錯配修復蛋白表達與子宮內膜癌患者臨床特征及預后的關系

喬明靜，陳雁南，李飛燕，張峰，路攀，楊立

鄭州大學第三附屬醫院婦產科，鄭州 450000

子宮內膜癌作為現代女性常見且高發的惡性腫瘤之一，其主要發生于子宮內膜上皮組織，多見于圍絕經期及絕經后女性，其發病率呈逐年上升趨勢，現已居女性生殖系統高發惡性腫瘤的第二位。目前，子宮內膜癌早期診斷準確率相對較高，患者均獲得較長的生存期。但有研究顯示，子宮內膜癌患者若有相關家族史，其發生風險將大大增加，且以林奇綜合征相關子宮內膜癌為主。林奇綜合征是常染色體顯性遺傳性綜合征，具有孟德爾常染色體不完全顯性遺傳特點，此類腫瘤易感性是由DNA錯配修復（mismatch repair，MMR）基因胚系突變造成的，臨床研究數據表明，女性林奇綜合征后子宮內膜癌發生率為20%～60%。目前，子宮內膜癌發生平均年齡約為60歲，但患有林奇綜合征女性的發病年齡則提前到49歲，故臨床對林奇綜合征相關子宮內膜癌診斷、預防關注度日益提升，但其在國內研究仍處于起步階段，僅有少部分醫療機構和檢測中心已開展此項檢測，但檢測結果尚未得到婦產科醫師足夠重視。相關研究結果顯示，子宮內膜癌發生可能與MMR基因突變有關，但現有研究尚未證明此觀點，且多數研究數據仍來自歐美國家，流行病學、遺傳學改變、臨床病理組織學特征是否適合中國國民，仍有待考證。基于此，本文對MMR蛋白表達與子宮內膜癌患者臨床特征及預后的關系進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月至2019年5月鄭州大學第三附屬醫院收治的子宮內膜癌患者。納入標準：參照《2011年NCCN子宮內膜癌臨床實踐指南》，經術后組織病理檢查確診為子宮內膜癌；接受全子宮切除術治療；初次手術；內膜標本組織均為甲醛溶液固定石蠟包埋組織；臨床資料完整。排除標準：合并其他惡性腫瘤、重要臟器功能不全等；合并血液系統、免疫系統等可能影響免疫組化結果的疾病；隨訪失訪患者；有放療、化療、生物免疫治療史；接受過激素替代治療。根據納入與排除標準，本研究共納入82例子宮內膜癌患者，并收集82例子宮內膜癌患者術后的石蠟包埋子宮內膜組織。

1.2 檢測方法

使用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法（streptavidin-perosidase，SP）法檢測子宮內膜癌患者術后石蠟包埋子宮內膜癌組織中的MMR 蛋白，包括 MLH1、PMS2、MSH2、MSH6，具體檢查方式如下：取石蠟包埋組織4 μm切片經蘇木素-伊紅（hematoxylin and eosi，HE）染色→二甲苯脫蠟→梯度酒精復水→修復抗原→血清封閉→一抗4℃過夜孵育（小鼠抗人MLH1單抗、兔抗人PMS-2單抗、兔抗人MSH2單抗、兔抗人MSH6單抗）→加入二抗孵育→顯色→蘇木素復染→封片，全部操作完成后對收集染色圖像，在染色相對滿意的切片中選取5個視野清晰區域進行結果判定，均以磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗作為空白對照。MMR蛋白表達判定：陽性為腫瘤細胞核中出現棕褐色、棕黃色顆粒，陰性則為細胞核中無著色；MLH1、PMS2、MSH2、MSH6四種蛋白全部為陽性表達，說明MMR蛋白正常表達，即MMR蛋白表達未缺失，MMR蛋白表達缺失為 MLH1、PMS2、MSH2、MSH6中至少有1個蛋白呈陰性表達，說明MMR蛋白表達缺失。

1.3 觀察指標

收集入組患者的病歷資料，逐一查核實原始記錄，并由專人統計年齡、腫瘤家族史、病理類型、肌層浸潤深度、組織學分級、分化程度、淋巴結轉移情況、累及子宮下段情況、脈管內癌栓情況。

1.4 隨訪

入組患者實施為期1年隨訪，截止時間為2020年5月31日，按規定填寫隨訪記錄登記表，隨訪方式主要有門診隨診、家訪隨診、電話隨診等。

1.5 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件對數據進行統計分析，計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ檢驗；將有統計學差異的臨床特征行Spearman相關性分析；以P﹤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白的表達情況

