宮頸癌患者血清ALP、癌組織PIK3R1基因蛋白表達及臨床意義

李少星，余 華，楊惠歡

宮頸癌是臨床較常見的女性惡性腫瘤，其中80%為鱗狀細胞癌(cervical squamous cell carcinoma, SCC)，是女性致死性第二大疾病[1]。堿性磷酸酶(ALP)是金屬酶超家族成員之一，多數存在于骨、肝臟、腎臟中，血清ALP升高被認為是體內微環境改變的不良因素之一，既往多被用于肝功能檢測[2]。研究報道，多種腫瘤及其細胞系中均有ALP基因過表達，尤其是睪丸及卵巢癌，ALP可通過影響MAPK信號通路參與腫瘤的發展[3]。而磷脂酰肌醇-3激酶(PIK3)則屬于磷脂激酶，可與細胞膜受體發生相互作用，介導細胞外部信號傳入細胞內部[4]。磷脂酰肌醇-3激酶調節亞基1(PIK3R1)是PI3K的亞基，研究認為其可負向調節腫瘤細胞的生長、侵襲過程，與腫瘤發生、發展密切相關[5]。也有研究報道，PIK3R1的減少程度與腫瘤分期、轉移、預后存在顯著相關性[6]。本研究分析宮頸癌患者血清ALP、癌組織中PIK3R1基因蛋白表達水平及臨床意義，以期為宮頸癌診治提供合理的監測指標。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2016年1月—2019年10月在本院診治的宮頸癌100例作為宮頸癌組。納入標準：經病理檢查確診為宮頸SCC；留存有組織標本。排除標準：血標本及組織標本采集前有放化療等治療史、病歷資料缺失。100例年齡27～64(49.12±15.33)歲，其中<55歲53例、≥55歲47例；FIGO分期Ⅰ期42例、Ⅱ期32例、Ⅲ～Ⅳ期26例；高分化12例、中分化42例、低分化46例；癌轉移46例。另選取同期因子宮肌瘤行全子宮切除且無子宮肌瘤以外的內外科疾病患者30例作為對照組，年齡25～67(50.33±13.85)歲。本研究經醫院倫理委員會批準執行。

1.2儀器與試劑 ALP試劑盒購自上海申能-德賽診斷技術有限公司；HITACHI 7080型全自動生化分析儀購自日本日立公司；免疫組織化學染色(免疫組化)油筆、DAB顯色試劑盒、S-P試劑盒及Tween20購自福州邁新生物技術開發有限公司；兔抗人PIK3R1多克隆抗體(一抗)及兔抗小鼠IgG聚合物(二抗)購自Santa Cruz公司；顯微鏡購自日本Olympus公司。

1.3檢測方法

1.3.1血清ALP檢測：所有對象取術前空腹靜脈血，3000 r/min離心10 min分離血漿，采用HITACHI 7080型全自動生化分析儀檢測血清ALP水平。

1.3.2PIK3R1基因蛋白表達：應用免疫組化法檢測，取厚度為4 μm的宮頸組織蠟塊切片烘干，后依次二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ脫蠟10 min；無水乙醇Ⅱ、95%無水乙醇、85%無水乙醇、75%無水乙醇依次浸泡5 min，流水沖洗5 min；枸櫞酸緩沖液抗原修復，Tween20細胞通透，3%過氧化氫消除組織中內源性過氧化物酶；后滴加山羊血清于組織切片，免疫組化于濕盒內封閉25 min，封閉非特異性蛋白；孵育一抗、二抗，DAB顯色，蘇木精復染，依次95%無水乙醇、85%無水乙醇、75%無水乙醇、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ脫水；二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明，中性樹膠封片，鏡下攝片。應用Image Pro Plus測量平均吸光度值為PIK3R1基因蛋白表達量。

2 結果

2.1宮頸癌患者血清ALP及癌組織PIK3R1基因蛋白表達 宮頸癌患者血清ALP顯著高于對照組，癌組織PIK3R1基因蛋白表達顯著低于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)，見表1、圖1。

2.2不同病理特征的宮頸癌患者血清ALP及癌組織PIK3R1基因蛋白表達 不同年齡、FIGO分期、分化程度及轉移情況的宮頸癌患者血清ALP、PIK3R1基因蛋白比較差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)，其中年齡≥55歲的宮頸癌患者血清ALP顯著高于<55歲患者，血清ALP隨患者FIGO分期的增加及分化程度的降低而上升，合并轉移的宮頸癌患者血清ALP顯著高于未合并轉移患者；而年齡≥55歲的宮頸癌患者癌組織PIK3R1基因蛋白表達顯著低于<55歲患者，癌組織PIK3R1基因蛋白表達隨FIGO分期的增加及分化程度的降低而下降，合并轉移的宮頸癌患者癌組織PIK3R1基因蛋白表達顯著低于未合并轉移患者。見表2。

