Cobas c 501和BNⅡ兩種系統(tǒng)檢測(cè)類(lèi)風(fēng)濕因子的性能分析*

王建偉，謝海花，孫嘉峰

福建省立金山醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建福州 350008

類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)是一種抗人或動(dòng)物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。RF是臨床診斷類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)的重要依據(jù)之一[1-4]。RF常見(jiàn)的檢測(cè)方法有乳膠凝集法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 法和免疫散射比濁法等，目前臨床上多采用免疫散射比濁法和免疫透射比濁法檢測(cè)RF[5]。由于乳膠顆粒增強(qiáng)免疫技術(shù)的靈敏度較高，全自動(dòng)生化分析儀功能日趨完善，而且免疫透射比濁法應(yīng)用在全自動(dòng)生化分析儀上的精密度高、檢測(cè)速度快、消耗成本低，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室采用自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)RF[6-8]。本研究擬對(duì)羅氏全自動(dòng)生化分析儀Cobas c 501(以下簡(jiǎn)稱(chēng)Cobas c 501)和西門(mén)子全自動(dòng)特定蛋白分析儀BNⅡ(以下簡(jiǎn)稱(chēng)BNⅡ)兩種系統(tǒng)檢測(cè)RF的部分性能進(jìn)行分析，并探討二者檢測(cè)結(jié)果之間的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源 43份血清標(biāo)本來(lái)自2018年6月1日至8月31日本院收治的43例患者。

1.2儀器與試劑 Cobas c 501；BNⅡ。適用于Cobas c 501的試劑：RF檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：2297701)、RF定標(biāo)品(批號(hào)：28558201)、RF質(zhì)控品(批號(hào)：277021/277022)來(lái)自德國(guó)羅氏診斷有限公司。適用于BNⅡ的試劑：RF檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：48274)、RF定標(biāo)品(批號(hào)：18390B)來(lái)自德國(guó)西門(mén)子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品(上海)有限公司；液體免疫學(xué)和蛋白質(zhì)控品(批號(hào)：66372/66373)購(gòu)自美國(guó)伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品(上海)有限公司。

1.3檢測(cè)方法 各項(xiàng)操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，相應(yīng)質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品均與標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)，均符合試劑盒質(zhì)控要求。

1.3.1檢測(cè)原理 BNⅡ檢測(cè)RF：采用免疫散射比濁法進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)包被由人-γ-球蛋白/綿羊抗人-γ-球蛋白組成的免疫復(fù)合物的聚苯乙烯顆粒與含有RF的標(biāo)本混合時(shí)，這些顆粒會(huì)凝集起來(lái)，光線通過(guò)懸濁液發(fā)生散射，散射光的強(qiáng)度與標(biāo)本中相關(guān)蛋白水平呈正比，與已知的標(biāo)準(zhǔn)水平對(duì)比可得出結(jié)果。Cobas c 501檢測(cè)RF：采用免疫散射比濁法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)合有熱滅活I(lǐng)gG的乳膠與標(biāo)本中RF-抗體發(fā)生凝集反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物。

1.3.2精密度評(píng)價(jià) 按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)EP15-A2標(biāo)準(zhǔn)：2個(gè)水平，5 d試驗(yàn)，每天一批，每批每個(gè)水平重復(fù)檢測(cè)3次。

1.3.3正確度評(píng)價(jià) 根據(jù)《臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南》(CNAS-GL037)，實(shí)驗(yàn)室可采用偏倚評(píng)估、回收試驗(yàn)、與參考方法比對(duì)等方式進(jìn)行正確度的驗(yàn)證。本研究通過(guò)偏倚評(píng)估進(jìn)行正確度的驗(yàn)證：對(duì)2017、2018年中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心和福建省臨床檢驗(yàn)中心提供的室間質(zhì)評(píng)質(zhì)控品20份進(jìn)行檢測(cè)，比較回報(bào)靶值和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算偏倚及平均偏倚。 偏倚(%)=[檢測(cè)值-參照值(靶值)]/參照值(靶值)×100%，平均偏倚(%)=[偏倚(絕對(duì)值)/數(shù)據(jù)個(gè)數(shù)]×100% 。 如果平均偏倚小于1/2 PT(生物學(xué)變異與分析質(zhì)量要求允許總誤差10%)，說(shuō)明該檢測(cè)系統(tǒng)的正確度在允許的誤差范圍內(nèi)。

