BD AffirmTM VPⅢ DNA探針法在陰道炎病原體檢測中的應(yīng)用

李 韜，伏陽燕，陳俐巧

四川綿陽四○四醫(yī)院病理科，四川綿陽 621000

陰道炎是臨床婦科常見疾病[1]。陰道炎主要分為細菌性陰道炎、真菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎3類，其中細菌性陰道炎占15%～50%，其主要病原體為加德納菌，如果沒有及時診治就會出現(xiàn)較多的并發(fā)癥，包括不良妊娠、子宮內(nèi)膜炎、子宮切除術(shù)后陰道殘端蜂窩組織炎等[2]。真菌性陰道炎也是較為常見的陰道感染疾病，據(jù)統(tǒng)計有3/4成年女性一生中會感染一次念珠菌[3]。滴蟲性陰道炎屬于性傳播疾病，但是其檢出率不高[4]。目前，鑒別這三類陰道炎的方法較多，本研究選取357例陰道炎患者為研究對象，同時采用BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法，細菌、真菌、滴蟲培養(yǎng)法檢測，比較4種方法的檢測結(jié)果。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取四川綿陽四○四醫(yī)院2019年1—9月收治的357例陰道炎患者為研究對象，患者均有不同程度的外陰瘙癢、白帶增多及異味等癥狀。

1.2檢測方法

1.2.1BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法 使用無菌采樣拭子從陰道后穹隆處采集標(biāo)本，立即將采樣拭子放入標(biāo)本采集試管中，在試管中加入400 μL的裂解液，并振蕩2～4 s，在85 ℃下孵育10 min，再加入600 μL的緩沖液，并振蕩2～4 s。將試管帽更換為過濾吸頭，并將標(biāo)本全部過濾擠入試劑板的第1孔中，在試劑板的第7孔中加入100 μL的底物溶液。最后將探針分析卡片放入試劑板的第1孔后上機，待結(jié)束后取下探針分析卡，并判讀結(jié)果。

1.2.2細菌培養(yǎng)法 使用無菌棉簽置于陰道后穹窿處，蘸取分泌物后均勻地涂在培養(yǎng)基上，于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，當(dāng)培養(yǎng)基出現(xiàn)明顯的菌落后采用微生物鑒定儀鑒別細菌種類。

1.2.3真菌培養(yǎng)法 使用無菌棉簽置于陰道后穹窿處，蘸取分泌物后均勻地涂在培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h，當(dāng)有明顯菌落生長后觀察菌種。

1.2.4滴蟲培養(yǎng) 使用無菌棉簽置于陰道后穹窿處，蘸取分泌物后均勻地涂在培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h后，涂片觀察有無滴蟲活動[5-6]。

1.3結(jié)果判讀 真菌、細菌、滴蟲培養(yǎng)法按照金標(biāo)準(zhǔn)進行判讀。BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法檢測中觀察分析卡的結(jié)果，其中陽性對照球為藍色，陰性對照球為無色，微生物檢測球中呈藍色視為陽性，呈無色視為陰性。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 分別以細菌、真菌、滴蟲培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)，計算BD AffirmTMVPⅢDNA探針法檢測細菌、真菌、滴蟲的靈敏度、特異度、陰性預(yù)測值和陽性預(yù)測值。靈敏度=真陽性例數(shù)/(真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù))；特異度=真陰性例數(shù)/(假陽性例數(shù)+真陰性例數(shù))；陰性預(yù)測值=真陰性例數(shù)/(假陰性例數(shù)+真陰性例數(shù))；陽性預(yù)測值=真陽性例數(shù)/(真陽性例數(shù)+假陽性例數(shù))。

2 結(jié) 果

2.1BD AffirmTMVPⅢDNA探針法檢出情況 BD AffirmTMVPⅢDNA探針法共檢測出加德納菌陽性195例(54.6%)、念珠菌陽性109例(30.5%)、滴蟲陽性28例(7.8%)，陰性25例(7.0%)。

