不同益生菌組合的降解效果及其對肉牛生產性能的影響

左秀麗 左振華 左秀峰 徐 浩 左可吉

（1.山東省莒南縣農業農村局，山東 莒南 276600；2.對外經濟貿易大學，北京；3.山東省莒南縣文疃鎮左家溝，山東 莒南）

肉牛強度育肥存在飼料消化不全、酸中毒、秸稈利用率低和藥殘等問題，養殖業減藥行動推動了科研部門潛心研發替抗減抗新型微生態制劑促進養牛業發展。益生菌作為對宿主有益的活性微生物逐漸應用于食品領域。如何簡便易行地利用益生菌發酵秸稈生產低成本牛飼料，關系節糧養牛業高效發展。本課題優選出最佳肉牛復合益生菌組合，確定了精補料中最佳添加比例。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 益生菌 根據農業部蘭州獸藥研究所有關研究，選擇可用于生產微生態制劑的微生物，即酵母菌、芽孢桿菌、糞腸球菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌和乳酸鏈球菌六種微生物。國家肉牛體系臨沂實驗站團隊與德州學院、江西農業大學聯合篩選出酵母菌、乳酸糞腸球菌、芽孢桿菌三種益生菌進行優選組合。

1.1.2 不同的益生菌組合 經不同組合比例按一定工藝研制四種肉牛復合益生菌組合，代號分別為I、II、III、IV。采用體外培養方法，研究不同飼用復合益生菌組合對魯西黃牛改良的利雜牛瘤胃體外發酵的影響，體外培養試驗設 5個組，不添加益生菌的基礎日糧為對照組，4個試驗組分別添加I、II、III和IV號復合益生菌，在精補飼料中添加量均為180 mg/kg。

表1 肉牛復合益生菌組合

1.1.3 試驗動物及日糧組成 選用 2頭體重為276±13 kg安裝有永久性瘤胃瘺管的健康利雜黃牛，以供瘤胃液的采集測試。試驗期間每天飼喂2次（8時和 18時），自由飲水。TMR（全混合日糧）飼料為玉米-豆粕-青貯玉米秸日糧，按肉牛1.3倍維持需要配制，精粗比為59:41，基礎日糧組成和營養水平見表2。

表2 基礎日糧組成及營養水平

1 kg預混料含：維生素 A 20萬 IU；維生素 D33萬IU；維生素 E 600 IU；銅 300 mg；鐵 1900 mg；錳1180 mg；鋅 1460 mg；硒 20 mg；碘 30 mg；鈷 9 mg；鈣 100～200 g；磷 60～90 g；食鹽 15 %

1.1.4 體外培養試驗檢測 產氣量的測定：每隔0.5 h記錄注射器抽取的的氣體量，記錄完后排干凈，累計培養24 h的總產氣量。瘤胃液pH的測定：培養24 h后立即用微電腦PH-EC-TDS測定儀（青島翌宏儀器有限公司）直接測定。瘤胃液NH3-N 濃度的測定：參照馮宗慈比色法進行測定[1]。瘤胃液菌體蛋白（MCP）的測定：取經預處理去除原蟲和飼料大顆粒的上清液 20 ml，以16 000 r/min離心 28 min，棄去上清液，沉淀的細菌部分加入15 ml 10 % 三氯乙酸溶液，混勻，再以4 000 r/min離心13 min，取沉淀物加入5 %氫氧化鈉溶解，然后稀釋至 40 ml。此稀釋液又經4 000 r/min離心15 min，取上清液在紫外分光光度計上用280 nm和260 nm波進行比色，應用下面公式求得細菌蛋白質含量：細菌蛋白含量（mg/ml）=（1.45×D280-0.74×D260）×稀釋倍數。瘤胃液揮發性脂肪酸（VFA）濃度的測定：按照賽默飛氣相色譜法進行測定[2]。采用 Excel軟件和 Spss16.0軟件對實驗數據進行單因素方差分析和多重比較顯著性檢驗。

