基于分子對接技術的藤茶總黃酮對高尿酸血癥腎功能損傷保護機制研究

李佳川，李思穎

西南民族大學藥學院，四川 成都 610041

腎功能損傷是高尿酸血癥（hyperuricemia，HUA）臨床最常見并發癥之一，體內血尿酸產生過多或腎臟排泄尿酸減少，尿酸鹽達過飽和狀態而沉積于腎間質和輸尿管，從而引起腎臟病變[1]。HUA腎功能損傷主要病理學改變為慢性腎間質、腎小管病變，并伴有局部炎癥反應發生[2]。近年來，HUA并發的腎功能損傷發病率呈升高趨勢，男性患者多于女性，其發病隱匿，早期無明顯臨床癥狀。臨床上常用的化學藥物多為別嘌醇、非布司他和苯溴馬隆等[3]，通過抑制尿酸生成和促進尿酸排泄來改善尿酸代謝，但對并發的腎功能損傷尚無確切療效。糖尿病、HUA 等代謝性疾病是中醫藥防治的優勢病種，中醫藥及少數民族醫藥對其相關并發癥具有較好的臨床治療優勢。

藤茶，又稱莓茶、龍須茶、客家白茶，由顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand.-Mazz.) W.T.Wang 的嫩枝葉加工而成，具有清熱解毒、活血通絡的功效[4]，主要分布于四川、貴州、湖南、湖北、廣西等少數民族地區[5-6]，具有藥食同源之性。藤茶含有黃酮類[7]、多糖類[8]、酚類[9]、氨基酸[10]等多種活性成分，其黃酮類成分含量最為豐富，主要有二氫楊梅素、藤茶素、槲皮素、楊梅素等，其中二氫楊梅素的質量分數高達35%，被認為是藤茶發揮保健功效的重要藥效物質基礎[11-12]。現代藥理學研究表明，藤茶及其總黃酮部位具有抗氧化[13]、降血壓[14]、調血脂[15]、抗動脈粥樣硬化[16]、心血管保護[17]、抗肝癌[18]等藥理作用。課題組前期通過對藤茶民族習用地區大量走訪和臨床實踐反饋后發現，藤茶作為藥食兩用植物，在多個少數民族地區均有治療痛風和慢性腎炎的民間習用和文獻記載情況[19]，但其治療HUA 腎功能損傷的作用機制相關研究較少。因此，本研究采用分子對接技術，綜合藤茶總黃酮中代表性活性成分，深入探討藥物組分與尿酸生成和排泄相關蛋白靶點的相互作用，并建立腺嘌呤聯合乙胺丁醇致HUA 腎功能損傷大鼠模型進行驗證，系統探討藤茶總黃酮提取物對HUA腎功損傷的保護作用，以期為少數民族地區藥食資源藤茶的進一步保健開發提供科學依據。

1 材料

1.1 動物

SPF 級雄性Wister 大鼠50 只，7 周齡，體質量200～220 g，購于四川省成都達碩實驗動物研究中心，許可證號SCXK（川）2015-030。動物飼養于西南民族大學藥學院SPF 級動物實驗室，溫度（24±2）℃，相對濕度（55±5）%，每12 小時晝夜間斷性照明，適應性飼養1 周。動物實驗經西南大學藥學院實驗動物倫理委員會批準（批準號2019-05）。

1.2 藥材

藤茶藥材市售，產地湖南省張家界市，經西南民族大學顧健教授鑒定為葡萄科植物顯齒蛇葡萄A.grossedentata(Hand.-Mazz.) W.T.Wang的干燥嫩枝葉。藤茶粉碎后過40 目篩，稱取適量干燥藤茶，按1∶10 加入蒸餾水，于100 ℃回流提取2 次，每次2 h，濾過，合并濾液，減壓蒸發濃縮得浸膏。將浸膏用D-101 大孔樹脂吸附，水洗近無色后，用95%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，得純化物，干燥即得藤茶總黃酮（total flavonoids fromA.grossedentata，AGTF）。以二氫楊梅素為對照品，采用AlCl3比色法測定AGTF 質量分數為84.16%。

