梗阻性黃疸對(duì)患者體內(nèi)右美托咪定藥動(dòng)學(xué)的影響

段 虎，李盛建，周艷卿，楊俊煒，趙 亮，李群英 （上海市寶山區(qū)羅店醫(yī)院，上海 201908）

右美托咪定是一種α-2 腎上腺素受體激動(dòng)劑，由于它對(duì)認(rèn)知功能、血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性和呼吸的影響較小，已被廣泛用作麻醉輔助劑用于抗焦慮、鎮(zhèn)靜、術(shù)后鎮(zhèn)痛等[1-2]。在臨床上，我們發(fā)現(xiàn)達(dá)到相同鎮(zhèn)靜效果，梗阻性黃疸患者使用右美托咪定的用量低于非黃疸者，故猜測(cè)梗阻性黃疸患者使用該藥有可能影響其藥動(dòng)學(xué)特征。目前,在嬰兒、兒童、成人以及在肥胖和低蛋白血癥人群中已有右美托咪定的藥動(dòng)學(xué)報(bào)道[3-6]，而對(duì)梗阻性黃疸患者相關(guān)研究甚少。因此，本研究通過(guò)測(cè)定患者體內(nèi)藥物濃度，探討梗阻性黃疸對(duì)右美托咪定藥動(dòng)學(xué)的影響。

目前已有多種分析方法用于測(cè)定血漿中的右美托咪定，包括高效液相色譜法、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[7-9]，但這些方法存在分析時(shí)間長(zhǎng)、靈敏度低、回收率低等缺點(diǎn)。本研究建立一種快速、靈敏、穩(wěn)定的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定人血漿右美托咪定的濃度，為右美托咪定藥動(dòng)學(xué)研究提供一種可靠的分析方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1290 InfinityⅡ液相色譜儀、Agilent 6470三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀（Agilent Technologies，美國(guó)）；真空濃縮旋轉(zhuǎn)儀、低溫高速離心機(jī)（Thermo，德國(guó)）；XW 80A 型渦旋混合器（醫(yī)大儀器，上海）；Mettler AE240 十萬(wàn)分之一電子天平（梅特勒-托利多，瑞士）；Millipore-Q 超純?nèi)ルx子水凈化儀（Millipore，美國(guó)）。

1.2 試藥

右美托咪定對(duì)照品（批號(hào)：100523-201301）、卡馬西平對(duì)照品（批號(hào)：100142-201706）（中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲醇（色譜純，美國(guó)Merck 公司）；甲酸（色譜純，SIGMA 公司）；乙酸乙酯（分析純，江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色 譜 柱 為Agilent Eclipse Plus C18RRHD column (2.1 mm×50 mm, 1.8 μm)，甲醇-0.1%甲酸水 (75∶25)為流動(dòng)相，流速0.2 ml/min，柱溫：35 ℃，進(jìn)樣量2 μl，運(yùn)行時(shí)間1.5 min。

2.2 質(zhì)譜條件

采用AJS ESI 正離子模式，多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式(MRM)進(jìn)行二級(jí)掃描；動(dòng)態(tài)反應(yīng)監(jiān)測(cè)的離子對(duì)參數(shù)：右美托咪定201→95；卡馬西平237→194。離子源參數(shù)設(shè)置：干燥氣溫度350 ℃；干燥氣流速10 L/min；霧化器壓力40 psi；鞘氣溫度400 ℃；鞘氣流速11 L/min；毛細(xì)管電壓4000 V；噴嘴電壓500 V。右美托咪定保留時(shí)間為0.9 min，內(nèi)標(biāo)保留時(shí)間為1.1 min，色譜圖如圖1 所示。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制和質(zhì)控樣品的制備

精密稱取右美托咪定對(duì)照品10.00 mg，置于10 ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為1.00 mg/ml 對(duì)照品儲(chǔ)備液。再采用逐級(jí)稀釋法配置質(zhì)量濃度為0.01、0.05、0.1、0.5、1.00、5.00、10.00 ng/ml 的系列對(duì)照品血漿溶液；隨行質(zhì)控樣品中右美托咪定的低、中、高質(zhì)量濃度分別為0.05、0.50、5.00 ng/ml。以上溶液量于4 ℃冰箱備用。

2.4 血漿樣品前處理方法

取200 μl 血漿樣品于離心管中，加入20 μl 內(nèi)標(biāo)溶液、20 μl NaOH (1 mol/L)溶液和1 ml 乙酸乙酯-氯甲烷(4∶1, V/V)提取溶劑，渦旋60 s，4 ℃條件下3000×g 離心10 min，取上清液800 μl 加入離心管中，真空濃縮干燥，加入100 μl 流動(dòng)相溶液，渦旋30 s 使殘?jiān)芙猓? ℃條件下3000×g 離心10 min，取上清液進(jìn)樣。

2.5 線性關(guān)系考察

按“2.3”和“2.4”項(xiàng)中的方法制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，平行操作5 份，按上述UPLC-MS/MS 條件，連續(xù)進(jìn)樣分析，以對(duì)照品濃度 (X)為橫坐標(biāo)，右美托咪定的峰面積與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值 (Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得線性方程：Y=1.307 2X-0.015 6, r=0.999 8(r=0.999 9)，線性范圍為0.01～10.00 ng/ml，以信噪比為5 時(shí)（S/N=5)測(cè)得右美托咪定的最低定量限為10 pg/ml，以信噪比為3 時(shí)（S/N=3)測(cè)得右美托咪定的最低檢測(cè)限為5 pg/ml。

2.6 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)

