過濾有凝塊獻血者血液的質量探討*

林惠燕，孫愛農，何銳洪，葛 峰

中山市中心血站，廣東中山 528403

血液是一種特殊的寶貴資源，據統計全球每年大約有1.174億人獻血，按照美國的數據統計，獻血人次與輸血患者比例為3∶1，全球每年接受輸血的患者高達3 000萬例[1]。血液在采集過程中，因獻血者血流不暢、血管太細等原因，造成血液與采血袋里的抗凝劑不能及時和充分混勻，就會激活離體后凝血系統，出現大小不一的血液凝塊[2]，對于外觀明顯發現凝塊的血液都會直接進行報廢處理，導致血液報廢率隨之增加[3]，然而一些細小的凝塊和纖維蛋白析出往往很難被發現[4]。考慮到采血不暢血液不會用于洗滌紅細胞、新鮮冰凍血漿、冷沉淀凝血因子等血液制品制備，因此本研究標本僅使用懸浮紅細胞和冰凍血漿，并對其分別做相應質量檢測，探討過濾后的血液質量指標變化，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1標本來源 選取來自中山市中心血站2019年3-12月采集過程中血流不暢的血液230袋，過濾后發現凝塊和血漿纖維蛋白析出的血液共30袋，該30袋血液檢測結果均合格，獻血者年齡18～55歲，中位年齡36歲；男12例(40%)，女18例(60%)。

1.2試劑與耗材 血漿游離血紅蛋白測定試劑盒、血漿總蛋白測定試劑盒均由北京瑞爾達公司提供；血漿纖維蛋白原測定試劑盒由西門子公司提供；一次性使用去白細胞塑料血袋(簡稱：濾白血袋)由山東威高集團醫用高分子制品股份有限公司提供；一次性使用塑料血袋轉移袋Tr-200(簡稱轉移袋)由費森尤斯卡比(廣州)醫療用品有限公司提供。所有試劑和耗材均有醫療器械注冊證，并在有效期內使用。

1.3儀器與環境 檢測儀器包括SC-203A無菌接駁機(日本TERUMO)、SE250熱合機(韓國Centron)、 Sysmex KX-21全自動血液分析儀(日本希森美康)、CH190-1A臺式低速離心機(上海醫療器械)、4040半自動生化儀(德國ROBERT RIELE)、BacT/ALERT 3D(120)培養儀(法國生物梅里埃)、Versa TREK 培養儀(美國賽默飛世爾)、CX-40電子顯微鏡(日本奧林巴斯)、Thermo單通道移液器5～50、20～200、100～1 000 μL(美國賽默飛世爾)。在恒溫實驗室(室溫22～25 ℃、濕度40%～60%)完成所有試驗，所有儀器檢測結果均可通過校準溯源至參考方法。

1.4方法

1.4.1計算采血不暢血液發生率 記錄2019年3-12月采集血液總袋數和采血現場標記采血不暢血液總袋數，登記過濾血液凝塊后的血液袋數，計算肉眼可見血液凝塊在采血不暢血液中的發生率。

1.4.2血液凝塊大小測量 使用透明塑料直尺測量紅細胞母袋和過濾網中殘留凝塊直徑，判斷肉眼可見血液凝塊大小，并計算相關比例。

1.4.3血液凝塊過濾步驟 將采血現場標記為采血不暢的血液制備成懸浮紅細胞后，接駁濾白血袋，懸掛于工作柜支架上，利用自然重力作用，使血液經過濾器進行過濾。

1.4.4懸浮紅細胞容量計算與留樣檢測 記錄懸浮紅細胞過濾前和過濾后的重量變化，并且計算血容量回收率。過濾前留樣20 mL作為過濾前的對照標本；過濾后分別接駁5份懸浮紅細胞于轉移袋，每份留樣20 mL待檢測使用，在轉移袋中標記7、14、21、28、35 d，放置于2～4 ℃貯血冰箱保存。過濾袋剩余懸浮紅細胞樣品視為0 d樣品，立即進行血細胞比容(Hct)、血紅蛋白(Hb)、溶血率、無菌試驗及顯微鏡鏡檢檢測，并依次對貯存7、14、21、28、35 d的懸浮紅細胞分別測定相應數據并記錄，所有檢測均按照《全血及成分血質量要求：GB18469-2012》[5]進行，并評估血液質量。

