進行研究，探討辣蓼黃酮正丁醇部分（FNB）是否具有抗炎作用。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

辣蓼黃酮正丁醇部分（FNB）由廣西大學動物科學技術學院藥理實驗室提取。

1.2 試驗動物

昆明系SPF級小鼠購自廣西醫科大學實驗動物中心。

1.3 試驗儀器設備

EnSpire多功能熒光酶標儀（PerkinElmer）、Direct-Q 5UV純水系統（MERCK MILLIPORE）、CD-UPT-1純水儀（成都純越科技有限公司）、DTDN超聲波清洗機（寧波新芝生物科技有限公司）、TYPE1-14微量離心機（SIGMA）、METTLER TOLEDO AB104-L電子分析天平（EL204瑞士）、制冰機（SANYO）、Uvmini1240紫外分光光度儀（日本島津）。

1.4 試驗試劑

地塞米松磷酸鈉注射液（16052401A，貴州天地藥業公司）、炎癥因子用ELISA試劑盒（欣博盛生物科技有限公司）、小鼠環氧合酶（COX-1和COX-2）試劑盒（江蘇晶美生物科技有限公司）。

1.5 動物分組及處理

將50只昆明系SPF級小鼠隨機分成5組，每組10只，雌、雄各半。空白對照組，每只小鼠給予0.9%生理鹽水0.5 mL灌服，連續給藥5 d；陽性藥物對照組，每只小鼠腹腔注射地塞米松注射液25 mg/kg體重，每天1次，連續5 d；FNB劑量組，每只小鼠給予辣蓼黃酮150、100、50 mg/kg體重灌服給藥，每天1次，連續5 d。

上述各個試驗組小鼠在給藥5 d后，于最后一次給藥后1 h，小鼠左耳兩面涂抹0.05 mL二甲苯致炎，右耳作為對照。20 min后采樣用于各項指標測定。

1.6 測定指標及方法

1.6.1 臨床表現

試驗期間，每天定時觀察并記錄小鼠的采食、飲水、精神狀況、被毛狀況、健康狀況及日常活動。觀察小鼠是否出現與藥物相關的不良反應，如精神狀態、呼吸、行為及糞便等情況變化。記錄小鼠不良反應出現的時間、程度、持續時間。

1.6.2 炎性因子

1、持續推動對網絡安全保護措施的投資。雖然目前核設施運營商已在努力優先考慮網絡安全工作，但當前的網絡威脅仍在不斷上升。因此，需要付出專門努力，將網絡安全最佳實踐納入到核設施的文化建設中。

對小鼠進行眼球采血，靜置2 h，析出血清。取上層血清，3 000 r/min離心5 min，分裝后于-80℃保存，用于小鼠IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β、TNF-α、MCP-1、COX-1和COX-2水平測定。嚴格按照ELISA試劑盒（深圳欣博盛生物科技有限公司）的說明書進行測定。

1.6.3 臟器指數、小鼠耳腫脹度及耳腫脹率

然后將小鼠頸椎脫臼處死，分別取出胸腺和脾臟并稱重，計算臟器指數；用直徑6 mm打孔器在左右兩耳的同一部位打下耳片，立即用電子天平稱量兩耳片重量，計算炎性腫脹度和腫脹抑制率。計算方法如下：

耳腫脹率=（左耳重量-右耳重量）/右耳重量×100%（1）

1.7 數據統計與分析

用SPSS 22.0軟件進行單因素方差分析，Duncan法進行多重比較，試驗所得數據用“平均值±標準差”表示。P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 小鼠臨床表現

各組小鼠飲食正常、精神狀態良好，組間差異不明顯。

2.2 FNB對小鼠臟器指數的影響（見表1）

由表1可知，FNB處理后，3組小鼠的臟器指數與空白對照組差異不顯著（P＞0.05）。與空白對照組相比，陽性藥物對照組肝臟指數顯著增加（P＜0.05），脾臟指數、胸腺指數顯著降低（P＜0.05）。

表1 FNB對小鼠臟器指數的影響Tab.1 Effect of FNB on organ index in mice 單位：mg/g

2.3 FNB對小鼠耳腫脹的影響（見表2）

由表2可知，陽性藥物對照組小鼠耳腫脹率極顯著降低（P＜0.01）；FNB各劑量組與空白對照組相比較，小鼠耳腫脹率顯著或極顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），說明FNB具有一定的抗炎作用。

表2 FNB對小鼠耳腫脹率的影響Tab.2 Effect of FNB on ear swelling rate in mice

2.4 FNB對小鼠炎性因子的影響（見表3、表4）

由表3可知，與空白對照組相比，陽性藥物對照組小鼠血清IL-6、IL-8、IL-1β水平差異顯著（P＜0.05），其中陽性藥物對照組IL-10差異極顯著（P＜0.01）。FNB各劑量組與空白對照組相比較，4種細胞因子均差異不顯著。

