網果酸模質量標準研究

許 京 王瑞海 劉麗梅 苗 青 嚴光俊 張秋海 楊詩龍 郭昌洪*

1.中國中醫科學院中醫基礎理論研究所，北京 100700；2. 湖北省荊州市中醫醫院，湖北 荊州 434000

網果酸模為蓼科酸模屬植物網果酸模RumexchalepensisMill.的干燥根及根莖，始載于《中藥志》，又名紅絲酸模、金不換，主要分布在湖北、江西、河南、浙江及安徽等地[1-3]，味苦性寒，具有清熱解毒、通便、殺蟲之功效，民間用于止血和治療痢疾[4]。

網果酸模根及根莖為地方草藥，其含有很強的抗真菌(白色念珠菌、紅色發癬菌)的成分酸模素[5-6]，瀉下主要藥效成分之一蒽醌苷，抗菌消炎、抗腫瘤等作用成分游離蒽醌[7]，臨床主要用于治療消化道出血、幽門螺桿菌感染的相關性胃炎、消化性潰瘍、十二指腸球部潰瘍等[8-10]，具有很高的研究和應用價值。目前，網果酸模已有化學成分鑒定、含量測定、指紋圖譜等研究[11-12]，但基礎質量研究未見報道，因此，本實驗將從顯微鑒別、薄層鑒別(Thin Layer Identification，TLC)、水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物進行研究，為快速、準確的鑒別網果酸模提供科學依據，為完善、建立質量標準和提高臨床療效奠定基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器 CX41 型光學顯微鏡(奧林巴斯公司)； INTA 2020D薄層掃描成像系統(北京澤祥佳燕科技有限公司)；電熱古風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)；KQ3200DB 型數控超聲波清洗器(寧波新芝生物科技股份有限公司)；CP2202S電子天平(瑞士梅特勒-托利多)；高速萬能粉碎機(北京科偉永興儀器有限公司)；薄層層析硅膠 G 板(德國Merck 公司)；薄層層析硅膠 G 板(中國青島海洋化工)。

1.2 材料 酸模素對照品(批號：PS170608-03)、大黃素對照品(批號：PS000259)、大黃酚對照品(批號：PS010475)、大黃素甲醚對照品(批號：PS000263)、大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對照品(批號：PS010712)均購自成都普思科技股份有限公司；試劑均為分析純。

實驗用10樣品均采自湖北省荊州市公安縣章莊鋪鎮，生藥學圖片見圖1-1、1-2、1-3，經黑龍江中醫藥大學王振月教授鑒定為網果酸模RumexchalepensisMill.的干燥根及根莖，粉碎后過50目篩，置于干燥器中備用。

2 方法與結果

2.1 性狀 網果酸模飲片為類圓形、橢圓形或不規則厚片，外表皮棕褐色至灰褐色，可見皺縮紋。切面黃白色、黃色至棕黃色或黃棕色，具有明顯的形成層環紋，部分可見纖維，斷面顯黃白色。本品質脆硬，掰斷可見粉性煙塵，氣特異，味微苦。

2.2 顯微鑒別 藥材樣品粉末為黃棕色。取粉末少許，置載玻片中央，經水合氯醛液透化，加稀甘油2滴，拌勻，蓋片；淀粉粒觀察用水裝片，應用自帶攝像功能的光學顯微鏡拍攝顯微圖像，同步存入計算機中。草酸鈣簇晶類圓形，棱角尖銳，直徑22～52 μm，見圖2-1;石細胞極少，近無色或淡棕黃色，呈類方形、多角形或梭形，壁厚，直徑19～35 μm，見圖2-2；纖維多成群或離散，長梭形，稍彎曲，一端稍鈍圓，一端尖銳，或兩端漸尖，壁厚，孔溝明顯，長300～530 μm，直徑20-45 μm，見圖2-3；具緣紋孔導管、梯紋導管常見，直徑18-66 μm，見圖2-4；木栓細胞近長方形，無色或棕色，垂周壁波狀彎曲，見圖2-5；淀粉粒眾多，單粒類圓形、橢圓形或腎形，直徑4～19 μm，臍點點狀或裂縫狀，復粒由2～3分粒組成，見圖2-6。

2.3 網果酸模薄層的薄層鑒別

2.3.1 對照品的制備 精密稱取酸模素對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品、大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，加甲醇分別制成每1 mL含酸模素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對照品分別為482.4 μg、116.8 μg、302.8 μg、99.2 μg、99.6 μg的溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備[13]取本品粉末1.0 g，加甲醇10 mL，超聲30 min，濾過，取濾液5 mL，蒸干，殘渣加甲醇l mL使溶解，作為供試品溶液。

2.3.3 酸模素及蒽醌薄層條件 按照薄層色譜法(《中國藥典》2015版第四部通則0502)實驗，吸取大黃素、酸模素、大黃酚、大黃素甲醚對照品和供試品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板(德國Merck公司)上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(6∶1∶1∶0.15)為展開劑，展開，取出，晾干，105 ℃加熱至斑點清晰，置紫外光燈365 nm下檢識，大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品呈亮黃色斑點、酸模素對照品呈淡藍色斑點，Rf大黃素=0.26，Rf酸模素=0.46，Rf大黃酚=0.54，Rf大黃素甲醚=0.62，供試品色譜中，在與對照品色譜相同的位置上，顯相同顏色熒光斑點，表明網果酸模中含有大黃素、酸模素、大黃酚和大黃素甲醚。薄層色譜圖見圖3-1。