1.3.4相關(guān)性評(píng)價(jià) 對(duì)本院檢驗(yàn)科免疫室2018年6月1日至8月31日收到的43份檢測(cè)RF的標(biāo)本同時(shí)采用Cobas c 501和BNⅡ進(jìn)行檢測(cè)，將結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件及Excel2019統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析。檢測(cè)結(jié)果小于檢測(cè)下限的結(jié)果歸化為1。

2 結(jié) 果

2.1精密度驗(yàn)證 采用Cobas c 501檢測(cè)RF，其批內(nèi)精密度(低、高水平)均<1/4TEa，批間精密度(低、高水平)均<1/3TEa，見(jiàn)表1。采用BNⅡ檢測(cè)RF，其批內(nèi)精密度(低、高水平)均<1/4TEa，批間精密度(低、高水平)均<1/3TEa。見(jiàn)表2。

表1 Cobas c 501精密度驗(yàn)證結(jié)果

表2 BNⅡ精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.2正確度驗(yàn)證 采用Cobas c 501檢測(cè)RF的正確度驗(yàn)證結(jié)果，平均偏倚為3.67%，小于1/2 PT，該檢測(cè)系統(tǒng)的正確度在允許的誤差范圍內(nèi)。采用BNⅡ檢測(cè)RF的正確度驗(yàn)證結(jié)果，平均偏倚為4.46%，小于1/2 PT，該檢測(cè)系統(tǒng)的正確度在允許的誤差范圍內(nèi)。

2.3兩種方法檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性分析 以采用Cobas c 501檢測(cè)的結(jié)果為X軸，以采用BNⅡ檢測(cè)的結(jié)果為Y軸，分析結(jié)果顯示二者具有良好的相關(guān)性(Y=1.057 9X+0.526,R2=0.990 6)，見(jiàn)圖1。

圖1 兩種檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性分析

3 討 論

RF無(wú)明顯的種屬特異性，是由感染因子刺激機(jī)體產(chǎn)生的一種自身抗體，以變性IgG為抗原。RF主要存在于RA及某些風(fēng)濕免疫性疾病患者的血清和關(guān)節(jié)液中，RF有IgG、IgM、IgA、IgD和IgE等5種抗原[9-12]。當(dāng)前臨床檢驗(yàn)技術(shù)不斷發(fā)展，RF的檢測(cè)出現(xiàn)了許多新的方法，其中全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)越來(lái)越受到臨床實(shí)驗(yàn)室的青睞。全自動(dòng)生化分析儀功能日趨完善，而且具有自動(dòng)化程度高、檢測(cè)速度快、消耗成本低等特點(diǎn)。

本研究嚴(yán)格按照CLSI文件中的要求對(duì)兩臺(tái)儀器的精密度、正確度進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示兩臺(tái)儀器的低、高水平批內(nèi)精密度均<1/4TEa(實(shí)驗(yàn)室允許不精密度為6.25%)，批間精密度均<1/3TEa(實(shí)驗(yàn)室允許不精密度為8.33%)。正確度驗(yàn)證結(jié)果顯示，采用Cobas c 501和BNⅡ兩種系統(tǒng)的平均偏倚分別為3.67%、4.46%，正確度均較高。同時(shí)，本研究對(duì)相同標(biāo)本同時(shí)在兩種系統(tǒng)上的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示兩種檢測(cè)系統(tǒng)相關(guān)性良好。實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，BNⅡ配套R(shí)F試劑開(kāi)瓶后穩(wěn)定時(shí)間較短，當(dāng)天開(kāi)瓶試劑未使用完，待后面檢測(cè)時(shí)，對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較大，易出現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控失控現(xiàn)象。

綜上所述，Cobas c 501和BNⅡ均適用于臨床進(jìn)行RF的檢測(cè)，然而B(niǎo)NⅡ試劑開(kāi)瓶后穩(wěn)定性時(shí)間較短，更適用于標(biāo)本量較大的實(shí)驗(yàn)室；Cobas c 501上機(jī)穩(wěn)定時(shí)間較長(zhǎng)，適用于標(biāo)本量較少的實(shí)驗(yàn)室。