不同年齡段復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者染色體多態(tài)性檢出情況分析

孫 丹， 賀 曉， 周 娟， 馬 媛， 康衛(wèi)衛(wèi)， 陳書(shū)強(qiáng)， 黃劍磊

（空軍軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院，西安 710038）

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是指在妊娠28 周前連續(xù)發(fā)生2次或2 次以上的自然流產(chǎn)，發(fā)病率為1%～5%[1-4]。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的影響因素包括染色體異常、內(nèi)分泌因素、解剖因素以及遺傳因素等。最新研究[2-3，5-6]證實(shí)，染色體多態(tài)性可能與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)。染色體多態(tài)性也稱(chēng)異態(tài)性，是指不同個(gè)體之間染色體結(jié)構(gòu)和染色體的著色強(qiáng)度存在恒定但屬非病理性的細(xì)小差別。通常包括9 號(hào)染色體臂間倒位［inv（9）］；1、9、16 號(hào)染色體副縊痕增加（1/9/16qh+）；D/G 染色體隨體增加（D/Gps+），以及Y 染色體染色質(zhì)區(qū)異常（Yqh±）等。研究[7-9]發(fā)現(xiàn)，染色體多態(tài)性可能是復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的一類(lèi)重要的遺傳因素，其可能會(huì)干擾同源染色體配對(duì)及染色體分離，從而增加流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)。有關(guān)不同年齡段的染色體多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)關(guān)系的研究較少。本研究主要探討不同年齡段染色體多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

回顧性分析2015 年1 月至2018 年12 月于空軍軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心就診的1 290 對(duì)夫妻染色體多態(tài)性情況。選取945 對(duì)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的夫妻為研究對(duì)象（復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組），選擇同期因其他原因完善染色體檢查（個(gè)人要求查、單角子宮、縱隔子宮等）的無(wú)流產(chǎn)史的并至少生育一胎的345 對(duì)夫妻作為對(duì)照組。兩組患者內(nèi)分泌、男科精液均正常。患者年齡范圍為23～46 歲。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組男性平均年齡（37.32±4.28）歲，女性平均年齡（36.06±5.56）歲；對(duì)照組男性平均年齡（37.88±5.24）歲，女性平均年齡（35.90±4.14）歲，兩組患者的年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。排除標(biāo)準(zhǔn)：感染性因素、解剖因素及自身抗體異常者，有酗酒、吸煙等不良嗜好者。

1.2 研究方法

1.2.1 染色體檢測(cè) 夫妻同時(shí)進(jìn)行外周血染色體檢查，常規(guī)抽取患者靜脈血3 mL，EDTA 抗凝。在無(wú)菌操作臺(tái)上，將混勻的外周血接種于淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基中，放入37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)68～72 h，加入秋水仙素工作液0.1 mL，作用2.5 h。將血倒入離心管中，1 500 r·min-1，離心10 min，棄上清液。加入0.075 mol·L-1KCl 8 mL，放入37 ℃水浴箱中低滲30 min。加入2 mL 固定液（甲醇∶冰醋酸=3∶1）預(yù)固定5 min。離心，棄上清，加入8 mL 固定液，固定15 min。再次離心，棄上清，加入固定液8 mL，離心，棄上清。滴片后放入80 ℃烤箱，烤片1 h。將玻片放在預(yù)溫至37 ℃的1.25%胰酶溶液中消化12 min，甩干液體，在Giemsa 混合液中染色12 min，漂洗晾干后進(jìn)行掃片。染色體分析儀，參照人類(lèi)細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制（ISIN2013）標(biāo)準(zhǔn)命名核型，每例至少分析5 個(gè)核型，至少計(jì)數(shù)20 個(gè)中期分裂相，嵌合體加倍。

1.2.2 分析指標(biāo) 比較兩組患者染色體多態(tài)性的發(fā)生比例和兩組患者不同年齡、性別染色體多態(tài)性的發(fā)生比例。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法。P≤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 染色體多態(tài)性檢出情況

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組染色體多態(tài)性檢出率高于對(duì)照組（P＜0.05）。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)染色體多態(tài)性主要包括inv（9）、D/Gps+、1/9/16qh+及Yqh±，其中inv（9）、D/Gps+及1/9/16qh+的檢出率均高于對(duì)照組（P 均＜0.05），Yqh±的檢出率與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組與對(duì)照組染色體多態(tài)性檢出情況比較［例（%）］

2.2 不同年齡段染色體多態(tài)性分布情況

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組中＜35 歲及35～歲組者染色體多態(tài)性檢出率均高于對(duì)照組（P 均＜0.05），見(jiàn)表2。

2.3 不同性別染色體多態(tài)性分布情況

男性中，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組＜35 歲及35～歲組染色體多態(tài)性檢出率均高于對(duì)照組（P 均＜0.05），≥40 歲組染色體多態(tài)性檢出率與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；女性中，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組＜35 歲及35～歲組者染色體多態(tài)性檢出率均高于對(duì)照組（P 均＜0.05），≥40 歲組者染色體多態(tài)性檢出率與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組與對(duì)照組不同性別染色體多態(tài)性分布比較