1.4.5血漿檢測 每份制備好的冰凍血漿分別接駁留樣5 mL，立即進行血漿總蛋白(TP)和血漿纖維蛋白原(FIB)檢測。

1.5統計學處理 采用SPSS23.0統計軟件進行數據處理及統計分析，不同血液凝塊大小的懸浮紅細胞Hct與Hb比較采用獨立樣本t檢驗，溶血率比較采用配對樣本t檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1采血不暢血液發生率 共采集血液39 831袋，其中采血現場標記為采血不暢血液230袋，采血不暢血液占采集血液比例0.58%(230/39 831)；經過濾后肉眼可見血液凝塊與纖維蛋白析出共30袋，肉眼可見血液凝塊占采血不暢血液的13.04%(30/230)。

2.2血液凝塊大小判斷 在30袋含有血液凝塊和纖維蛋白析出的血液中，血液凝塊<10 mm共11袋，占36.7%(11/30)；10～<20 mm共2袋，占6.7%(2/30)；20～<30 mm共8袋，占26.7%(8/30)；30～<40 mm共4袋，占13.3%(4/30)；40～<50 mm共3袋，占10.0%(3/30)；≥50 mm共2袋，占6.7%(2/30)。其中血液凝塊<10 mm的以碎狀凝塊為主，個別為纖維蛋白析出。

2.3懸浮紅細胞容量計算 過濾前后懸浮紅細胞容量結果及其回收率結果見表1。

表1 過濾前后懸浮紅細胞容量結果

2.4Hct和Hb指標變化 經計算30份懸浮紅細胞Hct和Hb均達到質量標準；過濾前和過濾后Hct和Hb沒有明顯變化；血液凝塊<20 mm的懸浮紅細胞Hct和Hb均符合質量標準，血液凝塊≥20 mm的懸浮紅細胞Hct不符合標準，Hb符合標準，Hct均低于0.50，過濾后的懸浮紅細胞經檢測質量合格率為43.3%(13/30)；過濾前血液凝塊<20 mm與≥20 mm的懸浮紅細胞Hct比較，差異有統計學意義(t=8.384，P<0.05)；過濾后血液凝塊<20 mm與≥20 mm的懸浮紅細胞Hct比較，差異有統計學意義(t=7.410，P<0.05)；過濾前血液凝塊<20 mm與≥20 mm的懸浮紅細胞Hb比較，差異有統計學意義(t=6.573，P<0.05)；過濾后血液凝塊<20 mm與≥20 mm的懸浮紅細胞Hb比較，差異有統計學意義(t=5.987，P<0.05)。見表2。

表2 懸浮紅細胞過濾前后Hct、Hb結果比較

2.5血液凝塊<20 mm懸浮紅細胞不同貯存時間溶血率變化 因血液凝塊≥20 mm懸浮紅細胞不符合質量標準，所以溶血率試驗只對血液凝塊<20 mm懸浮紅細胞進行檢測。貯存0～28 d過濾前和過濾后懸浮紅細胞溶血率比較，差異無統計學意義(P>0.05)；貯存35 d過濾前和過濾后懸浮紅細胞溶血率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 血液凝塊<20 mm懸浮紅細胞不同貯存時間溶血率比較

2.6血漿TP和FIB檢測 檢測30袋過濾后血液發現血液凝塊和纖維蛋白析出的冰凍血漿，其中25袋檢測合格，TP為(53.88±3.40)g/L，FIB為(235.32±30.63)mg/dL；另外5袋為纖維蛋白析出，TP為(46.62±2.93)g/L，均不合格，FIB為(181.00±21.63)mg/dL，與正常血漿結果比較略低。