按“2.3”和“2.4”項(xiàng)中的方法制備低、中、高3 種濃度的質(zhì)控樣品，平行操作5 份，連續(xù)3 d，計(jì)算實(shí)測(cè)濃度。如表1 所示，精密度用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)表示，結(jié)果日內(nèi)精密度RSD%≤5.9%、日間精密度RSD%≤5.8%；準(zhǔn)確度以相對(duì)回收率表示，實(shí)測(cè)濃度與理論加入濃度的比值即為相對(duì)回收率。結(jié)果表明日內(nèi)、日間結(jié)果準(zhǔn)確度范圍在91.2%～105.6%。

2.7 基質(zhì)效應(yīng)和提取回收率

圖1 血漿中右美托咪定和內(nèi)標(biāo)卡馬西平的色譜圖

按“2.3”和“2.4”項(xiàng)中的方法制備低、中、高3 種濃度含藥血漿，平行操作5 份，其待測(cè)物的峰面積作為Set 3；取空白人血漿按“2.4”項(xiàng)下處理，甲醇代替內(nèi)標(biāo)溶液，真空濃縮干燥后加入相應(yīng)濃度對(duì)照品溶液使殘?jiān)芙猓怪疂舛扰cSet 3 的待測(cè)理論濃度一致，分別制備5 份，其峰面積作為Set 2；將待測(cè)化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇稀釋，使之與Set 3 待測(cè)理論濃度一致，進(jìn)樣5 次，其峰面積作為Set 1。基質(zhì)效應(yīng)為Set 2/Set 1，提取回收率計(jì)算公式為Set 3/Set 2，考察內(nèi)標(biāo)的基質(zhì)效應(yīng)和提取回收率操作步驟同上。低、中、高3 種濃度待測(cè)物及內(nèi)標(biāo)提取回收率均在85.5%～93.1%之間，基質(zhì)效應(yīng)均在91.2%～95.6%之間，具體結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 待測(cè)物基質(zhì)效應(yīng)和提取回收率(n=5)

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.3”和“2.4”項(xiàng)中的方法制備低、中、高3 種濃度含藥血漿，分別考察樣品室溫放置6 h 后處理，樣品前處理后室溫放置24 h，3 次凍融循環(huán)以及-80 ℃保存30 d 的穩(wěn)定性，按“1.9”項(xiàng)操作測(cè)定樣品濃度，計(jì)平均值，并計(jì)算RSD%及相對(duì)偏差RE%，測(cè)定結(jié)果的RE 范圍為95.4%～103.5%，RSD均小于15%，表明樣本穩(wěn)定性良好。

2.9 右美托咪定藥動(dòng)學(xué)研究

選取擬進(jìn)行膽管手術(shù)的患者19 名。根據(jù)術(shù)前血清總膽紅素水平，分為黃疸組（n=11，平均年齡60.5 歲，體重60.1 kg，身高159.8 cm）和對(duì)照組（n=8, 平均年齡60.5 歲，體重60.1 kg，身高159.8 cm）。術(shù)前靜脈輸注右美托咪定（劑量為1.0 μg/kg），給藥后使用含EDTA 的采血管收集患者靜脈血，采血時(shí)間點(diǎn)為0、0.5、1、2、3、5、10、12、15、20、30、40、60、90、120、180、240、300 min。血樣經(jīng)低溫離心后，取其上清液于-80 ℃冰箱保存。待收集所有患者血漿后，使用本研究建立的UPLC-MS/MS 法測(cè)定樣品中右美托咪定的濃度。通過(guò)WinNonlin 7.0軟件，非房室模型計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，繪制平均血藥濃度-時(shí)間曲線，如圖2 所示。使用SPSS 13.0 軟件，t-test 分析比較兩組數(shù)據(jù)的差異,結(jié)果見(jiàn)表3，與非黃疸組相比，梗阻性黃疸患者體內(nèi)右美托咪定藥動(dòng)學(xué)參數(shù)cmax增加63.4%(P＜0.01)，AUC(0-t)、AUC(0-∞)和Vz分別增加78.9%、66.4%、82.5%(P＜0.005)，CLz降低42.1%(P＜0.05)。結(jié)果顯示，梗阻性黃疸患者體內(nèi)右美托咪定消除減慢。

圖2 右美托咪定在患者體內(nèi)的平均血藥濃度-時(shí)間曲線

3 討論

本文所建立的UPLC-MS/MS 法快速、靈敏、穩(wěn)定，能應(yīng)用于右美托咪定血漿樣品的高通量分析。右美托咪定主要在肝臟發(fā)生生物轉(zhuǎn)化[10]，梗阻性黃疸可引起一定程度的肝功能異常（如藥物代謝酶系統(tǒng)改變、膽管排泄功能受損、低蛋白血癥）。根據(jù)總膽紅素水平，將入組患者分為黃疸組（總膽紅素水平＞17.1 μmol/L）和非黃疸組（總膽紅素水平＜17.1 μmol/L）。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃疸組患者右美托咪定的cmax、AUC(0-t)、AUC (0-∞)和Vz顯著升高，CLz顯著降低。結(jié)果提示，黃疸組與非黃疸組患者對(duì)右美托咪定藥物處置存在差異，梗阻性黃疸可能會(huì)降低右美托咪定在患者體內(nèi)的消除速度。該試驗(yàn)為右旋美托咪定在梗阻性黃疸患者中的臨床使用劑量提供了一定的參考依據(jù)。

表3 患者靜脈推注右美托咪定后的平均藥動(dòng)學(xué)參數(shù)