集菌涂片染色法在檢測痰液中抗酸桿菌中的應用分析

李關華

（廣東省羅定市人民醫院 檢驗科，廣東 羅定 527200）

0 引言

結核病主要是由結核桿菌引起的一種傳染性病癥，該病具有較高的患病率、致死率，該病在單一傳染病中致死率排在首位，依據世界衛生組織（WHO）2020年最新發布數據得出，2019年，全球約有1000萬人患上結核病，140萬人因此死亡[1]。結核病常會累及多個器官，包括腎、骨、肺等，其中以肺結核最為常見，且最具傳染性，已成為危害人們身體健康的一個重要病癥。因此針對結核病患者，對其進行早期診斷至關重要，以盡早防控與治療，改善預后[2]。目前針對結核病，臨床多以直接涂片、羅氏培養最為常見，其中直接涂片操作簡便、經濟，但其陽性率較低；羅氏培養陽性率高，已成為診斷結核病“金標準”，但其培養周期較長，影響疾病診治結果[3]。因此選擇一種高效、檢出率高的檢測方式一直是臨床關注的重點。集菌涂片染色法是一種新的檢測方式，具有操作簡便、易分辨、檢測時間短等優點[4]。但目前關于集菌涂片染色法用于痰液抗酸桿菌檢測中的相關文獻較少，故本文就本院選取的100例疑似肺結核患者進行研究，分析使用集菌涂片染色法檢測痰液中抗酸桿菌的臨床價值，闡述如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將本院2020年1月-2021年1月收治的100例疑似肺結核患者納入研究，所有患者均知情同意，并經院內倫理委員會審核、批準〔批號：2019年審（22）號〕。100例疑似肺結核患者中男、女各68、32例，年齡在19～65歲，平均（38.52±5.37）歲。

納入標準：①入選病例均為疑似肺結核患者（患者均持續咳嗽、咳痰≥3周，伴咯血或伴血痰；發熱或胸痛≥2周）；②經胸部X線片檢查結果顯示異常；③均為合格痰液標本[5]：血性、膿性、干酪性與黏液性痰，痰液量≥2mL；④均為首次患病。

排除標準：①患者既往存在精神病史；②既往伴肺結核病史；③伴肝、腎等其他器官功能衰竭。

1.2 方法

集菌涂片染色法：選擇竹簽挑取0.05～0.1mL痰標本，將其置于玻片正面靠右2/3左右位置，隨后均勻涂抹成適合厚薄的卵圓形痰膜（10mm＊20mm），隨后將其置于生物安全柜內，利用紫外線等進行照射，時間為15min，實施痰涂片火焰固定。將剩余痰標本加等體積的5%濃度的次氯酸鈉溶液，混勻，靜置30min，隨后液化、滅菌，倒入離心管內，實施振蕩搖勻，用離心機4000r/min，離心15min，去上清，保留1mL沉渣，搖勻后制成集菌痰涂片，將剩余沉渣保存備用，隨后進行染色。染色應嚴格依據試劑盒操作說明實施。將已固定的痰涂片滴加石炭酸復紅溶液初染10min；水洗、瀝水后滴加酸性酒精脫色1～2min或無色；水洗、瀝水后滴加亞甲基藍溶液復染30s，水洗、晾干待檢，將染色好的痰涂片置于OLYMPUS CX21普通光學顯微鏡下進行觀察。

直接涂片法按照《中國結核病防治規劃痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊》[6]進行操作。羅氏培養法按照《結核病診斷細菌學檢驗規程》進行操作[7]。

集菌涂片染色法安全性測試：取直接涂片法與集菌涂片染色法均位3+或4+痰液標本共12份，各標本均為2mL，分6份，將1倍標本保存液加入其中，進行處理，時間選為5～15min，其中3份進行加熱，另3份不做處理，實施羅氏培養；另外6份將2倍的樣本保存液加入其中，處理方式同上，對抗酸桿菌生長狀況進行檢查。

1.3 觀察指標

①此次100例患者診斷結果由專業醫師出具，并以“羅氏培養法”作為金標準，確定最終肺結核確診例數，觀察直接涂片法、集菌涂片染色法特異度、靈敏度、診斷符合率、誤診率。特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）×100.00%[8]；靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100.00%；診斷符合率=（真陽性+真陰性）/100×100.00%。誤診率=假陽性/（真陰性+假陽性）×100.00%[9]；②對集菌涂片法安全性進行檢測，對痰液標本分別進行加熱、進行羅氏培養，觀察抗酸桿菌生長情況。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 100例患者確診結果