1.3 藥品與試劑

別嘌醇片（批號20181206，國藥準字H34021248，規格0.1 g/片）購自合肥九聯制藥有限公司；二氫楊梅素對照品（批號MUST-14013108，質量分數≥98%）購自成都曼思特生物科技有限公司；腺嘌呤（批號D1915072，質量分數≥99.5%）購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；鹽酸乙胺丁醇片（批號T19B030，規格0.25 g/片）購自杭州民生藥業有限公司；尿酸試劑盒（批號20190407）、黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）試劑盒（批號20190330）、腺苷脫氨酶（adenosine deaminase，ADA）試劑盒（批號20190403）、肌酐試劑盒（批號20191021）、尿素氮試劑盒（批號20191022）均購自南京建成生物工程研究所；尿酸重吸收轉運體1（uric acid reabsorption transporter 1，URAT1）抗體（批號bs-10357R）、葡萄糖轉運蛋白9（glucose transporter 9，GLUT9）抗體（批號bs-13388R）、三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白G2（adenosine triphosphate binding cassette transporter G2，ABCG2）抗體（批號bs-0662R）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）抗體（批號bs10802R）、白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）抗體（批號bs0812R）、白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）抗體（批號bs23660R)、轉化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）抗體（批號bs0086R）、辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG（批號bs0295G-HRP）均購自北京博奧森生物技術有限公司；蘇木素染液（批號G1005-1）、伊紅染液（批號G1001）購自武漢賽維爾生物技術有限公司；β-actin抗體（批號00083126）購自美國Proteintech 公司；SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒、BCA 蛋白定量檢測試劑盒均購自上海碧云天生物技術有限公司。

1.4 儀器

CYT5M 型多功能全波長酶標儀（美國BioTek公司）；H165-W 型高速微量離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司）；Mini-Sub Cell GT Cell 型水平電泳系統、ChemiDoc 免染蛋白印跡系統（美國Bio-Rad 公司）；BMJ-Ⅲ型包埋機（常州郊區中威電子儀器廠）；PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀（常州市中威電子儀器有限公司）；BA400 型數碼三目攝像顯微鏡（麥克奧迪實業集團有限公司）。

2 方法

2.1 AGTF 主要活性成分與疾病相關靶點的分子對接

尿酸代謝涉及尿酸生成（即嘌呤分解代謝）與尿酸排泄等多個途徑。XOD 和ADA 是尿酸生成途徑中的重要靶蛋白，也是抗HUA 藥物設計的關鍵靶點；URAT1、GLUT9 和ABCG2 是促尿酸排泄藥物作用的靶點[20-22]。以上靶點對AGTF 潛在藥效物質的篩選及臨床診斷、治療具有重要意義。根據文獻報道[11-23]，將藤茶總黃酮提取物中發揮藥理作用的主要活性成分二氫楊梅素、楊梅素、槲皮素和藤茶素作為配體，以URAT1、GLUT9、ABCG2、XOD和ADA 蛋白為受體，分別進行分子對接，并以臨床上降尿酸首選藥物黃嘌呤氧化酶抑制劑別嘌醇作為陽性對照[24]。

2.1.1 化合物的處理 運用 PubChem 數據庫（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）下載或Chemdraw 軟件繪制二氫楊梅素、楊梅素、槲皮素和藤茶素的2D 結構，采用PyRx 軟件對化合物分子進行能量最小化，保存為pdb 格式，作為配體備用。

2.1.2 蛋白結構的預測與篩選 在NCBI 數據庫（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）中分別檢索URAT1、GLUT9、ABCG2、XOD 和ADA 的蛋白質序列，并利用SWISS-MODEL 同源建模平臺（https://swissmodel.expasy.org/）預測所有蛋白質序列的三維蛋白結構。通過SAVES v5.0 在線平臺（https://servicesn.mbi.ucla.edu/SAVES/）對預測出的三維蛋白結構進行評分，根據Verify分析和Ramachandran圖立體化學質量評估的數據，篩選出評分高的模型作為預測的靶蛋白結構。

2.1.3 受體蛋白的準備 利用AutoDock Tools 軟件，對篩選出的靶蛋白除水、加氫、添加原子電荷、設置原子類型，存為pdbqt 格式，作為受體備用。

2.1.4 分子對接 運用PyRx 軟件中的AutoDock Vina 將化合物與受體蛋白分別進行分子對接，并對對接結果進行分析。

2.2 動物實驗驗證

2.2.1 分組、造模和給藥 根據前期預實驗結果，大鼠隨機分成對照組、模型組、別嘌醇（50 mg/kg，別嘌醇溶于蒸餾水配制成0.5%溶液）組和AGTF（0.25、0.50 g/kg，AGTF 溶于蒸餾水分別配成質量濃度為25、50 mg/mL 的溶液）組，每組10 只。腺嘌呤和鹽酸乙胺丁醇溶于蒸餾水配制成1%腺嘌呤、2.5%鹽酸乙胺丁醇的混懸液，除對照組ig 等體積生理鹽水外，其余各組ig 混懸液（10 mL/kg）[25]，1 次/d，連續14 d。于造模第8 天，各給藥組ig 藥物（10 mL/kg），對照組和模型組ig 等體積生理鹽水，1 次/d，連續14 d。