1.1.5 數據分析 不同肉牛復合益生菌組合體外培養產氣量、pH、MCP含量、NH3-N濃度和干物質降解率。

1.2 方法

一組肉牛（24頭）飼喂不同含量 II號復合益生菌育肥添加試驗。

1.2.1 試驗動物選擇及實驗設計 沂水縣宗盛牛場，選擇出生日期 3個月以上、體重相近且健康的犢牛 24頭，采用單因子隨機設計，分成 4個試驗組，每組6頭牛。2018年9月1日開始，試驗期30 d，飼養環境一致。

1.2.2 試驗動物日糧及飼養管理 所有試驗犢牛試驗期每日人工哺乳牛奶 1 kg，飼喂相同基礎日糧，優質苜蓿干草 3 kg，精料 2 kg。分 4組，3個試驗組分別按精料量添加 0.05 %、0.10 %、0.20 % 的 II號肉牛復合益生菌，接種拌料35～45 ℃ 發酵 3 d飼喂，對照組不添加，飼喂 2次/d，自由飲水。精料主要營養成分見表3。

表3 精料主要營養成分

1.2.3 測定生產性能指標 測定指標：分別測定試驗犢牛開始、試驗結束日早晨空腹稱重，測定體尺指標。

1.2.4 測定腹瀉頻率 每日飼喂時觀察犢牛糞便和尿，根據以下標準評分記錄腹瀉情況。腹瀉頻率（%）=（腹瀉頭數×腹瀉天數）/（試驗頭數×正式期天數）×100；糞便指數=糞便評分之和/總頭數[3]；試驗期內每日對每頭犢牛糞便進行打分，當犢牛糞便評分＞2時記為一個腹瀉日，糞便評分為 4時，按照牛場治療方案進行治療，每頭犢牛腹瀉一天記腹瀉一次。評分標準：1分：無腹瀉，正常糞便，呈條形或柿餅狀，稍有糞味；2分：輕度腹瀉，軟糞松軟能成形，糞臭輕；3分：中度腹瀉，糞便糊粥狀不成形，酸臭味，糞水無分離；4分：嚴重腹瀉，糞便稀液狀不成形，糞水有分離，酸臭難聞。

2 結果

2.1 不同的益生菌組合體外培養降解效果

（1）篩選試驗表明，添加肉牛復合益生菌能夠穩定瘤胃內環境，促進瘤胃發酵功能改善。從生化指標分析以 II號肉牛復合益生菌組合（50 % 酵母菌+25 % 乳酸糞腸球菌+25 % 芽孢桿菌）效果最佳。（2）由表4可見，添加I、II、III、IV肉牛復合益生菌組合和對照組的培養液pH值均在正常范圍內。添加 I、II、III肉牛復合益生菌組合的24 h總產氣量比對照組有顯著的提高（P＜0.05），各處理組間差異不顯著（P＞0.05），但 II號肉牛復合益生菌組合的產氣量最高為 170.40 ml；I、II號肉牛復合益生菌組合產生的微生物蛋白含量極顯著高于其它組（P＜0.01），其中 II號肉牛復合益生菌組合的微生物蛋白含量最高達 270.38 mg/100 ml，而且顯著高于 I、III、（P＜0.05）。（3）I、II、III 肉牛復合益生菌組合產生的氨態氮濃度極顯著低于對照組和第IV號組合（P＜0.01），IV號組合顯著低于對照組（P＜0.05）；II、III號肉牛復合益生菌組合的干物質降解率極顯著高于對照組（P＜0.01）。（4）瘤胃液揮發性脂肪酸濃度：對照組、I、II、III、IV總 VFA 濃度（mmol/L）分別為 139.65±0.17、144.38±0.97、146.01±0.62、145.88±0.11、140.71±0.13，II組顯著高于對照組（P＜0.05）。