82例子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白表達未缺失58例（70.73%），缺失24例（29.27%），其中PMS2蛋白表達缺失2例（2.44%）、MSH6蛋白表達缺失3例（3.66%）、MLH1/PMS2蛋白同時表達缺失15例（18.29%）、MSH2/MSH6蛋白同時表達缺失4例（4.88%）。（圖1）

圖1 子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白表達情況（SP法，×200）

2.2 不同臨床特征子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白表達情況的比較

不同年齡、病理類型、肌層浸潤深度、組織學分級、分化程度子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白缺失情況比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）；不同腫瘤家族史、淋巴結轉移情況、累及子宮下段情況、脈管內癌栓情況子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白缺失情況比較，差異均有統計學意義（P﹤0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白表達情況的比較

2.3 MMR蛋白表達缺失與子宮內膜癌患者臨床特征的相關性分析

Spearman相關性分析結果顯示，MMR蛋白缺失與子宮內膜癌患者腫瘤家族史、淋巴結轉移、累及子宮下段、脈管內癌栓間均呈正相關（P﹤0.05）。（表2）

表2 子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白缺失與主要臨床特征的相關性分析

2.4 MMR蛋白表達缺失與子宮內膜癌患者預后的關系

82例子宮內膜癌患者隨訪1年后，復發率為19.51%（16/82），其中MMR蛋白缺失子宮內膜癌患者術后復發率為16.67%（4/24），未缺失患者術后復發率為20.69%（12/58），差異無統計學意義（χ=0.175，P=0.768）。

3 討論

林奇綜合征也被稱為遺傳性非息肉病性結直腸癌，是傳性結直腸癌較為常見的表現之一，多項研究結果顯示，林奇綜合征婦女子宮內膜癌發生風險相對較高，嚴重危害女性的身體健康。林奇綜合征最常見的類型為MMR蛋白缺失，近年來有研究顯示，MMR基因突變也會在一定程度上導致子宮內膜發生癌變，其中MLH1、MSH2、MSH6基因突變率依次為50%～66%、24%～40%、10%～13%，但目前研究尚無定論。

MMR蛋白可在一定程度上保持染色體穩定，當其表達出現缺失后極易誘發DNA突變，本研究結果顯示，子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白表達缺失主要是MLH1/PMS2同時缺失，這與時俊宇等研究結果中存在一定差異，該研究認為MMR蛋白表達缺失主要為MLH1、MSH2缺失，這可能與本研究為回顧性分析有關，本研究樣本主要為本地區人群，納入樣本量也受研究地點及時間限制，導致本研究在樣本的選擇上存在偏移；本研究單使用免疫組化法對患者進行篩查，也存在部分檢查結果假陽性的情況，進而造成研究結果與其他研究結果存在一定的差異性。

隨著臨床對子宮內膜癌研究的日益增多，多項研究結果顯示，僅通過女性年齡、臨床特征等選擇性篩查手段，仍存在一定的漏診率，尤其是對伴有林奇綜合征相關性子宮內膜癌的篩查。林奇綜合征相關性子宮內膜癌主要臨床表現主要為無刺激素刺激癥狀、伴或不伴不規則陰道出血等，目前，中國子宮內膜癌患者通常難以負擔基因檢測費用，導致MMR蛋白免疫組化檢測是現階段林奇綜合征常見的檢查方式之一。MMR系統作為特異性DNA修復機制之一，主要是通過校正DNA復制期間堿基配對出現的替代、錯配、插入、缺失等，幫助維持基因組完整性，而林奇綜合征中MMR蛋白缺失則是由后天獲得性缺陷導致，因而在其免疫組化檢測中可獲得較為準確的檢測結果。多項研究結果顯示，子宮內膜癌多為散發病例，而林奇綜合征相關性子宮內膜癌發病年齡則早于此類患者，患者術后臨床特征表現出明顯的多樣性和異質性，且多數學者認為該類疾病常見于子宮體下段。秦慧芬研究將MMR蛋白表達與老年子宮內膜癌臨床特征間的關系進行分析，發現其缺失可能與臨床分期和淋巴結轉移有關，本研究結果究與此類似。本研究結果顯示，不同腫瘤家族史、淋巴結轉移情況、累及子宮下段情況、脈管內癌栓情況子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白缺失間存在統計學差異，且蛋白缺失與上述臨床特征存在一定的相關性。本研究結果顯示，隨訪1年后，82例子宮內膜癌患者復發率為19.51%，其中MMR蛋白缺失子宮內膜癌患者術后復發率為16.67%，未缺失患者術后復發率為20.69%，無明顯差異，表明子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白缺失對患者術后復發影響相對較小。

綜上所述，子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中MMR蛋白缺失與其部分臨床特征存在一定的相關性，但對術后復發的影響較小，可通過其與臨床特征間的關系為疾病早期篩查、診斷提供更多有效信息。