由表4可知，與空白對照相比，陽性藥物對照組小鼠TNF-α、MCP-1、COX-1、COX-2水平差異顯著（P＜0.05）。FNB各劑量組與空白對照組相比較，4種炎性因子均差異不顯著。

表3 FNB對小鼠血清IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β水平的影響Tab.3 EffectsofFNB on serum IL-6,IL-8,IL-10,IL-1 levelsin mice 單位：ng/L

表4 FNB對小鼠TNF-α、MCP-1、COX-1、COX-2水平的影響Tab.4 Effects of FNB on levels of TNF-α,McP-1,COX-1 and COX-2 in mice 單位：μg/L

3 討論

黃酮是植物的一種次級代謝產物，普遍存在于多種植物中，因藥理活性多樣和來源豐富等特點，一直是研究的熱點。近年來，國內外大量的研究表明，黃酮具有顯著的抗炎作用。金巖等[4]研究松生等總黃酮提取工藝及鎮痛抗炎作用，結果發現，松生等乙醇提取物、正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物均具有明顯鎮痛抗炎作用。劉麗華等[5]對兔兒傘總黃酮抗炎作用研究中，兔兒傘總黃酮各劑量組能顯著降低小鼠毛細血管通透性；兔兒傘總黃酮高劑量組對二甲苯致小鼠耳腫脹有抑制作用，兔兒傘總黃酮具有較強的抗炎作用，其抗炎作用可能與其降低血管通透性有關。穿心蓮中提取的黃酮對炎性因子具有較強的清除能力，雞蛋清對急性炎癥有一定的作用[6]。

黃酮類化合物的抗炎作用與細胞因子及其受體有關。黃酮類化合物可通過抑制炎性細胞因子的產生或通過其他途徑發揮抗炎功效，也會影響細胞因子及其受體從而發揮抗炎作用。參與炎癥反應的細胞因子種類很多，其中比較重要的是白細胞介素1β（IL-1β）、白細胞介素6（IL-6）、白細胞介素8（IL-8）、白細胞介素10（IL-10）、腫瘤壞死因子（TNF-α）等。IL-1β、TNF-α能激活NF-κB在炎癥反應中使巨噬細胞和其他細胞分泌促炎因子IL-6、IL-8等。趙丹等[7]研究藍莓葉總黃酮的體外抗炎功效，結果表明，藍莓葉總黃酮通過影響炎癥相關因子表達量的產生，從而減弱促炎癥反應，增強抗炎癥反應，最終發揮抗炎功效。

黃酮類化合物也可以調節花生四烯酸代謝中參與炎癥反應并起關鍵作用的酶活力，如磷脂酶、環氧合酶等，從而抑制花生四烯酸、前列腺素類的生成，進而抑制炎癥產生。環氧合酶（COX）是催化合成各種前列腺素的限速酶，參與動物機體各種生理、病理反應，其具有2種結構亞型，即結構型COX-1和誘導型COX-2。COX-1的作用是參與炎癥，并可加重炎癥；而COX-2可能是在炎癥早期中啟動炎癥反應，而后期有助于炎癥恢復[8]。由于COX-2是炎癥關鍵介質，所以很多新型非甾體抗炎藥物把其當作主要作用靶點。Shil等[9]在發酵1、3、6、8、12個月的大豆中，發現發酵12個月的大豆的總黃酮的含量最高，并且能顯著性抑制iNOS和COX-2 mRNA的表達，體現最強的抗炎作用。穗花杉黃酮能減輕巴豆油導致的小鼠耳廓腫脹，并且抑制對豚鼠的環氧合酶和Ⅱ型磷脂酶A2活力[10]。

近年來，有學者對辣蓼黃酮的抗炎活性進行探究。趙桂法等[11]把辣蓼與棗樹皮聯合一起治療急性腸炎，治療效果較好。將辣蓼滴眼液用于治療細菌性角膜炎、病毒性角膜炎、急慢性結膜炎和眼癢病，均獲得較好的效果[12-14]。為完備辣蓼黃酮的抗炎作用，本試驗建立二甲苯致小鼠耳急性腫脹炎癥模型，然后觀察蓼黃酮FNB在小鼠體內的抗炎作用。用藥后，耳部皮膚毛細血管充血清晰。試驗中陽性對照組胸腺指數、脾臟指數低于空白對照組，可見在地塞米松的作用下，小鼠的胸腺、脾臟有很大程度的萎縮。本試驗中，陽性藥物對照組的炎癥因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、MCP-1、COX-1、COX-2與空白對照與相比差異顯著，IL-10差異極顯著，說明炎癥模型建立成功。FNB對小鼠的耳腫脹有抑制作用，表明FNB有一定的抗炎作用。

4 結論

小鼠體內抗炎試驗結果表明，不同劑量的辣蓼黃酮正丁醇部分（FNB）對小鼠具有一定的抗炎作用。