經典名方開心散不同溫度高壓蒸汽滅菌條件下9種指標成分含量變化研究

陳 穎，禹鵬鑫，丁 輝，荊瑤瑤，張麗娟，余河水, 2, 3*，楊建會，宋新波, 2, 3，李 正, 2, 3

經典名方開心散不同溫度高壓蒸汽滅菌條件下9種指標成分含量變化研究

陳 穎1，禹鵬鑫1，丁 輝1，荊瑤瑤1，張麗娟1，余河水1, 2, 3*，楊建會4，宋新波1, 2, 3，李 正1, 2, 3

1. 天津中醫藥大學 中藥制藥工程學院，天津 301617 2. 省部共建組分中藥國家重點實驗室，天津 301617 3. 中藥制藥工程市級實驗教學示范中心，天津 301617 4. 天士力醫藥集團股份有限公司，天津 300410

開心散方出自于唐代孫思邈所著的《備急千金藥方》，由遠志、人參各四分、茯苓二兩、菖蒲一兩組成。其中，君藥為遠志，安神益智、交通心腎、祛痰消腫；臣藥為人參，大補元氣，生津養血，安神益智，輔以茯苓，利水滲濕、寧心、安神；佐以石菖蒲，開竅化痰、醒神益智。四藥合用，具有安神、補氣和利濕化濁功效，主治好忘[1-2]。現代藥理研究表明，開心散具有抗抑郁[3-4]、抗癡呆[5-6]、抗衰老及抗氧化[7-8]、抗疲勞[9-10]等作用。臨床上廣泛用于治療老年癡呆癥、抑郁癥、焦慮癥和神經衰弱等癥狀。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1290超高效液相色譜儀，Agilent公司；Acquity UPLC?BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），Waters公司；KQ2200DBV型數控超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司；AL204型電子天平，梅特勒-托利多儀器上海有限公司；超純水系統，美國Millipore公司。

1.2 材料

遠志、人參、茯苓及石菖蒲4種藥材均由天津天士力有限公司提供以及安徽援康藥業有限公司購買，經天津中醫藥大學中藥鑒定教研室李天祥教授鑒定，遠志為遠志科遠志屬植物遠志Willd.的干燥根，人參為五加科人參屬植物人參C. A. Mey.的干燥根和根莖，茯苓為多孔菌科茯苓屬真菌茯苓(Schw.) Wolf的干燥菌核，石菖蒲為天南星科菖蒲屬植物石菖蒲Schott的干燥根莖，且按照《中國藥典》2015年版要求檢測，均為符合藥典規定的品種。

2 方法與結果

2.1 開心散散劑的制備

按《備急千金藥方》開心散原方，稱取各單味藥，粉碎過六號篩，按等量倍增法、打底套色法制備開心散散劑。

2.2 微生物限度

參照《中國藥典》2015年版四部通則1107“非無菌藥品微生物限度標準”，對滅菌前后開心散進行微生物限度檢測。結果未滅菌的開心散的微生物限度不符合《中國藥典》2015年版項下規定，經過滅菌處理后的開心散其微生物限度均符合《中國藥典》2015年版項下規定（表1）。

表1 不同滅菌方法的微生物限度檢查結果(n = 3)

2.3 不同滅菌方法的指標性成分含量測定

2.3.2 供試品溶液的制備 稱取開心散散劑2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入75%甲醇50 mL超聲提取（360 W，40 Hz）30 min，濾過，濾液減壓濃縮至干，殘渣加75%甲醇溶解，并轉移至5 mL量瓶中，加75%甲醇定容至刻度，搖勻，測定前用0.22 μm的微孔濾膜濾過。

2.3.3 色譜條件 色譜柱為Acquity UPLC?BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動相為0.05%磷酸水溶液-乙腈，梯度洗脫：0～9 min，7%～14%乙腈；9～13 min，14%～16%乙腈；13～19 min，16%～19%乙腈；19～23 min，19%～23%乙腈；23～32 min，23%～36%乙腈；32～37 min，36%～38%乙腈；37～41 min，38%～42%乙腈；體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃；進樣體積2 μL；檢測波長203 nm。混合對照品溶液、供試品溶液的色譜圖見圖1。

1-西伯利亞遠志糖A5 2-西伯利亞遠志糖A6 3-遠志酮III 4-3,6′-二芥子酰基蔗糖 5-細葉遠志苷A 6-人參皂苷Rg1 7-人參皂苷Re 8-β-細辛醚 9-α-細辛醚

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察 在“2.3.3”項色譜條件下，精密吸取系列質量濃度的混合對照品溶液注入超高效液相色譜儀，記錄色譜圖。記錄各對照品相應保留時間處的峰面積，以色譜峰面積為縱坐標（），質量濃度為橫坐標（），繪制標準曲線，計算回歸方程，結果顯示其線性關系良好。其回歸方程，相關系數（）及線性范圍見表2。

表2 開心散中9種有效成分的線性關系考察結果

2.5 不同滅菌溫度對開心散9種指標性成分影響

表3 不同滅菌溫度的9種成分的含量測定結果(n = 3)

表4 9種指標成分在不同高壓蒸汽滅菌溫度條件下的變化率

Table 4 Variation range of nine index components under different high-pressure steam sterilization temperature conditions

