不同配比赤芍-桃仁乙醇提取物對急性血瘀模型大鼠血液流變學的影響*

勾楠，王星晨，高建義，李勇枝，井娟，劉雪英，王慶偉

(1.陜西中醫藥大學藥學院，咸陽 712046；2.空軍軍醫大學第二附屬醫院藥劑科，西安 710038；3.中國航天員科研訓練中心，北京 100094；4.空軍軍醫大學藥學系藥物化學教研室，西安 710000)

血瘀證是中醫臨床常見的一種癥候，是體內氣血運行不通暢所導致的淤積凝滯，臨床常表現為疼痛、瘀腫及婦女閉經[1]。赤芍是毛茛科植物芍藥(PaeonialactifloraPall.)的干燥根，具有清熱涼血、散瘀止痛的功能[2]。桃仁為薔薇科植物桃[Prunuspersica(L.)Batsch]的干燥成熟種子，具有活血祛瘀、潤腸通便的功效[3]。研究發現，血瘀證患者的血液流變學和凝血酶原出現異常，而藥物可以改善血液流變學的相關指標[4]。現代藥理研究已經證明，赤芍具有抑制血小板聚集的作用[5]，桃仁可以改善血流動力學[6]，赤芍-桃仁配伍是臨床常用的活血化瘀藥對，具有活血調經、活血止痛的功效，目前已有臨床制劑赤芍桃仁顆粒[7]。雖然很多方劑里面存在這兩味藥材，但是對它們配伍后活血化瘀的功效筆者未見相關研究。筆者在本實驗選取中醫活血化瘀方中3種常用比例(1：1，1：2，2：1)[8-10]以及赤芍、桃仁單味藥進行研究，考察急性血瘀模型大鼠血液流變學指標，為研究方劑的配伍規律提供實驗依據，進一步驗證不同比例配伍赤芍-桃仁乙醇提取物對急性血瘀模型大鼠血液流變學的影響。

1 材料與方法

1.1實驗動物 清潔級健康雄性SD大鼠64只，雄性，體質量(200±20) g，空軍軍醫大學實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證號：SCXK(軍)2015-006，飼養于空軍軍醫大學藥化教研室，大鼠自由飲水，室溫25 ℃，相對濕度75%。

1.2實驗藥材 赤芍、桃仁藥材(產地陜西)，均購于西安天晟中藥飲片公司，經陜西中醫藥大學白吉慶副教授鑒定，赤芍為毛茛科植物芍藥(PaeonialactifloraPall.)的干燥根，桃仁為薔薇科植物山桃[Prunusdavidiana(Carr.)Franch.]的干燥成熟種子。

1.3儀器 SA-9000自動血流變檢測儀(北京賽科希德科技有限公司)；高速冷凍離心機(型號：KDC-160HR)；電子分析天平(德國Sartorius公司，感量：0.1 mg)。

1.4試劑 鹽酸腎上腺素注射液(遠大醫藥有限公司，批號：H42021700)；氯化鈉注射液(天津大茂有限公司，批號：00141012)；二水合檸檬酸三鈉(江蘇康捷醫療器械有限公司，批號：20150049)；戊巴比妥鈉(北京BioTeke公司，批號：PR6502)；復方丹參滴丸(天士力醫藥集團股份有限公司，批號：1807154，規格：每丸27 mg)。

1.5藥材提取 分別按照一定質量比例(1：0，0：1，1：1，1：2，2：1)稱取赤芍和桃仁藥材共5份，每份200 g，用7倍量75%乙醇加熱回流提取3次，每次1.5 h，自然冷卻，分離提取液，合并3次醇提取液，45 ℃減壓回收乙醇，濃縮至每克提取物相當于原藥材1.862，1.074，1.023，1.044，1.210 g，置4 ℃冰箱冷藏備用。

1.6血瘀模型制備 SD雄性大鼠頸部皮下注射鹽酸腎上腺素0.8 mg·kg-1，共2次，間隔時間為4 h。第1次頸部皮下注射鹽酸腎上腺素0.8 mg·kg-1后2 h，將大鼠放置冰水浴中游泳5 min，制備急性血瘀模型大鼠。第2次頸部皮下注射鹽酸腎上腺素后，禁食，自由飲水，12 h后腹主動脈取血測血流變各指標[11]。

1.7分組及給藥 SD雄性大鼠64只，采用隨機數字表法將大鼠分為8組，每組8只，分別為空白對照組、丹參滴丸組、模型對照組、赤芍-桃仁1：0，0：1，1：1，1：2，2：1組。根據《中華人民共和國藥典》2015年版中藥材用量[12]，赤芍6 ～12 g和桃仁4.5 ～9 g，選取臨床3倍量15 g進行給藥。所有給藥組均統一配制成溶液，每次5 mL·kg-1，空白對照組和模型對照組每日給予等劑量0.9%氯化鈉溶液，丹參滴丸組給予大鼠丹參滴丸0.073 g·kg-1[13]，灌胃給藥，每日1次，連續14 d，第13天給藥后除空白對照組外，各組大鼠按照相應的造模方法復制急性血瘀模型。大鼠給藥劑量按體表面積換算系數計算[14]。