2.3.4 大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷的薄層條件 按照薄層色譜法(《中國藥典》2015版第四部通則0502)實驗，吸取大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對照品溶液和供試品溶液各1 μL，分別點于同一硅膠G薄層板(中國青島海洋化工)上，以乙酸乙酯-氯仿-丙酮-甲醇-水(1∶5∶2.5∶1.5∶0.4)上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，105 ℃加熱至斑點清晰，置紫外光燈365 nm下檢識，大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對照品熒光斑點呈橘黃色斑點，Rf大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷=0.59，供試品色譜中，在與大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點，表明網果酸模中含有大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷。薄層色譜圖見圖3-2。

2.4 水分測定 根據《中國藥典》2015 版四部通則 0832 水分測定法第二法[14]，烘干法測定：取供試品2～5 g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5 mm，疏松供試品不超過10 mm, 精密稱定，開啟瓶蓋在100～105 ℃干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1小時，放冷，稱重，至連續兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據減失的重量，計算供試品中含水量，結果見表2。10批樣品水分約5.60%～6.58%。

2.5 總灰分測定 根據《中國藥典》2015版四部通則2302灰分測定法項下總灰分測定法測定[14]：取供試品粉末3～5 g，置于熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準確至0.01 g)，緩緩熾灼，注意避免燃燒(先逐漸升溫至200～300 ℃)。至完全炭化時，逐漸升高溫度至500～600 ℃，使其完全灰化至恒重。稱重記錄，計算總灰分含量，結果見表2。10批樣品總灰分在4.00%～7.26%之間。

2.6 酸不溶灰分測定 根據《中國藥典》2015 版四部通則 2302 灰分測定法項下酸不溶性灰分測定法測定[14]：取上述所得灰分，在坩堝中小心加入稀鹽酸約10 mL，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10 min，表面皿用熱水5 mL沖洗，沖洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內的殘渣用水洗于濾紙上，至洗滌液不顯氯化物反應為止。濾渣連同濾紙移至同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據殘渣重量，計算酸不溶灰分含量，結果見表2。10批樣品酸不溶灰分在0.96%～3.93%之間。

2.7 醇溶性浸出物測定 根據《中國藥典》2015 版四部通則 2201 浸出物測定法項下醇溶性浸出物測定法第二法，熱浸法測定[14]：取供試品約2～4 g，精密稱定，置100～250 mL 的錐形瓶中，精密加人50%乙醇100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。除另有規定外，以干燥品計算供試品中醇溶性浸出物的含量，結果見表2。10批樣品醇溶性浸出物在18.94%～25.94%之間。

表2 水分、總灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物測定結果 (n=3)

3 討論

由于酸模素、游離蒽醌與結合蒽醌極性相差較大，難以在一張薄層板、同一展開系統下使要鑒別的斑點得到很好地分離，所以本研究分為兩個展開系統，分別對酸模素和游離蒽醌以及結合蒽醌進行鑒別。

TLC實驗過程中進行了不同檢測波長、不同溶劑和不同薄層板的考察，薄層板在日光及紫外225 nm、254 nm、365 nm不同波長下檢識，在紫外365 nm波長下，對照品及供試品斑點明亮、清晰。石油醚為主的展開系統，沸程30～60 ℃、90～120 ℃石油醚為展開劑，色譜斑點有拖尾，沸程60～90 ℃石油醚為展開劑，色譜斑點清晰、無拖尾；在確定展開劑基礎上，發現德國Merck公司生產的硅膠G板對大黃素、酸模素、大黃酚和大黃素甲醚分離效果更佳；中國青島海洋化工生產的硅膠G板對大黃酚-8-O-β-D-葡萄苷分離效果更佳。因此，確定網果酸模的檢測波長為365 nm；石油醚沸程選擇90～120 ℃沸程石油醚，不同成分的鑒別采用了兩種不同的薄層板。采用中國青島海洋化工生產的硅膠G板對大黃酚-8-O-β-D-葡萄苷進行分離，硅膠板前沿會出現亮藍色弧線，反復試驗未能消除，可能是展開劑中乙酸乙酯和丙酮最大吸收波長較大有關。

浸出物實驗過程中發現，網果酸模水溶性浸出物難過率，可能與網果酸模中淀粉含量高有關，故本實驗只測定網果酸模醇溶性浸出物。經過對冷浸法、熱浸法以及不同乙醇濃度的考察，采用熱浸法，50%乙醇為溶劑網果酸模醇溶性浸出物易過濾，浸出物含量較穩定，因此，采用50%乙醇為溶劑測定網果酸模醇溶性浸出物較合理。

網果酸模TLC鑒別，游離蒽醌及酸模素、大黃酚8-O-β-D-葡萄糖苷鑒別的展開劑分別為石油醚(60～90 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(20∶5∶1)上層溶液和乙酸乙酯-氯仿-丙酮-甲醇-水(1∶5∶2.5∶1.5∶0.4)上層溶液。根據表2并結合《中國藥典》2015年版對藥材水分、浸出物的規定，建議將網果酸模的水分擬定不得過7.0%，總灰分不得超過8.0%，酸不溶性灰分不得超過4.0%，醇溶性浸出物不得少于18.0%。

綜上，本研究所建立的網果酸模定性、定量方法具有簡便、可行、重復性好的特點，可為快速、準確的鑒別網果酸模提供科學依據，為完善、建立質量標準和提高臨床療效奠定基礎。