自制復方特比萘酚軟膏滲透促進劑的研究

劉琳琳，嚴 佳，周 欣 （中國人民解放軍聯勤保障部隊第九〇〇醫院藥劑科，福建 福州 350025）

真菌性皮膚病，是指由病原菌真菌所引起的一大類感染性皮膚疾病[1]，其中，淺部真菌感染性皮膚病中，足癬最為常見且發病率最高，而趾間糜爛型和水皰型為最主要的發病類型[2]，患者抓癢造成皮損繼發細菌感染，此時感染已不僅僅累及皮膚角質層，而是進入真皮層，甚至透過皮下組織，危害深層組織，甚至導致出現發熱等全身癥狀。駐閩部隊官兵長期穿著不透氣的作戰靴、膠鞋，皮膚真菌感染率普遍較高，且部隊官兵訓練任務重、居住環境艱苦，往往因診療不及時等原因，容易出現繼發感染[3-4]。復方特比萘芬是在課題組前期研制的復方酮康唑軟膏基礎上，選擇抗真菌藥鹽酸特比萘芬和糖皮質激素藥糠酸莫米松，聯合適宜的抗菌藥物莫匹羅星，作為處方的主藥[5]。解決了酮康唑不穩定、易變色的問題，既可利用協同作用增強治療效果，又方便應用，提高了患者使用的依從性，改善了市售產品的有效性和安全性，具有較高的軍事利用價值。本實驗主要研究在制劑過程考慮加入滲透促進劑，增加藥物透皮吸收速率和濃度，達到根治此類疾病、杜絕反復發作的目的。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DV215CD 型電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司）；安捷倫1200 型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；KQ-600DE 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），YSEI 型綜合藥品穩定性實驗箱（重慶市永生實驗儀器廠），DF-101B 集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（鄭州長城科工貿易有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸特比萘芬對照品（批號：100563-201402，含量99.8%）、莫匹羅星對照品（批號：130568-200501，含量94.2%）、糠酸莫米松對照品（批號：100930-201201，含量99.9%）均購自中國食品藥品檢定研究院，鹽酸特比萘芬原料藥（批號：20150405)、莫匹羅星原料藥（批號：20150301）均購自武漢鑫佳靈生物科技有限公司，糠酸莫米松原料藥（批號：20150228，浙江仙琚制藥股份有限公司），聚乙二醇400、聚乙二醇3350（中國醫藥對外貿易公司），甲醇為色譜純，水為超純水；氮酮（廣州化學試劑廠），1,2-丙二醇（國藥集團化學試劑有限公司），其余所用試劑均為分析純。

1.3 動物

SPF 級SD 大鼠，雄性，體重（170～230）g，實驗動物合格證號：SCXK 滬（2017-0001），購自上海斯萊克實驗動物有限公司，于聯勤保障部隊第九〇〇醫院比較醫學科實驗動物房適應7 d 后開始實驗。

2 方法與結果

2.1 方法學考察

色譜柱為ZORBAX SB-C8柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液（70∶30），檢測波長248 nm，流速1.0 ml/min，柱溫30 ℃，進樣量10 μl。

經專屬性考察發現，鹽酸特比萘芬、莫匹羅星、糠酸莫米松分離度良好，所用輔料均不會對藥物的測定產生干擾。以藥物峰面積A 為縱坐標，藥物濃度C 為橫坐標作線性回歸曲線。實驗結果表明，鹽酸特比萘芬線性回歸方程為：A=1.763×10C+36.63，r=0.999 7，在20～200 μg/ml 濃度范圍內線性關系良好；莫匹羅星線性回歸方程為：A=2.307C+6.777，r=0.999 8，在40～400 μg/ml 濃度范圍內線性關系良好；糠酸莫米松線性回歸方程為：A=2.854×10C+1.763，r=0.999 8，在2～20 μg/ml濃度范圍內線性關系良好。對日內、日間精密度及方法的重復性進行考察，其RSD 值均小于1%；低、中、高3 個水平濃度的平均回收率在98%～101%范圍內，且RSD 值小于1%；供試品溶液在24 h 內穩定，且RSD 值小于1%。以上數據表明，實驗精密度、重復性、回收率、穩定性均符合要求。