100例疑似肺結核患者，經羅氏培養法最終確診為71例。

2.2 兩種檢測方式與金標準對比

集菌涂片染色法、直接涂片法與羅氏培養法檢測結果對比。見表1。

表1 兩種檢測方式與金標準

2.3 3種檢測方法檢出情況

羅氏培養法特異度、靈敏度、診斷符合率、誤診率100.00%、100.00%、100.00%、0.00%，集菌涂片染色法分別為93.10%、95.77%、95.00%、6.90%，直接涂片法分別為51.72%、81.68%、73.00%、48.28%，羅氏培養法、集菌涂片染色法特異度、靈敏度、診斷符合率均高于直接涂片法，誤診率均低于直接涂片法（P＜0.05），羅氏培養法與集菌涂片法對比無明顯差異（P＞0.05）。見表2。

表2 3 種檢測方法檢出情況對比[n（%）]

2.4 集菌涂片染色法安全性試驗結果

在標本中加入1倍或2倍痰液保存液，將2份標本分別放置5～15min，對標本進行加熱，在羅氏培養基上進行接種，培養2周后，均未見抗酸桿菌生長。

3 討論

肺結核是臨床常見病癥，其主要是由結核桿菌感染所致，以發熱、咯血、咳嗽、盜汗、消瘦等為主要臨床表現，若不盡早采取有效的治療措施，隨著病情進展，可引發結核菌耐藥性，增加治療難度，對患者生理、心理帶來嚴重影響，故針對肺結核患者，應盡早采取有效的治療措施，以改善患者臨床癥狀，提升其生活質量[10-11]。而采取有效的診斷措施，是提升療效、改善預后的關鍵。

目前，部分主流的結核病診斷方式存在一定的局限性，其中結核素皮膚實驗的應用，因結核桿菌存在高感染率與卡介苗的應用，造成其在臨床應用率較低，而CT、X線等影像學檢測方式，極易受醫師主觀意識影響，降低診斷結果準確性[12]。內鏡與病理學檢查雖有較高的準確性，但其具有一定的侵入性，且操作較為困難，因此針對結核病，臨床多采取實驗室檢測，其具有操作簡便、經濟等優點，對臨床早期診斷疾病具有重要意義[13]。近年來，隨著實驗室檢測技術不斷發展，痰涂片抗酸桿菌檢測技術成為防控結核病的主要方式，具有操作簡便、易行、可靠、迅速等優點[14]。本文使用的集菌涂片染色法中，使用次氯酸鈉法，具有較高的敏感性，且價格低廉，所需離心力極易達到，同時因次氯酸鈉是一種有效的消毒劑，故可顯著減少實驗室感染發生風險，具有一定的安全性。本文研究顯示，100例疑似肺結核患者，經羅氏培養法確診共71例，表明肺結核仍具有較高的發病率。同時本文研究顯示，相較于直接涂片染色法，集菌涂片染色法檢測特異度、靈敏度、診斷符合率較高，誤診率較低；集菌涂片染色法檢測痰抗酸桿菌特異度、靈敏度、診斷符合率略低于羅氏培養法，誤診率略高于羅氏培養法，但兩種檢測方式對比無明顯差異，表明集菌涂片染色法具有較高的臨床應用價值，有利于提升痰抗酸桿菌診斷準確性[15]。同時，本文還對集菌涂片染色法安全性進行實驗，對12份痰液標本經不同比例的標本保存液處理5～10min，經加熱或不加熱，采取羅氏培養法進行檢測，其結果得出，均未見抗酸桿菌生長、繁殖，由此得出，集菌涂片染色法具有較高的生物安全性，對比直接涂片法檢測，其對實驗室工作人員的安全更具保障。

綜上所示，集菌涂片染色法檢測痰液中抗酸桿菌臨床應用價值較高，該檢測方式具有較高的診斷特異度、靈敏度、診斷符合率，可有效彌補直接涂片法檢測的不足，且集菌涂片染色法操作方式簡便、經濟、人為因素影響較少，具有較高的生物安全性，值得借鑒。但本文尚存在一定的不足之處，例如樣本數量少、未引用客觀性指標以及研究時間少等，故在今后研究中可進一步增加樣本數、引用客觀性指標以及延長研究時間等，以深入研究集菌涂片染色法在檢測痰液中抗酸桿菌的臨床價值。