不同類型珠蛋白生成障礙性貧血的基因型和血液學(xué)指標(biāo)特征*

查 何，李 英

遵義市第一人民醫(yī)院/遵義醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院:1.檢驗科；2.輸血科，貴州遵義 563000

珠蛋白生成障礙性貧血(以下簡稱地貧)是由一種或多種珠蛋白基因缺陷引起的正常珠蛋白鏈合成障礙的遺傳性溶血性貧血，其中以α和β地貧較為常見[1]。我國地貧多發(fā)于廣東、廣西、海南及云貴川地區(qū)，是引起胎兒出生缺陷、圍產(chǎn)兒死亡的重要原因之一[2]。臨床確診地貧主要依賴于聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)或其他分子診斷技術(shù)，但限于檢測成本及技術(shù)本身的缺陷，目前PCR尚不能用于普通人群地貧的篩查。血常規(guī)指標(biāo)是臨床診斷貧血的必要輔助手段[3]，其參數(shù)的改變是最為簡單快捷的地貧篩查指標(biāo)，如平均紅細(xì)胞體積(MCV)對地貧診斷的靈敏度高達(dá)90%，但其特異度并不理想[4]。血紅蛋白(Hb)電泳是檢查異常Hb(如Hb Bart′ s、HbH和HbE)和篩查β地貧的重要方法，但對α地貧、靜止型或輕型地貧仍有漏檢的可能[5]。本研究通過對MCV、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)和Hb電泳單項檢測和聯(lián)合檢測進(jìn)行分析比較，評價其在地貧篩查中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年1月至2019年3月經(jīng)遵義市第一人民醫(yī)院/遵義醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗科行地貧基因分型檢測確診的286例地貧患者納入地貧組，同期200例體檢健康者作為健康對照者納入對照組，均進(jìn)行血常規(guī)和Hb電泳檢測。研究對象年齡0～78歲，平均(36.2±7.4)歲，其中男127例，女359例。地貧組中男42例，女244例；對照組中男85例，女115例。所有研究對象按照年齡進(jìn)一步分為3個年齡組，0～<17歲為兒童與少年組，17～<65歲為青中年組，65～78歲為老年組。

1.2檢測方法

1.2.1標(biāo)本采集 對所有研究對象行無菌靜脈穿刺術(shù)抽取2～3 mL外周靜脈血注入乙二胺四乙酸二鉀抗凝的真空采血管，混勻后立即送檢。

1.2.2地貧基因分型檢測 地貧基因分型檢測采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的地貧(α/β型)基因檢測試劑盒(PCR-流式熒光雜交法)，PCR擴增和雜交使用Bio-Rad T100 PCR擴增儀，雜交信號檢測采用Luminex MAGPIX檢測儀，并通過配套的分析軟件判讀分型結(jié)果。

1.2.3血常規(guī)檢測 采用日本Sysmex XE-2100全自動血細(xì)胞分析儀和原裝配套試劑對標(biāo)本進(jìn)行檢測，并分析MCV和MCH在不同類型地貧中的差異。MCV的正常參考范圍為80～100 fL；MCH的正常參考范圍為27～34 pg。

1.2.4Hb電泳檢測 采用法國Sebia MINICAP毛細(xì)管電泳儀和MINICAP HEMOGLOBIN(E)配套試劑盒對標(biāo)本Hb進(jìn)行檢測，并分析HbA、HbA2在不同類型地貧中的差異。HbA的正常參考范圍為>94.5%；HbA2的正常參考范圍為2.4%～3.2%；HbF的正常參考范圍為<2%。

2 結(jié) 果

2.1α和β地貧基因檢測結(jié)果 286例確診地貧患者，檢出α地貧113例，占39.51%，其中兒童與少年組31例，青中年組63例，老年組19例。共檢出8種α地貧基因型：-α4.2/αα、-α3.7/αα、--SEA/αα、ααCS/αα、ααQS/αα、ααWS/αα、--SEA/-α4.2和--SEA/-α3.7。不論哪個年齡組，α地貧的主要基因型均為-α4.2/αα、-α3.7/αα、--SEA/αα，占α地貧的92.92%，其中--SEA/αα是檢出率最高的α地貧基因型。見表1。β地貧共檢出168例，占58.74%，其中兒童與少年組42例，青中年組106例，老年組20例。β地貧共檢出10種基因型：CD41-42、IVS-Ⅱ-654、CD17、-28、CD26、CD71-72、CD43、-29、CD14-15和CD27-28。3個年齡組檢出頻率最高基因型均為IVS-Ⅱ-654、CD41-42、CD17，共占94.64%，其中IVS-Ⅱ-654是檢出率最高的β地貧基因型。見表2。α/β復(fù)合型地貧共檢出5例，陽性率為1.75%，檢出的基因型為--SEA/αα合并IVS-Ⅱ-654、-α3.7/αα合并IVS-Ⅱ-654、-α3.7/αα合并CD41-42。

表1 各基因類型α地貧的分布情況[n(%)]

表2 各基因類型β地貧的分布情況[n(%)]

2.2血液學(xué)指標(biāo)檢查結(jié)果 健康對照者M(jìn)CV和MCH均為正常或略低于正常參考范圍，Hb電泳結(jié)果多為正常，個別研究對象的HbA下降，無異常條帶。α地貧患者HbA2結(jié)果正常或低于正常參考范圍，與健康對照者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但--SEA/-α4.2和--SEA/-α3.7型α地貧患者HbA和HbA2均降低，也可見HbH條帶，HbF正常或下降。β地貧患者的HbA2與健康對照者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);HbA正常或低于正常參考范圍，與健康對照者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);HbF正常或高于正常參考范圍，與健康對照者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);其中1例HbE復(fù)合β地貧檢測出HbE條帶。而α/β復(fù)合型地貧患者的HbA2均高于正常參考范圍，與健康對照者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而HbF降低或無，與健康對照者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；HbA明顯下降，與健康對照者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 血液學(xué)指標(biāo)檢查結(jié)果

