長鏈非編碼RNA MALAT1表達(dá)與胃癌臨床及病理特征的相關(guān)性

閆豐娜，陳敬信

1.商洛國際醫(yī)學(xué)中心醫(yī)院病理科，陜西商洛 726000；2.陜西省森林工業(yè)職工醫(yī)院病理科，陜西西安 710300

胃癌是一種常見的消化道腫瘤，與胃結(jié)節(jié)患者的臨床表現(xiàn)、療效、生存期具有很大差異，細(xì)胞遺傳學(xué)異常與胃癌患者的預(yù)后明顯相關(guān)[1]。尋找診斷及治療胃癌的新靶點(diǎn)，以采取更簡單、有效的診療方式，對改善患者預(yù)后具有重要價(jià)值。長鏈非編碼RNA(lncRNA)為不具備編碼蛋白能力的RNA，也是長度超過200 nt的功能性RNA 分子[2]。lncRNA具有明顯的時(shí)空表達(dá)特異性，可調(diào)控蛋白編碼基因的表達(dá)水平[3]，其由RNA 聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄而來，位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。lncRNA可從不同層面參與到多種生物學(xué)過程中，包括染色體結(jié)構(gòu)、細(xì)胞分化、免疫應(yīng)答等[4-5]。研究表明，lncRNA肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(MALAT-1)在多種腫瘤疾病的發(fā)生與發(fā)展中具有調(diào)控作用[6]，但其在胃癌中的相關(guān)研究鮮有報(bào)道。本研究探討了lncRNA MALAT1表達(dá)與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性，以明確胃癌的發(fā)生機(jī)制，為改善患者預(yù)后提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月至2019年10月在商洛國際醫(yī)學(xué)中心醫(yī)院確診的78例胃癌患者與78例胃結(jié)節(jié)患者為研究對象，分別納入胃癌組與良性組。納入標(biāo)準(zhǔn)：胃癌與胃結(jié)節(jié)均經(jīng)過病理檢查確診；患者臨床資料完整；年齡30～70歲；均為未進(jìn)行治療的初診患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期及哺乳期女性；患有淋巴瘤等其他惡性腫瘤患者；嚴(yán)重免疫缺陷的患者；合并糖尿病患者；臨床資料缺乏患者；不配合調(diào)查患者；合并精神障礙的患者；伴有出血性疾病、出血傾向患者；神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。所有患者均自愿參與本研究，并簽署知情同意書，本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)后進(jìn)行。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2儀器與試劑 PrimeScriptRT Reagent試劑盒購自日本Takara公司，批號：AK2601；定量PCR檢測試劑盒購自德國Qiagen公司，批號：51106；PCR擴(kuò)增儀購自德國Qiagen公司。

1.3方法 采用肝素抗凝劑試管采集所有患者的空腹靜脈血3～5 mL，室溫放置2 h，1 000 r/min離心5 min，取下層全血組織，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞。提取總RNA，采用PrimerScriptRT Reagent試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后采用定量PCR檢測試劑盒檢測lncRNA MALAT1表達(dá)水平。PCR擴(kuò)增條件：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性1 min，55 ℃退火25 s，40個(gè)循環(huán)，4 ℃保存。試驗(yàn)結(jié)果采用相對定量法ΔΔCt進(jìn)行分析，計(jì)算2-ΔΔCt，檢測全血 lncRNA MALAT1相對表達(dá)水平。調(diào)查胃癌患者的病歷資料，包括病理類型、臨床分期、組織分化程度、發(fā)病位置、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移等。同時(shí)隨訪到2020年2月1日，記錄所有患者的生存情況。

2 結(jié) 果

2.1lncRNA MALAT1相對表達(dá)水平及預(yù)后情況比較 胃癌組的lncRNA MALAT1相對表達(dá)水平高于良性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；隨訪到2020年2月1日，良性組存活率明顯高于胃癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組lncRNA MALAT1相對表達(dá)水平及預(yù)后情況比較