制備復方特比萘酚軟膏3 批，每批3 份，測定藥物含量。實驗結果表明，供試品中的3 種主藥莫匹羅星、糠酸莫米松和鹽酸特比萘芬的含量均為標示量的90.0%～110.0%，符合規定。

2.2 體外經皮滲透性考察

2.2.1 裝置

試驗裝置為立式Franz 擴散池[6-9]，藥物透皮擴散試驗儀，透皮有效擴散面積是3.14 cm2，接受室體積為7.8 ml。

2.2.2 滲透膜的處理

斷頸處死SD 大鼠后，用電剪刀剪除腹部的鼠毛，硫化鈉溶液去除絨毛，取腹部處皮膚，將皮下脂肪與筋膜剝離，用0.9%的氯化鈉注射液清洗干凈后，放于冰箱4 ℃保存，備用。

2.2.3 接受液的選擇

通常體外經皮滲透試驗的接受液選擇0.9%氯化鈉注射液，但是由于復方特比萘芬軟膏中3 種主藥在水中的溶解度不佳，為了保持其漏槽條件，考察3 種主藥在不同比例的聚乙二醇400-生理鹽水混合液中的溶解情況。實驗結果表明，3 種主藥在60%聚乙二醇400-40%生理鹽水中都可以保持漏槽條件并達到最大溶解度，因此，實驗的接受液選擇60%聚乙二醇400-40%生理鹽水。

2.2.4 透皮擴散試驗方法

將“2.2.2”項下經過處理的大鼠皮在水平擴散池的兩個半池之間固定，加接收液7.8 ml 于接受池中，擴散池在(32±1)℃的水浴中預平衡1 h 后，分別加入0.5 g 不同濃度和種類促進滲透劑的復方特比萘芬軟膏于供體池中，于0.5、1、2、4、6、8、24 h分別取樣2 ml，過0.22 μm 微孔濾膜后注入HPLC儀分析測定。同時，在受體池中補加等量空白接收液。以累積滲透量為指標篩選最適宜的透皮促進劑及其用量。

2.2.5 數據處理公式

累積滲透量的計算公式：

式中，Cn是在第n 個取樣點時所測得的藥物濃度；V0是接受室的體積；Ci是在第i 個取樣點時所測得的藥物濃度；V 是取樣體積；A 是滲透面積（cm2）。

2.3 體外經皮滲透性比較試驗

2.3.1 未加滲透促進劑的復方特比萘芬軟膏的體外經皮滲透性

取未加滲透促進劑的復方特比萘芬軟膏進行體外經皮滲透性試驗，計算累積滲透量。實驗結果表明，不加滲透促進劑時，復方特比萘芬軟膏中鹽酸特比萘芬24 h 的累積滲透量為8.64 μg/cm2，莫匹羅星24 h 的累積滲透量為9.12 μg/cm2，而糠酸莫米松無滲透。

2.3.2 氮酮對復方特比萘芬軟膏經皮滲透的影響

在復方特比萘芬軟膏中分別加入1%、3%、5%氮酮，進行體外經皮滲透性試驗。以累積滲透量為縱坐標，滲透時間為橫坐標，繪制累積滲透曲線。實驗結果表明，以氮酮為滲透促進劑時，不同濃度氮酮對鹽酸特比萘芬作用大小為3%＞1%＞5%，不同濃度氮酮對莫匹羅星作用大小為3%＞1%＞5%，不同濃度氮酮對糠酸莫米松無滲透作用。結果見表1、表2 和圖1、圖2。

表1 鹽酸特比萘芬在不同濃度氮酮作用下的累積滲透量(μg/cm2)