條件對比變化率/%西伯利亞遠志糖A5西伯利亞遠志糖A6遠志酮Ⅲ3,6′-二芥子酰基蔗糖細葉遠志苷A人參皂苷Rg1人參皂苷Reβ-細辛醚α-細辛醚111 ℃與未滅菌對比3.447.2127.6011.515.95?3.26?2.435.22?3.58121 ℃與111 ℃對比2.25?0.1612.90?0.59?1.731.250.26?0.1214.13131 ℃與111 ℃對比11.8111.79?2.909.7711.2911.2310.008.2220.32

3 討論

在樣品處理過程中對不同體積分數的甲醇提取溶劑進行比較，發現用75%甲醇超聲提取30 min得到的供試液分離效果好且色譜峰數量較多。同時進行200～400 nm波長下全波長掃描，發現在203 nm處各成分均有較強吸收，色譜峰相對較多，故選擇203 nm波長下進行分析。研究中還考察流動相（乙腈-水、乙腈-0.05%甲酸水溶液、乙腈-0.05%磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液）、柱溫（30、35 ℃）、流動相體積流量（0.2、0.3、0.4 mL/min）、進樣量（2、4、8 μL)，最終確定流動相為乙腈-0.05%磷酸溶液梯度洗脫，柱溫30 ℃，體積流量為0.3 mL/min，進樣量為2 μL時所得色譜圖可以獲得較為平穩的基線，且各待測成分的峰形較好。

文獻研究報道α-細辛醚和β-細辛醚具有廣泛的藥理活性，但β-細辛醚結構在體內不穩定，使得其藥理作用及作用機制尚不明確，且超劑量的α-細辛醚和β-細辛醚具有致突變性、遺傳毒性和致畸性，臨床使用考慮一定的風險[20]。開心散滅菌過程中藥效物質變化規律以及變化成分對其藥效的影響，以及細辛醚的藥效劑量和毒性劑量均有待進一步深入研究。

志謝：中川工程顧問（上海）有限公司提供高壓蒸汽滅菌設備進行開心散不同溫度的滅菌實驗。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Changes of nine index components in classic formula Kaixin Powder under different temperatures of high pressures steam sterilization

CHEN Ying1, YU Peng-xin1, DING Hui1, JING Yao-yao1, ZHANG Li-juan1, YU He-shui1, 2, 3, YANG Jian-hui4, SONG Xin-bo1, 2, 3, LI Zheng1, 2, 3

1. College of Pharmaceutical Engineering of Traditional Chinese Medicine, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 301617, China 2. State Key Laboratory of Provincial and Ministerial Co-construction of Component Traditional Chinese Medicines, Tianjin 301617, China 3. Municipal Experimental Teaching Demonstration Center of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Engineering, Tianjin 301617, China 4. Tasly Pharmaceutical Group Co., Ltd., Tianjin 300410, China

To establish a UHPLC-DAD method for the simultaneous determination of sibiricose A5, sibiricose A6, polygalaxanthone III, 3,6′-disinapoyl sucrose, tenuifoliside A, ginsenoside Rg1, ginsenoside Re, β-asarone and α-asarone in the extract of Kaixin Powder (開心散), and compare the effect of different steam autoclaving temperatures on the content of nine index components in Kaixin Powder extract, to provide reference for the selection of sterilization process for Kaixin Powder.High pressure steam sterilization method (sterilization temperature 111, 121, 131 ℃; holding time 60 s) was performed for the sterilization process of Kaixin Powder. The chromatographic separation was achieved on a Acquity UPLC?BEH C18column (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm) with acetonitrile-0.05% phosphoric acid solution as mobile phase at the flow rate of 0.3 mL/min for gradient elution. The column temperature was maintained at 30 ℃. The wavelength was set at 203 nm.The results showed that the separation of the nine index components was good, and each component had a wide linear range and a good linear relationship (2> 0.999), with good precision, stability, repeatability and sample recovery. Through the detection and comparison of the content of the nine index components in Kaixin Powder after different sterilization conditions, the autoclave sterilization sterilization was optimized at 111 ℃ for 60 s. The bacterial test met the requirements of Pharmacopoeia, and the content change of each component had the smallest difference with the sample before sterilization.The established UHPLC method can be used to simultaneously determine the contents of nine index ingredients in Kaixin Powder. The method is simple to operate, highly sensitive, accurate, practical, and reliable, which provides theoretical basis for the quality control of Kaixin Powder.

Kaixin Powder; classic formula; UHPLC-DAD; high pressures steam sterilization method; sterilization; content difference; sibiricose A5; sibiricose A6; polygalaxanthone III; 3,6′-disinapoylsucrose; tenuifoliside A; ginsenoside Rg1; ginsenoside Re; β-asarone; α-asarone; quality control

R283.6

A

0253 - 2670(2021)04 - 0976 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.04.009

2020-10-30

“重大新藥創制”科技重大專項（2018ZX09721005）；“重大新藥創制”科技重大專項（2018ZX09201011）；天津市高等學校科技發展基金計劃項目（2018KJ001）

陳 穎（1996—），女，碩士研究生，研究方向中藥質量控制。E-mail: 16622911576@163.com

余河水（1981—），男，講師，研究方向為中藥有效成分及質量控制研究。E-mail: hs_yu08@163.com

[責任編輯 鄭禮勝]