表1 宮頸癌和子宮肌瘤患者血清堿性磷酸酶及癌組織PIK3R1基因蛋白表達

圖1 正常宮頸組織及宮頸鱗狀細胞癌組織中磷脂酰肌醇-3激酶調節亞基1基因蛋白表達

表2 不同病理特征的宮頸癌患者血清ALP及癌組織PIK3R1基因蛋白表達

3 討論

宮頸癌是常見的女性惡性腫瘤，病理檢查是宮頸癌的診斷金標準。正常宮頸由鱗狀上皮細胞、鱗狀柱狀上皮細胞交界處和柱狀上皮細胞組成，細胞形態結構良好，細胞核未見增大、細胞未見變形；而宮頸癌組織中鱗狀上皮細胞異型甚至消失，可見形態異常、藍紫色細胞核，腫瘤累及的宮頸正常形態結構消失，可見不同程度增生的異型腫瘤細胞，細胞核增大、變形、分裂，腫瘤細胞呈團塊狀聚集[7-8]。當前臨床針對Ⅰ～ⅡA期宮頸癌主要以根治性手術及放療為主，多數預后較好，5年生存率超65%，但仍有15%～30%患者在接受根治性手術后復發[9]。針對ⅡB～Ⅳ期宮頸癌患者則主要以放化療為主，預后較差，5年生存率不足15%[10]。當前臨床評價宮頸癌患者預后主要是根據FIGO分期、腫瘤體積、淋巴結轉移等，但有一定滯后性及局限性[11]。而隨著臨床研究的不斷深入，血清標志物在腫瘤疾病中的應用已成為臨床研究的熱點，但現階段宮頸癌相關的血清腫瘤標志物研究相對少見。ALP由肝細胞合成、分泌，廣泛存在于人體各器官中，其中以肝臟、骨骼中含量較高。研究指出，ALP可催化脫氧核酸脫掉5＇-P基團使DNA、RNA片段的5＇-P末端轉換成5＇-OH末端，影響DNA及RNA功能，并進一步影響其相關蛋白質的合成[12]。既往ALP檢測多用于肝臟疾病，當肝臟發生病變時肝細胞過度合成ALP，并通過淋巴管、肝竇進入血液循環而導致血清ALP上升，提示被測者存在肝功能障礙，但其不能明確病因[13]。本研究顯示，宮頸癌組血清ALP顯著高于對照組，且隨著FIGO分期的增加，宮頸癌患者血清ALP也逐漸上升，且合并轉移的宮頸癌患者血清ALP水平更高。既往有研究報道，ALP可影響MAPK信號通路，而異常的MAPK信號通路與腫瘤的發生、發展又密切相關[14]。另隨著腫瘤分期的增加，宮頸癌癌細胞轉移至肝臟、腎臟也可引起肝細胞過度產生ALP，引起ALP上升[14]。

現階段研究證實宮頸癌的發生、發展可能涉及多個基因及步驟，尋找宮頸癌發生過程中分子遺傳學改變以尋找簡便可行的診斷及預后評估指標也是近年學術界研究的熱點。PI3K/蛋白激酶B(AKT)信號通路是宮頸癌的重要信號通路[15]。PI3K/AKT信號通路參與調節細胞生長、增殖、轉化及存活等多種功能，不僅如此PI3K/AKT信號通路也參與細胞的病理過程，其失調可導致細胞生長、增殖及存活失調，與腫瘤細胞的增殖與轉移密切相關。PI3K/AKT信號通路中PI3K可結合定位于質膜的受體而激活，通過磷酸化磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸產生三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3)[16]。而AKT則通過PH結構域結合PIP3而形成磷酸化的AKT，進而啟動PI3K/AKT信號通路。而在PI3K家族中又以Ⅰ型PI3K研究最為廣泛。Ⅰ型PI3K由細胞表面受體激活，是由催化亞基(p110α、p110β、p110δ)、調節亞基(p85α、p55α、p50α、p85β、p55γ)構成的異二聚體，具有類脂激酶和蛋白激酶雙重活性。其中催化亞基p110α由P1K3CA基因編碼，而調節亞基p85α則由PIK3R1基因編碼[17]。本研究顯示，宮頸癌癌組織PIK3R1基因蛋白表達顯著低于對照組；且年齡≥55歲的宮頸癌患者癌組織PIK3R1基因蛋白表達顯著低于<55歲患者，癌組織PIK3R1基因蛋白表達隨FIGO分期增加及分化程度的降低而下降，合并轉移的宮頸癌患者癌組織PIK3R1基因蛋白表達顯著低于未合并轉移患者。提示PIK3R1基因在宮頸癌中可能發揮抑癌基因作用，這與Hamaguchi等[18]報道結論相似。但有研究指出，在卵巢癌、結腸癌中PIK3R1主要發揮癌基因作用[19-20]。基于本研究中ALP、PIK3R1與宮頸癌病理特征的關系，筆者認為或可將ALP、PIK3R1作為宮頸癌患者的預后評估指標。

綜上所述，宮頸癌患者血清ALP水平較高，而PIK3R1基因蛋白表達較低，且ALP、PIK3R1與FIGO分期、腫瘤分化程度及轉移情況有一定關聯，可能參與宮頸癌的發生及發展，或可作為宮頸癌預后評估的指標之一，但具體機制仍有待探究。