表2 莫匹羅星在不同濃度氮酮作用下的累積滲透量(μg/cm2)

圖1 鹽酸特比萘芬在不同濃度氮酮作用下的累積滲透曲線

圖2 莫匹羅星在不同濃度氮酮作用下的累積滲透曲線

2.3.3 丙二醇對復方特比萘芬軟膏經皮滲透的影響

在復方特比萘芬軟膏中分別加入5%、10%、15%丙二醇，進行體外經皮滲透性試驗。以滲透時間為橫坐標，累積滲透量為縱坐標，繪制累積滲透曲線。實驗結果表明，10%丙二醇對復方特比萘芬軟膏的促滲作用明顯大于15%丙二醇，且10%丙二醇滲透量又大于3%氮酮，故本實驗選擇10%丙二醇作為滲透促進劑。結果見表3～5 和圖3～5。

表3 鹽酸特比萘芬在不同濃度丙二醇作用下的累積滲透量(μg/cm2)

表4 莫匹羅星在不同濃度丙二醇作用下的累積滲透量(μg/cm2)

表5 糠酸莫米松在不同濃度丙二醇作用下的累積滲透量(μg/cm2)

圖3 鹽酸特比萘芬在不同濃度丙二醇作用下的累積滲透曲線

圖4 莫匹羅星在不同濃度丙二醇作用下的累積滲透曲線

圖5 糠酸莫米松在不同濃度丙二醇作用下的累積滲透曲線

3 討論

3.1 滲透促進劑的種類

滲透促進劑能夠提高或加速藥物透過皮膚且對皮膚沒有損傷和刺激。滲透促進劑有很多種，包括二甲亞砜及其類似物、醇類化合物、氮酮類化合物、表面活性劑等，其中，氮酮與丙二醇最為常用。丙二醇為無色黏稠液體，近乎無味，毒性和刺激性都非常小。氮酮為無色澄明的液體，無刺激性且副作用小，潤滑效果好，理化性質穩定，作為新型滲透促進劑近幾年來應用廣泛[10-11]。

3.2 滲透促進劑的作用

促滲劑的選擇實驗結果顯示，以氮酮和丙二醇為滲透劑的累積滲透量均明顯高于無滲透促進劑者。作為研究治療淺部真菌皮膚病合并細菌感染的外用制劑，治療時要求藥物不僅作用于角質層，還需穿透皮膚，提高藥物在皮膚中的溶解度，因此有必要在處方中加入滲透促進劑，達到治標又治本的目的。

3.3 不同濃度丙二醇的促滲作用對比

以丙二醇為滲透促進劑的實驗結果表明，雖然15%丙二醇對莫匹羅星和糠酸莫米松的促滲作用最大，但與10%丙二醇相比，累積滲透量相差不大，而在對鹽酸特比萘芬的促滲作用中，10%丙二醇明顯優于15%丙二醇。

3.4 氮酮和丙二醇的促滲作用對比

以氮酮為滲透促進劑的實驗表明，3%氮酮對復方特比萘芬軟膏促滲作用最好，但對糠酸莫米松無滲透作用，氮酮未能增加糠酸莫米松透皮量和透皮速度，是否糠酸莫米松仍滯留在皮膚層中或皮膚表面，在今后實驗中擬通過皮膚滯留量實驗，進一步分析可能原因。對比氮酮和丙二醇的促滲效果，10%丙二醇優于3%氮酮，因此，研究以累積滲透量為指標選擇10%丙二醇作為滲透促進劑加入處方。

綜上所述，本實驗采用60%聚乙二醇400-40%生理鹽水為接受液，10%丙二醇作為滲透促進劑加入處方中，大大提高了藥物在皮膚中的溶解度。本研究結果為臨床治療淺部真菌皮膚病并申報一種安全有效的院內制劑特比萘酚軟膏提供了實驗數據，在為部隊官兵提供更優質便捷的臨床服務方面具有重要的軍事意義。