2.2胃癌患者lncRNA MALAT1相對表達(dá)水平與臨床及病理特征、預(yù)后的相關(guān)分析 在胃癌組患者中，腺癌54例，鱗癌20例，鱗腺癌4例；臨床分期：Ⅰ期35例，Ⅱ期25例，Ⅲ期18例；組織分化程度：低分化22例，中高分化56例；遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移36例。在胃癌患者中，相關(guān)分析顯示lncRNA MALAT1相對表達(dá)水平與臨床分期、組織分化程度、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、預(yù)后均呈正相關(guān)(r=0.408～0.533,P<0.05)。見表3。

表3 胃癌患者lncRNA MALAT1相對表達(dá)水平與臨床及病理特征、預(yù)后的相關(guān)分析

2.3胃癌患者預(yù)后的影響因素分析 在胃癌患者中，以患者生存作為因變量，以臨床分期、組織分化程度、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、lncRNA MALAT1等作為自變量，多因素Logistic回歸分析顯示臨床分期、組織分化程度、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、lncRNA MALAT1表達(dá)水平均為影響患者預(yù)后的主要因素(P<0.05)。見表4。

表4 胃癌患者預(yù)后的影響因素分析

3 討 論

當(dāng)前胃癌的發(fā)病率明顯升高，胃癌發(fā)病率逐年增加不僅是因?yàn)檫^度診斷，還與一些風(fēng)險(xiǎn)因素相關(guān)，如胰島素抵抗、環(huán)境致癌物和有限的治療手段等[7]。胃癌預(yù)后較好，5年存活率>90%，但是嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量，增加了生活壓力。目前，臨床主要依靠胃鏡、病理學(xué)等手段診斷胃癌，存在一定程度的漏診及誤診。

作為一類非編碼RNA，lncRNA已被發(fā)現(xiàn)可參與多種重要生命過程，在前列腺癌、鼻咽癌、食管癌、乳腺癌中異常表達(dá)[8]。lncRNA可通過調(diào)節(jié)表觀遺傳學(xué)水平、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平等調(diào)控基因的表達(dá)，從而參與腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等病理過程[9]。lncRNA MALAT1可以增加MYC蛋白的半衰期，也可影響細(xì)胞功能，并且可以與miRNA家族結(jié)合而影響miRNA家族對靶基因的作用[10]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組的lncRNA MALAT1相對表達(dá)水平明顯高于良性組(P<0.05)；隨訪到2020年2月1日，良性組的存活率為100.0%，胃癌組的存活率為85.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明下調(diào)lncRNA MALAT1表達(dá)可發(fā)揮抑癌作用。

胃癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多階段、多種癌基因相互作用的復(fù)雜過程，但是具體的機(jī)制還不明確。腫瘤相關(guān)信號通路調(diào)節(jié)異常、表觀遺傳學(xué)修飾等因素均參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程[11]。本研究相關(guān)分析顯示，胃癌患者的lncRNA MALAT1相對表達(dá)水平與臨床分期、組織分化程度、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、預(yù)后都存在相關(guān)性(P<0.05)。從機(jī)制上分析，lncRNA MALAT1位于8號染色體長臂2區(qū)4帶，其位于MYC原癌基因3端60 kb的位置，但是lncRNA MALAT1和MYC對一些疾病的發(fā)生可發(fā)揮獨(dú)立的作用[12]。

胃癌的增殖與侵襲是一個(gè)多步驟、多因素相互作用的復(fù)雜過程，具體的機(jī)制尚不清楚，明確胃癌的轉(zhuǎn)移與侵襲機(jī)制是當(dāng)前研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。基因異常和環(huán)境因素對胃癌的影響已經(jīng)被廣泛研究，但是疾病進(jìn)展過程中所包含的分子機(jī)制并不明確。大量miRNA作為原癌基因或抑癌基因參與了腫瘤的惡性發(fā)展進(jìn)程[13]。本研究中多因素Logistic回歸分析顯示，胃癌患者的臨床分期、組織分化程度、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、lncRNA MALAT1表達(dá)水平均為影響患者預(yù)后的主要因素(P<0.05)。

綜上所述，胃癌的發(fā)生伴隨lncRNA MALAT1的高表達(dá)，其與患者的臨床特征明顯相關(guān)，也是影響患者預(yù)后的重要因素。