1.8血液流變學指標檢測 各組大鼠于第14天給藥后30 min，腹腔注射戊巴比妥鈉( 40 mg·kg-1)麻醉，腹主動脈取血5 mL，置于肝素鈉采血管中；另取3 mL血液于檸檬酸三鈉采血管中，采用全自動血液流變分析儀、全自動血凝儀分別檢測血液流變學[全血黏度(WBV)(1，5，50，100，200 s-1切變率)、血漿黏度(PV)、紅細胞壓積(HCT)、紅細胞沉降率(ESR)]及凝血功能指標[凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原(FIB)]。

2 結果

2.1體征觀察 空白對照組大鼠毛發濃密順滑，行動敏捷，眼睛瞳孔正常，呈鮮紅色，嘴唇及鼻子紅潤。模型對照組大鼠造模成功后，行動較遲緩，毛發膨脹稀疏，目光呆滯，鼻唇發紺，輕微震顫，心跳加快，與文獻報道一致[15]。赤芍-桃仁各藥對組與模型對照組比較，行動比較敏捷，心跳較為緩慢。

2.2赤芍-桃仁不同配伍比例對模型大鼠血液流變學影響 與空白對照組比較，模型對照組大鼠WBV、PV均明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)，證明造模成功。與模型對照組比較，丹參滴丸組WBV(1，5，50，100，200 s-1)均有顯著降低。與模型對照組比較，赤芍-桃仁(1：1)組WBV升高(1，5，50，100，200 s-1)，PV均顯著降低，而其余組對PV無影響。與模型對照組比較，赤芍-桃仁(1：0)、赤芍-桃仁(0：1)、赤芍-桃仁(1：1)、赤芍-桃仁(1：2)、赤芍-桃仁(2：1)對于升高的WBV(1 s-1)均有明顯降低作用。桃仁、赤芍-桃仁(2：1)組對于50 s-1切變率下的WBV有顯著降低作用。赤芍-桃仁(1：1)、赤芍-桃仁(1：2)組對于升高的WBV(100 ，200 s-1)有明顯降低作用。結果見表1。

與空白對照組比較，模型對照組HCT、ESR顯著升高，表明造模成功。與模型對照組比較，丹參滴丸組只可顯著降低HCT，赤芍-桃仁(1：1)組對兩個指標均有明顯降低作用；赤芍-桃仁(1：0)、赤芍-桃仁(0：1)對兩個指標沒有明顯影響。赤芍-桃仁(1：1)較赤芍-桃仁(1：2)、赤芍-桃仁(2：1)組能顯著降低ESR。見表2。

2.3不同配比赤芍-桃仁對急性血瘀大鼠凝血指標的影響 與空白對照組比較，模型對照組大鼠PT、TT均明顯降低，FIB值顯著升高，表明造模成功。與模型對照組比較，丹參滴丸組PT、TT、FIB均發生顯著變化。赤芍-桃仁(1：0)、赤芍-桃仁(0：1)、赤芍-桃仁(1：1)、赤芍-桃仁(1：2)、赤芍-桃仁(2：1)組僅能顯著提高TT值，赤芍-桃仁(1：1)能顯著延長急性血瘀大鼠的PT值，其余組對PT無明顯延長作用。赤芍-桃仁(1：1)、赤芍-桃仁(1：2)能降低模型FIB值，其余組無顯著降低作用。結果見表3。

3 討論

赤芍具有散瘀鎮痛的功效，桃仁有較強的活血作用，有“破淤行血之峻藥”的稱謂[16]。赤芍-桃仁是中藥復方中常見配伍[7，17-19]，通過計算機輔助統計王清任《醫林改錯》，發現在原著活血化瘀33首方劑中，赤芍-桃仁配伍為9首[20]；對活血化瘀方進行組方規律分析，發現赤芍-桃仁僅次于桃仁-紅花，是應用較多的藥對[21]。臨床常用方劑如血府逐瘀湯、補陽還五湯、桂枝茯苓丸，通竅活絡湯中均含有赤芍-桃仁配伍藥對。桃芍醒腦膠囊方藥研究結果顯示具有活血通絡的療效[22]。通過分析臨床處方，發現赤芍-桃仁配伍也可以治療干燥綜合征[23]。筆者以現代醫學血液流變學指標，對赤芍-桃仁配伍的活血化瘀作用進行研究，考察兩者之間是否存在協同增效作用。

血液流變學是對血液物理指標的相關檢測，研究血液中相關成分的流動性特性[24]。血液流變特性的變化與心、腦血管疾病有直接相關性[25]。中醫認為“久病血瘀”“ 久病入絡為血瘀”。血瘀證發生時常表現為血脈不暢，血瘀氣滯。血液流變學的改變與中醫血瘀證理論“脈不通則血不流”的理念相似，血瘀后血流變學會發生異常，常表現為血液“黏”“聚”等特點[26]。

