注射用青蒿琥酯含量測定能力驗證結果評價

丁建東 朱 榮 盧日剛 常 艷 陳 華 項新華*

1. 廣西壯族自治區食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530021； 2. 中國食品藥品檢定研究院，北京 100050

能力驗證是評價實驗室技術能力的有效手段,是實驗室通過外部措施對其內部質量控制方法的一種重要補充手段,是確保實驗室質量管理體系持續改進的有效措施之一[1]。實驗室應該積極參與并認真對待每次能力驗證，做到為我所用，不斷提升自身管理能力和技術水平[2]。

注射用青蒿琥酯是我國擁有完全自主知識產權的創新藥，也是首個獲世界衛生組織推薦的重癥瘧疾一線治療藥物，目前研究發現青蒿琥酯在其他疾病的治療上也有一定功效[3-5]。高效液相色譜法是藥品檢驗常用的檢測方法[6]，在藥品檢測領域有著廣泛的應用，已為各國藥典廣泛收載。本次含量測定能力驗證的主要目的是，考察藥品生產企業QC實驗室和藥品檢驗實驗室的檢驗技術水平及檢測數據的準確性，確定實驗室進行化學藥品高效液相色譜法進行成分含量測定的能力,識別實驗室中的問題以及實驗室間的差異，增加實驗室客戶對實驗室能力的信任。文章將就能力驗證的實施過程和統計技術進行討論。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀，十萬分之一電子天平。

1.2 試藥 雙氫青蒿素對照品(批號100184-201202)、青蒿素對照品(批號100202-200402)、青蒿琥酯對照品(批號100200-201003)均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 樣品制備 樣品來源于桂林南藥股份有限公司生產的原料藥，為白色粉末，裝于西林瓶，軋蓋包裝，每瓶裝量約120 mg，隨機數字編號，編號為QA0099-**** 。

2.2 樣品均勻性、穩定性檢驗和運輸實驗

2.2.1 樣品均勻性、常溫穩定性、加速穩定性檢驗 隨機抽取，隨機抽取20瓶，在重復條件下測定2次。檢驗方法按《中國藥典》2015年版二部“注射用青蒿琥酯”項下含量測定方法測定[7]。考察樣品擬定包裝，在常溫放置0個月、1個月、2個月和在加速(溫度40 ℃±2 ℃、相對濕度75%±5%)下放置的第5、10、15天分別隨機抽取樣品3份，進行重復測定2次，所得結果為穩定性的數據。

2.2.2 運輸過程穩定性試驗 根據地域分布，考慮距離和環境因素，選擇距離較遠、氣溫較高的3家實驗室，海南、湖北、西藏各選一個郵寄試驗點，各寄1份樣品，囑其原件郵回，收回后進行青蒿琥酯的含量測定，觀察其穩定性情況。

2.2.3 引濕性檢驗 取樣品約0.2 g，平鋪于稱量瓶中，精密稱定，實驗室環境下敞口放置，分別在10 min、30 min、60 min后稱定，計算引濕增重。

2.3 檢測要求 本次能力驗證對每個參加實驗室賦予了一個唯一代碼。各參加實驗室會收到 2 支標注為:“QA0099-實驗室代碼”的樣品。作業指導書、結果報告單、被測物品接收狀態確認表。要求實驗室按照作業指導書的要求在規定的期限內進行檢驗并反饋檢驗結果。

2.4 參加實驗室的具體情況 本次能力驗證共有57家實驗室報名參加，最后反饋檢驗結果的為56家。提交結果。參加實驗室分布于22個省(自治區)、直轄市，其中，食品藥品檢驗機構42家，藥品生產企業QC實驗室4家，其他檢驗機構10家。

2.5 能力驗證數據統計分析的設計及評價原則

2.5.1 統計分析的設計 本次能力驗證采用經典統計[8]技術方法對結果進行統計分析，即采用經典統計計算各實驗室結果的Z比分數統計的算術平均值作為指定值，傳統標準差作為能力評定標準差。能力驗證樣品為單一濃度樣品，按下式分別計算本次能力驗證計劃參加者的檢測結果，按公式計算Z值：Z=(x-X)/σ，式中x為參加者測試結果；X為算術平均值；σ為能力評定標準差。

本次能力驗證以Z比分數評價實驗室的結果，即:若|Z|≤2，檢測結果為滿意；若 2<|Z|<3，檢測結果為有問題；若|Z|≥3，檢測結果為不滿意或離群值。

2.5.2 評價原則 本次能力驗證以每個實驗室報告的樣品的檢測結果為基礎，采用經典統計技術進行處理，用算術平均值作為指定值，傳統標準差作為能力評定標準差。主要統計量包括：樣本數、算術平均值、傳統標準差等。

3 統計處理及統計分析評價

3.1 樣品均勻性檢驗結果 采用單因子方差分析法[9]對檢驗結果進行統計處理，均勻性的試驗測定結果和方差分析見表1和表2。樣品檢測值的F值為 1.707，均小于F臨界值F0.05(19，20) (2.137)，組間無顯著差異：F0.05，樣品的均勻性符合要求。