2.7鏡檢紅細胞聚集情況和無菌試驗 取貯存0 d過濾前和過濾后標本分別涂抹在玻璃片上，使用顯微鏡觀察發現，過濾前個別標本出現明顯紅細胞聚集，而過濾后沒有發現明顯紅細胞聚集。過濾后懸浮紅細胞細菌培養結果均無細菌生長。

3 討 論

懸浮紅細胞是臨床醫院使用較多的一種血液成分，主要用于改善機體攜氧功能。懸浮紅細胞數量、Hct、Hb、溶血率等是衡量懸浮紅細胞質量的重要指標。本研究結果顯示，采血不暢血液占采集血液比例為0.58%，肉眼可見血液凝塊占采血不暢的13.04%；發現血液凝塊的懸浮紅細胞容量均符合質量要求，經過濾后血容量變化較少且均能達到標示量±10%的要求，與盧珍萍[6]的觀點一致，過濾后標示血量為1.0、1.5、2.0 U的血液回收率分別為(93.79±4.51)%、(95.22±3.26)%、(95.09±2.54)%。血液凝塊<20 mm的懸浮紅細胞Hct和Hb都符合標準，過濾后的懸浮紅細胞經檢測質量合格率為43.3%。因此，建議成分制備過程中發現血液凝塊≥20 mm的懸浮紅細胞可以直接報廢處理。

過濾后的懸浮紅細胞因過濾過程中的機械損傷使其游離Hb高于過濾前，所以過濾后溶血率會較過濾前稍升高，貯存0～28 d的懸浮紅細胞過濾前后溶血率比較，差異無統計學意義(P>0.05)；貯存35 d過濾后溶血率較過濾前升高，差異有統計學意義(P<0.05)，但均在國家標準范圍以內。 檢測30袋過濾后血液發現血液凝塊和纖維蛋白析出的冰凍血漿，其中25袋檢測合格，另外5袋血漿TP均不合格，FIB與正常血漿結果比較略低。建議制備過程中如發現纖維蛋白析出的血液，直接報廢處理。另外，使用顯微鏡鏡檢發現過濾前個別懸浮紅細胞標本出現明顯紅細胞聚集，而過濾后沒有發現明顯紅細胞聚集，這與白細胞濾器主要為機械攔截過濾和電荷吸附作用的過濾機制有關[7]，經過白細胞濾器的過濾可以在一定程度上去除血液中的雜質，并能夠降低活化白細胞的數量[8-9]，因此不排除可以有效濾除凝集大的細胞與凝塊。過濾后懸浮紅細胞細菌培養結果均無細菌生長。由于本研究中血液凝塊<20 mm和有纖維蛋白析出的標本數較少，需要考慮標本量不平衡可能對試驗結果造成的偏倚，今后還應擴大樣本量，豐富完善相關數據。

根據國家規定，一些采供血機構已對血液中紅細胞成分使用白細胞濾器進行了過濾，制備成去白細胞懸浮紅細胞[10-12]，因此，臨床使用時均已去除白細胞和血液凝塊，明顯減少了不良輸血反應，使用效果良好，是輸血界推薦的成分血。本研究將懸浮紅細胞用白細胞濾器進行了過濾，實際上是制備了去白細胞懸浮紅細胞成分，并得到過濾血液凝塊后的血液質量檢測數據，結果表明在一定范圍內安全有效。

綜上所述，血液凝塊≥20 mm的懸浮紅細胞質量檢測不合格，血液凝塊<20 mm的懸浮紅細胞質量檢測合格。纖維蛋白析出的冰凍血漿TP檢測不合格。血液采集時，應對采血過程進行嚴格管理，提高采血人員采血技術，避免血管異常獻血者獻血，減少血液凝塊產生，避免血液報廢，有條件時推廣白細胞濾器的全面使用，讓臨床獲得不良反應較少的去白細胞懸浮紅細胞成分血。