WBV的高切變率對紅細胞影響最大，高切變率越高，聚集速度越快，使血流速度減緩，導致血液黏度升高[27]。PV的增高會直接造成血液的凝固性增加，兩者同時增高會導致血栓的形成[28]。本研究表明，赤芍-桃仁不同比例配伍能夠有效降低急性血瘀大鼠WBV及PV，從而降低紅細胞聚集。與赤芍-桃仁(1：0)、赤芍-桃仁(0：1)組比較，赤芍-桃仁(1：1)組對WBV和PV的降低效果更顯著。HCT是紅細胞占血液的容積比，HCT增加時WBV和PV都可能增加。實驗結果顯示，赤芍-桃仁(1：1)對HCT的降低效果尤為顯著，但是其余組差異無統計學意義，說明對容積比占有值幾乎無影響。赤芍-桃仁(1：2)組，對高、中切變率下的WBV降低效果好，但對HCT影響不大。ESR代表紅細胞的沉淀快慢，本實驗中，赤芍-桃仁(1：0)、(0：1)組對大鼠的ESR影響不大，其余不同比例配伍組對ESR有降低作用，說明配伍組能夠改變紅細胞的沉淀率。PT、TT、FIB是評價凝血功能的指標[29]。PT反映外源性凝血系統狀況，PT縮短見于血液高凝狀態和血栓性疾病；TT是反映纖維蛋白原轉化為纖維蛋白的時間，是內外凝血系統共同調節的途徑。本實驗模型對照組與空白對照組比較，血漿PT、TT明顯縮短，FIB明顯升高，說明模型對照組大鼠凝血出現障礙。赤芍-桃仁(1：0)、赤芍-桃仁(0：1)組對PT都沒有顯著影響，其余配伍組對TT升高作用顯著，對FIB降低較為明顯，說明可以通過內、外源凝血途徑共同調節凝血系統。

表1 不同配比赤芍-桃仁對急性血瘀大鼠全血黏度的影響

Tab.1 Effects of different ratios of Radix Paeoniae Rubra and Peach Kernel on whole blood viscosity in rats with acute blood stasis

表1 不同配比赤芍-桃仁對急性血瘀大鼠全血黏度的影響

組別劑量/(g·kg-1)WBV1 s-15 s-150 s-1100 s-1200 s-1PV空白對照組—38.07±2.1014.67±0.106.49±0.305.63±0.205.07±0.111.19±0.01模型對照組—50.43±4.21①17.80±2.43②8.27±0.82①7.13±0.69①6.32±0.57①1.32±0.1②丹參滴丸組0.07342.10±2.03③15.58±1.05④6.92±0.53④5.62±0.13④5.34±0.36④1.25±0.02赤芍-桃仁 10組0.8442.28±1.15③15.75±0.516.96±0.616.21±0.115.55±0.40③1.25±0.08 01組1.4543.83±1.01④16.12±0.136.86±0.27④5.58±0.20③5.48±0.171.24±0.04 11組1.5238.11±1.12③14.69±0.89①6.44±0.55③5.26±0.23③4.95±0.31③1.22±0.02④ 12組1.4941.39±0.63②15.77±1.017.07±0.216.11±0.18④5.53±0.25④1.27±0.02 21組1.2945.41±2.11④16.79±1.217.42±0.13④6.49±0.24①5.86±0.281.29±0.03

①與空白對照組比較，P<0.01；②與空白對照組比較，P<0.05；③與模型對照組比較，P<0.01；④與模型對照組比較，P<0.05。

①Compared with blank control group，P<0.01；②Compared with blank control group，P<0.05；③ Compared with model control group，P<0.01；④Compared with model control group，P<0.05.

表2 不同配比赤芍-桃仁對急性血瘀大鼠血流變指標影響

表3 不同配比赤芍-桃仁對急性血瘀大鼠凝血指標的影響

本研究發現，赤芍-桃仁不同比例配伍能夠降低急性血瘀模型大鼠的WBV、PV、HCT、ESR和FIB，能夠延長TT。說明赤芍-桃仁配伍可以有效改善血流變學的異常，與單味赤芍、桃仁組比較，赤芍-桃仁1：1配伍顯著性改變血液流變學參數，兩者可能產生協同增效作用，血瘀證患者血液均有“濃、黏、凝、聚”的改變，因此臨床將凝血指標、血液流變學指標作為血瘀證實驗室診斷標準[30]。本實驗發現，赤芍-桃仁配伍比例為1∶1時對急性血瘀大鼠活血效果較好，通過赤芍-桃仁的協同作用改善了“濃、黏、凝、聚”的血瘀狀態。

研究結果從藥效學的角度初步揭示二者相須配伍的意義，后續有必要從藥動學和效應物質基礎的角度，進行更深入和廣泛的探討和研究。