2.3MCV、MCH和HbA2單項檢測和聯(lián)合檢測診斷效能 本研究診斷地貧的截斷值設(shè)置為MCV<80 fL，MCH<27 pg，HbA2>3.2%或HbA2<2.4%，或發(fā)現(xiàn)異常Hb條帶(如HbH、HbE等)。比較MCV、MCH和HbA2單項檢測和聯(lián)合檢測的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MCV和MCH單項檢測診斷地貧的靈敏度高，而特異度不高，見表4、5；HbA2單項檢測的特異度較高，靈敏度卻偏低，見表5。MCV、MCH和Hb電泳的平行聯(lián)合檢測可提高地貧診斷的靈敏度和陰性預(yù)測值，而系列聯(lián)合檢測可提高地貧診斷的特異度和陽性預(yù)測值，并且平行聯(lián)合檢測和系列聯(lián)合檢測的診斷準(zhǔn)確度均較單項檢測有所提高，見表6、7。

表4 MCV、MCH和HbA2單項檢測診斷地貧的結(jié)果(n)

表5 MCV、MCH和HbA2單項檢測診斷地貧的評價指標(biāo)(%)

表6 MCV、MCH和HbA2聯(lián)合檢測診斷地貧的結(jié)果(n)

表7 MCV、MCH和Hb電泳聯(lián)合檢測診斷地貧的評價指標(biāo)(%)

3 討 論

地貧屬于珠蛋白基因突變或缺失所致的遺傳性疾病，目前尚無根治方法[6]。因此，對普通人群進(jìn)行地貧篩查以確定高風(fēng)險對象，阻斷重癥患兒的出生是最為有效的預(yù)防措施[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，通過分子診斷確診的286例地貧患者中，α地貧占39.51%，其中--SEA/αα基因型是α地貧最主要類型，這與貴州、廣東等地區(qū)的基因型相同[8-9]。β地貧占58.74%，以IVS-Ⅱ-654、CD17、CD41-42最為常見，這與國內(nèi)相關(guān)報道較為一致[9]。α/β復(fù)合型地貧較為少見，僅占1.75%，主要以--SEA/αα合并IVS-Ⅱ-654突變型、-α3.7/αα合并IVS-Ⅱ-654、-α3.7/αα合并CD41-42突變型為主，是中國人群的常見復(fù)合類型。

地貧患者因Hb合成障礙和鐵利用率下降，導(dǎo)致Hb成分和含量改變，呈小細(xì)胞低色素貧血[9]。其血常規(guī)參數(shù)MCV和MCH均不同程度地降低，被普遍用于篩查地貧基因攜帶者，但MCV和MCH診斷特異度不高，易發(fā)生誤診[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，健康對照者的MCV和MCH均在正常參考范圍或略低于正常參考范圍，而地貧患者的MCV和MCH均有不同程度降低。MCV和MCH單項檢測在地貧篩查中的靈敏度分別為90.56%和91.96%，但是特異度僅為76.00%和81.50%，不可直接用于普通人群的地貧篩查。

Hb電泳檢測是初步分類地貧類型(α或β地貧)和篩查異常Hb的最主要方法[11]。本研究結(jié)果顯示，健康對照者的Hb電泳結(jié)果大多數(shù)為正常，個別研究對象的HbA略低于正常參考范圍，無異常條帶。地貧患者的Hb電泳結(jié)果較為復(fù)雜，α地貧患者大多數(shù)正常或低于正常參考范圍，但--SEA/-α4.2和--SEA/-α3.7型α地貧患者HbA和HbA2均下降，也可見HbH條帶，HbF可正常或下降；β地貧患者大多數(shù)表現(xiàn)為HbA2高于正常參考范圍，HbA可正常或降低，HbF可正常或升高；而α/β復(fù)合型地貧Hb電泳結(jié)果為HbA2高于正常參考范圍，表現(xiàn)為β地貧的特點，這是因為α/β復(fù)合型地貧患者血紅蛋白α鏈和β鏈合成均降低，但由于HbA占比高，其合成速度降低的幅度明顯超過HbA2，表現(xiàn)為HbA2的比例相對升高[12]。HbA2單項檢測在地貧篩查中的特異度高達(dá)96.50%，而靈敏度僅為80.07%，容易發(fā)生漏診。通過分析MCV、MCH和HbA2聯(lián)合檢測結(jié)果，發(fā)現(xiàn)平行聯(lián)合檢測MCV、MCH和HbA2的靈敏度達(dá)100.00%，陰性預(yù)測值也為100.00%，準(zhǔn)確度高達(dá)91.56%；系列聯(lián)合檢測MCV、MCH和Hb電泳的特異度為100.00%，陽性預(yù)測值也為100.00%，準(zhǔn)確度提升至87.86%，可見在地貧篩查中聯(lián)合檢查能明顯減少漏診和誤診概率，提升篩查的準(zhǔn)確性。

綜上所述，將MCV、MCH和Hb電泳聯(lián)合檢測可能是較為合適的地貧篩選方法，可為優(yōu)生優(yōu)育和遺傳咨詢提供診斷依據(jù)，對減少地貧基因攜帶者的數(shù)量和預(yù)防重癥地貧患兒的出生具有重大的現(xiàn)實意義。