表4 不同肉牛復合益生菌組合制劑試驗結果

表5 不同II號肉牛復合益生菌添加量對犢牛生長與生產性能的影響

2.2 II號復合益生菌對犢牛生長與生產性能的影響

育肥試驗開始時各組犢牛體尺、體重指標各組差異不顯著（P＞0.05），由表5可知，飼喂復合益生菌精料后，0.05 % 組與對照組差異不顯著（P＞0.05），0.1 % 組和 0.2 % 組體高極顯著高于對照組（P＜0.01），顯著高于 0.05 % 組（P＜0.05）；0.1 % 組和 0.2 % 組胸圍顯著高于對照組（P＜0.05）。試驗期 0.1 % 組日增重最高，顯著高于對照組（P＜0.05），高出 0.23 kg/d，其次0.2 % 組和 0.05 % 菌組，0.05 % 組較對照組增重率提高17.30 %。試驗結束后0.1 % 組和0.2 %組體重同樣顯著高于對照組（P＜0.05），其它各組之間差異不顯著（P＞0.05）。實驗表明，添加0.1 % 的 II號肉牛復合益生菌（50 % 酵母菌+25 % 乳酸糞腸球菌+25 % 芽孢桿菌）可顯著提高犢牛瘤胃消化率和全消化道消化率，糞便細膩松軟無臭味[4]。

2.3 止瀉效果

整體來看，本次選擇的試驗期各組腹瀉發生的概率都不高。由表6可知飼喂不同含量II號肉牛復合益生菌精料組對抑制犢牛腹瀉的影響，各組均有腹瀉，但腹瀉程度有一定的差別，其中對照組腹瀉頻率和糞便評分最高，0.1 % 組最低。

表6 II號肉牛復合益生菌不同添加量犢牛腹瀉率及其評分結果

3 討論

II號肉牛復合益生菌顯著提高了肉牛瘤胃分解利用秸稈飼料的消化率，產生大量的菌體蛋白、代謝產物、維生素、小分子肽和活性酶，有利于反芻獸新月單胞菌及其培養物的增殖，將乳酸降解成丙酸和乙酸，益生菌能與病原菌競爭瘤胃和腸道內定殖位點，抑制病原微生物。屠宰檢測無藥殘。楊東英教授指出乳酸菌在體內產生的弱酸環境對致病性大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌等均有不同程度的抑制作用。枯草芽孢桿菌活菌制劑具有治療犢牛和生產奶牛細菌性腸道疾病的作用，觀察期間未發現動物不良反應。本試驗結果顯示，添加不同含量肉牛復合益生菌對犢牛腹瀉都有很好的抑制作用，在低成本牛料生產中降低飼料成本 9 %，進一步拉動了節糧型秸稈養牛業高效發展。下一步將利用II號肉牛復合益生菌研發肉牛生物發酵飼料，更加方便快捷地推廣應用該項技術成果。

4 結論

（1）創新模擬瘤胃菌群環境運用篩選益生菌的原理與技術優選出肉牛復合益生菌組合（50 % 酵母菌+25 % 乳酸糞腸球菌+25 % 芽孢桿菌）。飼料干物質降解率、MCP含量、產氣量和總 VFA濃度顯著提高；顯著降低NH3-N濃度，瘤胃液 pH值穩定。（2）犢牛按精補料添加0.1 % 肉牛復合益生菌能增強瘤胃消化粗纖維、木質素、粗蛋白的能力，緩解酸中毒，對犢牛降低腹瀉都有很好的抑制作用，糞便細膩無過料臭味輕，可顯著提高犢牛生長發育性能，體尺、胸圍、體高、日增重顯著提高。日增重提高0.24 kg/d，腹瀉率降低 70 %，增強了抗病力。（3）肉牛復合益生菌提高了非常規粗飼料的利用率，提高經濟效益 10 % 以上，干物質排放量減少 3.5 %，屠宰檢測無藥殘。該成果將促進飼料生產新舊動能轉換和節糧養殖業增效。