2.2.2 AGTF 對大鼠血清中XOD、ADA 活性和尿酸、肌酐、尿素氮水平的影響 大鼠禁食不禁水24 h，末次給藥1 h 后ip 10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）麻醉，腹主動脈取血，分離血清，按試劑盒說明書檢測血清中XOD 和ADA 活性和尿酸、肌酐、尿素氮水平。

2.2.3 AGTF 對大鼠腎臟組織病理變化的影響 大鼠脫頸椎處死，分離大鼠腎臟組織，用冰生理鹽水沖洗，濾紙拭干后稱定質量，計算腎臟指數；取部分腎臟組織以4%多聚甲醛固定，脫水、修剪、包埋、切片、蘇木素-伊紅（HE）染色，于顯微鏡下觀察腎臟組織的病理變化。

2.2.4 AGTF 對大鼠腎臟組織URAT1、GLUT9、ABCG2、TNF-α、IL-1β、IL-6 和TGF-β 蛋白表達的影響 采用免疫組化法檢測腎臟組織URAT1、GLUT9、ABCG2 蛋白表達[26]；取剩余腎臟組織于液氮中凍存，采用Western blotting 法檢測腎臟組織中炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6 和TGF-β 蛋白的表達[27]。

2.3 統計學方法

實驗結果采用SPSS 20.0 軟件進行統計分析，采用Image-Pro Plus6.0軟件進行圖像分析。結果以表示，數據用單因數方差分析進行組間比較。

3 結果

3.1 AGTF 主要活性成分與疾病相關靶點的分子對接結果

結合能小于0 則配體與受體可以自由結合，結合能越低表明受體與配體間的親和力越大，二者發生相互作用的可能性越高。如表1 所示，二氫楊梅素、楊梅素、槲皮素、藤茶素和別嘌醇與抗HUA 靶點蛋白的對接結合能均小于0，表明AGTF 主要活性成分均與URAT1、GLUT9、ABCG2、ADA、XOD 受體蛋白有較好的結合活性，能較穩定地自發結合，且結合作用優于別嘌醇。AGTF 中含量最高的二氫楊梅素與各靶蛋白的對接模式如圖1、2 所示，二氫楊梅素與各受體蛋白通過范德華力、氫鍵等多個價鍵結合，表明二氫楊梅素與受體蛋白的結合具有較高的穩定性。

表1 藤茶總黃酮主要活性成分和別嘌醇與疾病蛋白靶點的分子對接結果Table 1 Molecular docking of allopurinol and main active components of AGTF with disease protein targets

圖1 二氫楊梅素與受體蛋白的活性結合位點Fig.1 Active binding sites of dihydromyricetin with receptor protein

圖2 二氫楊梅素與疾病相關靶點的分子對接模式Fig.2 Molecular docking patterns of dihydromyricetin and disease-related targets

3.2 AGTF 對HUA 大鼠一般情況及腎臟指數的影響

對照組大鼠體態正常、精神狀態良好、活動自如、行動敏捷，無不良癥狀。模型組大鼠排尿增多、毛色較暗且粗糙、體形明顯消瘦，部分大鼠死亡。各給藥組大鼠表現介于對照組和模型組之間。如表2 所示，與對照組比較，模型組大鼠的腎臟指數明顯增加（P＜0.01），腎臟指數升高93.71%，表明腺嘌呤聯用乙胺丁醇可成功誘導大鼠腎功能損傷。與模型組比較，AGTF 能夠明顯降低HUA 大鼠的腎臟指數（P＜0.01），表明AGTF 對HUA 大鼠具有一定保護作用。