表1 樣品均勻性測定結果

表2 單因子方差分析結果

3.2 樣品穩定性檢驗結果 根據樣品均勻性試樣，樣品的初始含量100.27%。樣品進行常溫穩定性試驗的結果和統計分析結果分別見表3。

表3 樣品常溫穩定性試驗結果

采用t檢驗法[9]，分別對常溫穩定性檢驗(F值1.016，小于Fcrit 3.982)、加速穩定性實驗(F值1.356小于Fcrit 3.239)、運輸實驗的樣品(F值4.559小于Fcrit 5.192)結果進行統計處理，F值均小于F臨界值，且P-value>0.05，表明無顯著性差異，樣品的穩定性符合要求。

3.3 引濕性檢驗結果 取樣品約0.2 g，平鋪于稱量瓶中，精密稱定，實驗室環境下敞口放置，分別在10 min、30 min、60 min后稱定，計算引濕增重，均小于0.1%，表明試驗取樣時，水分對結果的影響可以忽略。

3.4 能力驗證結果 報名參加本次能力驗證計劃的實驗室共57家。1家中途退出，56家報告了結果。使用SPSS(13.0版本)數理統計軟件對56家實驗室測得的青蒿琥酯含量數據進行Kolmogorov-Smirnov法正態性檢驗 ，結果顯示：Kolmogorov-SmirnovZ值為0.863，P值大于0.05(P=0.446)，接受正態分布的假設。同時采用格拉布斯準則[11]判斷無異常值，基于這種分布，適合采用經典統計辦法評價各參加實驗室的檢測結果。經典統計參數匯總見表4。結果滿意的、不滿意的、可疑的實驗室分別為53家、2家和1家，占反饋結果實驗室總數(56家)比例分別為94.6%、3.6%和1.8%。為了清晰表示各實驗室參加能力驗證計劃的結果，能力驗證的結果使用Z比分數柱狀圖表示(見圖 1)，使每個實驗室能夠很容易地與其它實驗室的結果進行比較。

表4 檢測結果統計參數匯總表

4 技術分析及技術建議

4.1 不滿意和可疑結果原因分析 色譜分離及色譜行為欠佳從本次能力驗證提供的原始記錄系統適用性色譜圖看，2家離群的實驗室中，1家分離度1.4，未達要求，主峰明顯變形，導致其含量測定結果與其他實驗室之間有較大的差異；有一家色譜峰主峰略有變形。1家實驗室的主峰與雙氫青蒿素之間還有未知峰積分，存在色譜行為相關參數相對較差的現象。

4.2 記錄問題 記錄存在以下問題：①液相色譜分析圖譜缺系統適用性試驗圖；②對照品的配置中未見稱量記錄；③缺對照品的稱量記錄及對照品批號等關鍵信息記錄；④有手動積分的情況。以上數據反映部分參加實驗室在數據的可靠性、完整性方面的管理有待提高。

4.3 電子數據存儲問題 原始記錄有2家實驗室的色譜圖沒有存盤路徑，建議為利于檢驗的溯源，圖譜的存盤路徑應包含操作者姓名,一目了然,便于檢索，建議為：//姓名/檢品編號+檢品名稱；有2家色譜數據采集方法、分析方法和結果圖，保存于系統盤(C盤)，建議實驗室加強數據的安全性管理，以免系統崩潰時，數據無法恢復，給溯源帶來問題。

4.4 技術建議 此次能力驗證94.6%的實驗室結果為“滿意”，說明多數實驗室在執行中國藥典標準時能夠保證測定結果的重現性和準確性。但也有少部分實驗室由于色譜條件不夠理想、實驗操作不規范，導致測定結果為“可疑”甚至“不滿意”，建議加強人員色譜技術分析的培訓。

5 討論

5.1 設備和色譜柱情況 根據各實驗室提交原始記錄，使用的儀器設備和色譜柱均不同，在本次計劃中有17種不同品牌和10種規格的色譜柱被使用，涉及6種進口品牌7種不同型號的高效液相色譜儀。提示，設備型號和色譜柱對該檢測結果影響不大，表明標準的適用性良好。

5.2 科學選擇統計方法 本次能力驗證曾采用穩健統計(四分位距)Z比分數法對實驗結果進行統計，結果有5家離群，3家可疑，滿意率為83%，但由于實驗室上報數據相對較集中，穩健統計四分位法計算得到的標準偏差過嚴，導致滿意率明顯下降，易出現統計學“棄真”錯誤。改用經典統計，可有效避免這類錯誤。所以，為確保能力驗證計劃的科學性，使所有參加能力驗證活動的實驗室都能獲得公平公正的評價，選擇合適的統計方法十分重要[11]。

5.3 記錄的重要性 本次能力驗證采用經典統計Z比分數法，對實驗結果進行統計，絕大多數實驗室獲得了滿意的結果，真實的反映了實驗室的能力水平。但從各實驗室提交的原始記錄看，還存在一定的問題，實驗室需引起重視并加以改進。詳實的記錄是質量體系成熟的標志，是支持檢驗結果和保護實驗人員的最佳物證[12]，同時也是實驗能夠溯源和復現的依據。

6 結論

通過本次注射用青蒿琥酯含量測定能力驗證活動，結果表明，實驗室高效液相色譜法的檢測能力總體較好, 個別不滿意實驗室應進一步查證原因，采取措施及時糾正。今后不僅要加強藥品檢測人員的業務綜合技能的培訓，還要重視實驗記錄的重要性，確保檢測數據的溯源性及準確可靠性。