3 討論

既往認(rèn)為染色體多態(tài)性是生物體內(nèi)的一種正常變異，研究[10-12]顯示，染色體多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組染色體多態(tài)性檢出率（5.19%）高于對(duì)照組（1.59%），染色體多態(tài)性主要包括inv（9）、D/Gps+、1/9/16qh+及Yqh±，其中復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組inv（9）、D/Gps+、1/9/16qh+染色體檢出率均高于對(duì)照組。染色體倒位指一條染色體內(nèi)出現(xiàn)兩處斷裂，中間片斷倒轉(zhuǎn)180°后重新連接造成，發(fā)生在長(zhǎng)臂和短臂之間且包含了著絲粒區(qū)的倒位稱(chēng)臂間倒位，從遺傳物質(zhì)得失角度看，臂間倒位并未使長(zhǎng)臂和短臂的長(zhǎng)度發(fā)生變化，臂間倒位可出現(xiàn)于每條染色體，以9號(hào)染色體最常見(jiàn)，在正常人群中的發(fā)生率為1%～3%[13-16]。理論上認(rèn)為，染色體倒位在減數(shù)分裂粗線(xiàn)期形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，使得配子（卵母細(xì)胞或精子）出現(xiàn)各種異常核型，然而在自然流產(chǎn)絨毛的核型沒(méi)有顯示以上的染色體異常。研究[13，17-18]顯示，inv（9）在不孕癥、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、智力缺陷等人群中發(fā)生率明顯增高。D/Gps+多態(tài)性會(huì)引起染色體重排，從而導(dǎo)致減數(shù)分裂異常，最終導(dǎo)致流產(chǎn)[19]。1/9/16qh+的染色體多態(tài)性也會(huì)引起染色體不分離，造成胎兒染色體異常，導(dǎo)致流產(chǎn)[20-21]。Y 染色體多態(tài)性常見(jiàn)的為長(zhǎng)臂異染色質(zhì)增加（Yqh+）及長(zhǎng)臂異染色質(zhì)減少（Yqh-），與同源染色體配對(duì)和染色體分離相關(guān)，會(huì)在細(xì)胞分裂階段阻止同源染色體配對(duì)，引起細(xì)胞分裂障礙、胚胎發(fā)育障礙、致畸、流產(chǎn)及死胎等[16，22]。本研究結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組Yqh±檢出率與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此結(jié)果可能與樣本量少有關(guān)，需要進(jìn)一步研究。

既往研究[23-24]顯示，年齡與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)，隨著年齡的增加，自然流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)增加，35 歲以下婦女自然流產(chǎn)的概率為14%，而40 歲以上者自然流產(chǎn)的概率則高達(dá)40%。本研究將對(duì)照組與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組按年齡進(jìn)行分層后結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組＜35 歲及35～歲組染色體多態(tài)性檢出率均高于對(duì)照組，而≥40 歲組染色體多態(tài)性檢出率與對(duì)照組染色體檢出率相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。認(rèn)為高齡患者自然流產(chǎn)發(fā)生率高的主要因素可能為卵母細(xì)胞質(zhì)量下降，導(dǎo)致胚胎染色體異常風(fēng)險(xiǎn)增高。既往研究[25]顯示，≥40 歲孕婦的胎兒總異常量比例、常染色體非整倍比例、性染色體異常率均高于35～歲組者。因此對(duì)于≥40 歲復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的患者，其染色體異常比例中常染色體非整倍比例、性染色體異常率占主要因素，而染色體多態(tài)性占次要地位。以上結(jié)果表明，染色體多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)，這種關(guān)系可能與年齡有關(guān)。

染色體多態(tài)性主要通過(guò)阻止染色體配對(duì)或染色體分離而增加流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，這種影響是否與性別相關(guān)并不清楚。本研究對(duì)性別進(jìn)行分析顯示，不論是男性還是女性，＜40 歲復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組染色體多態(tài)性檢出率均高于對(duì)照組，表明不同性別染色體多態(tài)性對(duì)流產(chǎn)均有影響。

綜上所述，不同性別染色體多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)均有相關(guān)性，不同年齡段染色體多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)關(guān)系有所差異。非高齡人群染色體多態(tài)性對(duì)于復(fù)發(fā)性流產(chǎn)有一定的意義，所以對(duì)于這部分人群是否需要進(jìn)一步行胚胎植入前遺傳學(xué)篩查，還需進(jìn)一步研究。對(duì)于高齡患者而言，卵母細(xì)胞質(zhì)量下降可能是復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的主要因素，可以通過(guò)其他方式改善卵母細(xì)胞質(zhì)量，降低流產(chǎn)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。