3.3 AGTF 對HUA 大鼠血清中尿酸水平、XOD 和ADA 活性的影響

如表3 所示，與對照組比較，模型組大鼠血清中尿酸水平、XOD 和ADA 活性均明顯升高（P＜0.01），表明模型大鼠尿酸代謝異常。與模型組比較，AGTF 組大鼠血清尿酸水平、XOD 和ADA 活性均明顯降低（P＜0.05、0.01），表明AGTF 具有改善尿酸代謝和抗HUA 作用。

表2 AGTF 對HUA 大鼠腎臟指數的影響 ()Table 2 Effect of AGTF on renal index in HUA rats

表2 AGTF 對HUA 大鼠腎臟指數的影響 ()Table 2 Effect of AGTF on renal index in HUA rats

與對照組比較：*P＜0.05 **P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05##P＜0.01，下表同*P < 0.05 **P < 0.01 vs control group; #P < 0.05 ##P < 0.01 vs model group,same as belows

組別 劑量/(g·kg-1) 腎臟指數/(mg·g-1)對照 — 07.90±0.18模型 — 15.30±0.94**別嘌醇 0.05 15.72±0.46 AGTF 0.50 11.60±0.36##0.25 10.51±0.44##

3.4 AGTF 對HUA 大鼠血清中肌酐和尿素氮水平的影響

如表4 所示，與對照組比較，模型組大鼠血清中肌酐和尿素氮水平均明顯升高（P＜0.01），表明模型大鼠腎功能異常。與模型組比較，AGTF 組大鼠血清中肌酐和尿素氮水平均明顯降低（P＜0.01），表明AGTF 能有效改善HUA 大鼠腎功能損傷，保護腎臟。

表3 AGTF 對HUA 大鼠血清中尿酸水平、XOD 和ADA 活性的影響 ()Table 3 Effect of AGTF on uric acid level,XOD and ADA activities in serum of HUA rats ()

表3 AGTF 對HUA 大鼠血清中尿酸水平、XOD 和ADA 活性的影響 ()Table 3 Effect of AGTF on uric acid level,XOD and ADA activities in serum of HUA rats ()

組別 劑量/(g·kg-1) 尿酸/(μmol·L-1) XOD/(U·L-1) ADA/(U·mL-1)對照 — 040.87±4.64 12.97±0.15 15.06±0.44模型 — 112.08±6.09** 21.13±0.42** 19.59±1.04**別嘌醇 0.05 055.28±5.60## 14.08±0.20## 16.45±0.65##AGTF 0.50 066.87±4.85## 16.30±0.39## 17.22±0.50##0.25 074.37±4.02## 16.79±0.38## 17.86±0.54#

表4 AGTF 對HUA 大鼠血清中肌酐和尿素氮水平的影響()Table 4 Effect of AGTF on creatinine and urea nitrogen levels in serum of HUA rats ()

表4 AGTF 對HUA 大鼠血清中肌酐和尿素氮水平的影響()Table 4 Effect of AGTF on creatinine and urea nitrogen levels in serum of HUA rats ()

組別 劑量/(g·kg-1) 肌酐/(μmol·L-1)尿素氮/(mmol·L-1)對照 — 31.20±3.39 06.30±0.12模型 — 63.21±5.38** 11.09±0.29**別嘌醇 0.05 60.78±2.68 10.53±0.21#AGTF 0.50 33.86±5.67## 08.24±0.22##0.25 38.49±6.50## 09.38±0.33##

3.5 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織病理變化的影響

如圖3 所示，模型組大鼠腎小球基底膜增厚，腎小管結構壞死，間質內纖維組織增生。AGTF 組大鼠腎臟組織被膜較為完整，皮質和髓質分界較為清晰，腎小球結構基本正常，腎小管排列較為整齊，腎小管上皮細胞變性、壞死的情況相較于模型組較少，偶見腎小管管腔內少量中性粒細胞滲出，病變區域間質內纖維組織增生的情況有所減少，病變程度較模型組輕。

圖3 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織病理變化的影響 (HE,×100)Fig.3 Effect of AGTF on pathological change of renal tissue in HUA rats (HE,× 100)

3.6 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織相關炎癥因子蛋白表達的影響

如圖4 和表5 所示，與對照組比較，模型組大鼠腎臟組織中TNF-α、IL-1β、IL-6 和TGF-β 蛋白表達水平明顯升高（P＜0.01），表明HUA 伴有局部炎癥反應。與模型組比較，AGTF 組大鼠腎臟組織中TNF-α、IL-1β、IL-6 和TGF-β 蛋白表達均顯著降低（P＜0.05、0.01），表明AGTF 能抑制促炎癥因子合成與釋放，減少腎臟間質纖維化的形成，有效保護腎臟組織。