2.2BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法與細菌、真菌、滴蟲培養(yǎng)法檢測結(jié)果比較 與細菌、真菌、滴蟲培養(yǎng)法檢測結(jié)果比較，BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法檢測的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均在80%以上。見表1～4。

表1 BD AffirmTM VPⅢ DNA探針法與細菌培養(yǎng)法檢測結(jié)果比較(n)

表2 BD AffirmTM VPⅢDNA探針法與真菌培養(yǎng)法檢測結(jié)果比較(n)

表3 BD AffirmTM VPⅢDNA探針法與滴蟲培養(yǎng)法檢測結(jié)果比較(n)

表4 BD AffirmTM VPⅢDNA探針法與3種金標(biāo)準(zhǔn)法的檢測性能比較(%)

3 討 論

陰道炎可引起輸卵管炎、盆腔炎和泌尿系統(tǒng)感染，可導(dǎo)致不孕、流產(chǎn)、胎膜早破、早產(chǎn)、新生兒死亡等不良妊娠結(jié)局[7]。目前，培養(yǎng)法是診斷陰道炎的金標(biāo)準(zhǔn)方法，但是存在耗時長、操作復(fù)雜、主觀性強等缺點，限制了其應(yīng)用。

細菌性陰道炎的主要臨床癥狀為陰道灼熱感、瘙癢，白帶多、魚腥臭味。引起這種癥狀的細菌主要為加德納菌，對于細菌性陰道炎臨床主要采用細菌培養(yǎng)法來檢測，本研究采用的BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法與細菌培養(yǎng)法檢測357例患者的結(jié)果進行比較，靈敏度達到了95.08%，特異度達到了87.93%，且得到了較高的陰性預(yù)測值和陽性預(yù)測值，并且操作簡單，1 h內(nèi)能得出檢測結(jié)果，值得臨床推廣使用。

對于真菌性陰道炎中的念珠菌檢測，與真菌培養(yǎng)法比較，BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法的靈敏度與特異度都比較理想，并且陽性預(yù)測值為93.58%，陰性預(yù)測值為91.13%。據(jù)統(tǒng)計有10%～20%的健康女性陰道中都存在念珠菌，如果沒有癥狀可以不用治療(無癥狀女性念珠菌水平為<103CFU/mL)，有癥狀女性(念珠菌水平≥104CFU/mL)[8]標(biāo)本采用真菌培養(yǎng)法培養(yǎng)可能存在假陽性的結(jié)果，而BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法檢測對于念珠菌≥104CFU/mL的標(biāo)本才判斷為陽性，大大地降低了假陽性結(jié)果的發(fā)生率。

滴蟲性陰道炎是由陰道毛滴蟲引起的女性生殖道炎性反應(yīng)，是較為常見的性傳播疾病之一[9]，BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法與滴蟲培養(yǎng)法比較，靈敏度與特異度都超過了90%，且陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值都很高。由于滴蟲培養(yǎng)的時間較長，并且還需要涂片進行觀察，所以臨床基本沒有使用此方法，而BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法能夠快速給出結(jié)果，操作簡單，值得在臨床上廣泛應(yīng)用。

BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法是以核酸雜交原理為基礎(chǔ)，對每種微生物使用與其獨特基因序列互補的兩個不同的單鏈核酸探針，即捕獲探針和顯色探針。將捕獲探針固定在嵌入探針分析卡中的微球上，對于每種目標(biāo)微生物，探針分析卡中分別包含一種單獨的微球，顯色探針包含在多孔試劑板中。雜交完成后通過顯色試劑顯色確定是否存在微生物感染。BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法減少了人為操作引起的主觀因素，操作簡單，從接收標(biāo)本到報告檢測結(jié)果一般可控制在1 h以內(nèi)，對于標(biāo)本的保存也沒有苛刻的要求，且具有較高的檢出率，也降低了假陽性結(jié)果發(fā)生率，這就減少了漏診、誤診的發(fā)生，同時減少了醫(yī)患糾紛。

綜上所述，BD AffirmTMVPⅢ DNA探針法對陰道炎患者病原體的檢出率較高，并且操作簡單，耗時少，值得臨床推廣使用。