圖4 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織中TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β 蛋白表達的影響Fig.4 Effect of AGTF on expressions of TNF-α,IL-1β,IL-6,and TGF-β in HUA rats

表5 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織TNF-α、IL-1β、IL-6 和TGF-β 蛋白表達的影響 ()Table 5 Effect of AGTF on expressions of TNF-α,IL-1β,IL-6,and TGF-β in kidney of HUA rats ()

表5 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織TNF-α、IL-1β、IL-6 和TGF-β 蛋白表達的影響 ()Table 5 Effect of AGTF on expressions of TNF-α,IL-1β,IL-6,and TGF-β in kidney of HUA rats ()

組別 劑量/(g·kg-1) 蛋白相對表達量TNF-α IL-1β IL-6 TGF-β對照 — 0.34±0.07 0.21±0.06 0.32±0.06 0.43±0.05模型 — 1.00±0** 1.00±0** 1.00±0** 1.00±0**別嘌醇 0.05 0.57±0.11## 0.48±0.08## 0.57±0.11## 0.63±0.13##AGTF 0.50 0.39±0.09## 0.35±0.13## 0.36±0.12## 0.53±0.08##0.25 0.82±0.06# 0.64±0.14## 0.70±0.09## 0.76±0.12##

3.7 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織URAT1、GLUT9和ABCG2 蛋白表達的影響

由圖5～7 和表6 所示，與對照組比較，模型組大鼠腎臟組織尿酸鹽重吸收相關蛋白URAT1、GLUT9 表達顯著升高（P＜0.05、0.01），促進尿酸鹽排泄相關蛋白ABCG2 表達顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，AGTF 組大鼠腎臟組織URAT1、GLUT9 蛋白表達顯著降低（P＜0.05、0.01），ABCG2蛋白表達顯著升高（P＜0.05、0.01），表明AGTF能夠通過抑制尿酸鹽在腎臟的重吸收，促進尿酸排泄，從而減輕尿酸鹽沉積對腎臟組織的損傷，起到保護腎臟組織的作用。

圖5 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織URAT1 蛋白表達的影響 (×400)Fig.5 Effect of AGTF on expression of URAT1 in kidney of HUA rats (× 400)

圖6 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織GLUT9 蛋白表達的影響 (×400)Fig.6 Effect of AGTF on expression of GLUT9 in kidney of HUA rats (× 400)

圖7 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織ABCG2 蛋白表達的影響 (×400)Fig.7 Effect of AGTF on expression of ABCG2 in kidney of HUA rats (× 400)

表6 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織URAT1、GLUT9 和ABCG2 蛋白表達的影響 ()Table 6 Effect of AGTF on expressions of URAT1,GLUT9,and ABCG2 in kidney of HUA rats ()

表6 AGTF 對HUA 大鼠腎臟組織URAT1、GLUT9 和ABCG2 蛋白表達的影響 ()Table 6 Effect of AGTF on expressions of URAT1,GLUT9,and ABCG2 in kidney of HUA rats ()

組別 劑量/(g·kg-1) 吸光度值URAT1 GLUT9 ABCG2對照 — 0.248 9±0.004 5 0.232 0±0.003 4 0.244 2±0.003 7模型 — 0.259 2±0.004 6* 0.246 4±0.004 8** 0.237 1±0.005 6**別嘌醇 0.05 0.241 6±0.002 0## 0.235 8±0.001 7# 0.251 8±0.007 6##AGTF 0.50 0.245 9±0.003 0## 0.238 0±0.003 0# 0.250 0±0.005 2#0.25 0.249 0±0.003 5# 0.237 8±0.006 0# 0.251 8±0.005 6##

4 討論

近年來，由于飲食習慣和生活條件的改變，人們大量攝入高嘌呤食物，HUA 患病率逐年增加，成為僅次于糖尿病嚴重危害人類健康的“第四高”。腎功能損傷是HUA 臨床最常見并發癥之一，尿酸是嘌呤代謝的最終產物[28]，尿酸的生成與排泄之間的失衡是直接誘導HUA 腎功能損傷的主要原因，維持正常的血尿酸水平對預防腎臟疾病的發生發展具有重要的臨床意義。藤茶作為多民族地區藥食保健資源具有豐富的活性成分，其開發價值較大。

XOD 和ADA 是尿酸生成途徑中的重要靶蛋白，在嘌呤分解代謝過程中發揮著重要作用，抑制其活性可以有效控制血清尿酸水平。腎臟是尿酸排泄的主要器官[29-30]，由于尿酸不能自由通過細胞膜，腎小管上皮細胞上的尿酸轉運蛋白URAT1、GLUT9 和ABCG2 參與尿酸鹽的分泌與重吸收，為腎臟調節尿酸代謝的重要靶點[31]。本研究將AGTF主要活性成分與 HUA的5個潛在治療靶點（URAT1、GLUT9、ABCG2、XOD、ADA）進行分子對接模擬，結果顯示AGTF 中主要活性成分二氫楊梅素、楊梅素、槲皮素和藤茶素與疾病相關靶點均具有較好的結合活性，表明這些成分可能是AGTF 中改善HUA 及其腎功能損傷的潛在藥效物質。其中，藤茶素的對接得分最高，其次是二氫楊梅素，目前對藤茶素的藥理活性研究較少，而二氫楊梅素作為AGTF 的主要活性成分，除了在降血糖、調血脂、抑菌、抗炎、鎮痛、抗氧化、抗腫瘤、保肝護肝、免疫調節等方面具有較好的藥理活性[32-33]，還能夠顯著降低小鼠血清中尿酸水平，具有保護和治療腎臟損傷的作用[34]。對接結果還發現，別嘌醇與5 個受體蛋白都能自由結合，其中與XOD 靶點的結合能最小，表明別嘌醇與XOD 的相互作用最強，與其能夠抑制XOD 從而減少尿酸產生的報道一致[35]。與別嘌醇的對接結果相比，AGTF 的主要活性成分與5 個受體蛋白發生相互作用的可能性均高于別嘌醇，提示AGTF 在抗HUA 及其腎功能損傷方面具有潛在的臨床應用價值，AGTF 可能通過二氫楊梅素、楊梅素、槲皮素和藤茶素等活性成分作用于URAT1、GLUT9、ABCG2、ADA 和XOD 靶點，發揮治療HUA 腎功能損傷的藥效作用，體現了中藥多成分、多靶點的特點。

基于分子對接結果，本研究采用腺嘌呤和乙胺丁醇復合建立大鼠HUA 腎功能損傷模型，通過體內實驗進一步探討了AGTF 對HUA 腎功能損傷的保護作用及機制。結果表明，AGTF 組大鼠血清中XOD、ADA 活性和尿酸、肌酐、尿素氮水平均顯著降低，腎臟組織病理學改變明顯減輕，表明AGTF具有較好的降低血尿酸水平、改善尿酸代謝、減輕高尿酸鹽沉積對腎臟組織損傷的作用，其作用機制可能與調節尿酸鹽轉運蛋白URAT1、GLUT9 和ABCG2 表達，抑制炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β 蛋白表達等途徑有關。AGTF 一方面能明顯抑制URAT1、GLUT9 轉運蛋白的表達，阻礙腎近曲小管尿酸鹽的重吸收；另一方面通過上調ABCG2 轉運蛋白的表達，增強腎近曲小管外側膜上的尿酸鹽轉運速率，促進腎臟尿酸鹽的排泄，協同降低尿酸水平、減少尿酸鹽在腎小管的沉積，從而減輕腎功能損傷。過多的尿酸鹽在腎臟的堆積會刺激腎小管上皮細胞，促進局部炎癥反應，導致腎間質纖維化，AGTF 能夠顯著降低大鼠腎臟中TNF-α、IL-1β、IL-6 和TGF-β 的蛋白表達，抑制炎癥反應，保護腎功能，延緩腎臟間質纖維化。

綜上所述，本研究通過分子對接技術結合體內實驗，發現AGFT 不僅能夠調節尿酸鹽轉運蛋白URAT1、GLUT9 和ABCG2 的表達，降低大鼠血清中尿酸代謝相關指標水平，有效改善HUA 和腎臟病理反應，同時還能抑制腎臟炎癥反應，發揮對HUA 腎功能損傷的保護作用。與分子對接結果一致，AGTF 能夠直接作用于XOD、ADA、URAT1、GLUT9、ABCG2 關鍵靶蛋白，從而發揮其治療作用，表明分子對接結果具有可靠性和合理性。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突