欽州灣海水和香港牡蠣體內(nèi)脂溶性貝類毒素污染特征*

徐軼肖 韋光領(lǐng) 王 玉 賈 櫻 高 寒 張 騰 佟蒙蒙

(1. 南寧師范大學(xué) 北部灣環(huán)境演變與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南寧 530001; 2. 南寧師范大學(xué) 廣西地表過程與智能模擬重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南寧 530001; 3. 浙江大學(xué)海洋學(xué)院 舟山 316000)

脂溶性貝類毒素(lipophilic shellfish toxins, LSTs)指在貝類脂肪組織富集而不易排出體外、具有熱穩(wěn)定性、易溶解于有機(jī)溶劑的一大類毒素。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)特征, 脂溶性貝類毒素主要包括 6 類: 原多甲藻酸(azaspiracids, AZAs, 也叫氮雜螺環(huán)酸)、短裸甲藻毒素(brevetoxins, BTXs 或 PbTx)、環(huán)亞胺(cyclic imines,CIs)、大田軟海綿酸(okadaic acids, OAs)、蛤毒素(pectenotoxins, PTXs, 也叫扇貝毒素)和蝦夷扇貝毒素(yessotoxins, YTXs)。這些貝類毒素由海洋藻類產(chǎn)生, 經(jīng)貝類濾食攝入累積代謝而成。貝類沾染 LSTs毒素是沿海國(guó)家常見的水產(chǎn)品安全問題(紀(jì)瑩等,2018; Farabegoli et al, 2018)。目前我國(guó)貝類主要沾染AZAs、CIs、OAs、PTXs、YTXs 五大類組分, 除 YTXs主要發(fā)生在北方海域, 其他組分從南到北均有發(fā)生(李美慧等, 2016; 梁玉波等, 2019)。

廣西北部灣位于我國(guó)南海西北部, 與飽受海洋環(huán)境問題困擾的我國(guó)東部海域相比, 長(zhǎng)期被譽(yù)為“潔海、凈海” (鐘春云, 2015)。事實(shí)上, 2010 年以來(lái), 廣西北部灣海域環(huán)境日益惡化, 藻華頻發(fā)(Xu et al,2019), 但對(duì)該海域的有毒藻及有毒貝類研究仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。北部灣脂溶性貝類毒素研究早期見吳施衛(wèi)等(2005)、楊美蘭等(2009)、黃玉柳等(2010)和黃翔等(2013), 他們通過小白鼠生物法對(duì)腹瀉性貝毒(可能包含脂溶性貝類毒素中的 OAs、DTXs、PTXs 組分)進(jìn)行了研究, 近年學(xué)者們?yōu)榱嗣鞔_毒素組成和含量大小, 應(yīng)用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)開展脂溶性貝類毒素研究(劉仁沿等, 2008, 2014; 紀(jì)瑩等,2018; 戴梓茹等, 2018)。在這些為數(shù)不多的北部灣LSTs 毒素工作中, 環(huán)亞胺毒素中的GYM (gymnodimine)在我國(guó)首次被報(bào)道恰恰來(lái)自廣西北海的緣齒牡蠣(Dendostrea crenulifrea) (劉仁沿等, 2008), 2016 年春季中國(guó)沿海31 種養(yǎng)殖貝類中, 廣西北海貝類的GYM均值最高, 其中對(duì)角蛤(Antigono lamellaris) GYM 含量高達(dá)211.47 μg/kg (紀(jì)瑩等, 2018)。國(guó)際上至今未規(guī)定 GYM 限量標(biāo)準(zhǔn), 如此高含量的 GYM 對(duì)人類的健康影響仍無(wú)法評(píng)估。

北部灣脂溶性貝類毒素研究多集中在廣西北海(劉仁沿等, 2008, 2014; 紀(jì)瑩等, 2018), 其他海域研究很少。欽州灣位于廣西北部灣北部, 過去三十年溶解態(tài)無(wú)機(jī)氮(DIN)、磷酸鹽(PO4)均經(jīng)歷了顯著增長(zhǎng)(Xu et al, 2019), 部分區(qū)域出現(xiàn)富營(yíng)養(yǎng)化, 海域環(huán)境利于海洋生物生長(zhǎng)(楊斌等, 2014), 是國(guó)內(nèi)外聞名的牡蠣養(yǎng)殖基地(伍晉宏等, 2016)。香港牡蠣(Crassostrea hongkongensis), 又稱香港巨牡蠣, 俗稱“大蠔”、“白蠔”, 是欽州灣主要養(yǎng)殖品種、欽州四大名貴海產(chǎn)之一(賈真等, 2019)。目前仍不了解該海域香港牡蠣沾染LSTs 毒素情況與食用安全性。此外, 北部灣包括欽州灣至今未有海水脂溶性貝類毒素污染研究, 而這是了解本地區(qū)LSTs 毒素來(lái)源與食物鏈富集的關(guān)鍵因素。

固相吸附毒素跟蹤技術(shù)(solid phase adsorption toxin tracking, SPATT)通過大孔樹脂對(duì)特定貝類毒素快速高效的吸附性, 吸附濃縮海水中的貝類毒素(MacKenzie et al, 2004; Roué et al, 2018)。該項(xiàng)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用到國(guó)內(nèi)外不同海域進(jìn)行LSTs 毒素預(yù)警預(yù)測(cè)研究(Rundberget et al, 2009; 渠佩佩等, 2016)。因此, 本文選擇欽州灣為樣品采集地點(diǎn), 以香港牡蠣為研究對(duì)象, 通過SPATT 和LC-MS/MS 方法, 對(duì)欽州灣海域養(yǎng)殖區(qū)水體和香港牡蠣體內(nèi)的貝類毒素進(jìn)行連續(xù)一年的污染分析, 結(jié)果可為欽州灣和北部灣脂溶性貝類毒素研究、牡蠣食用安全和出口貿(mào)易管理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑

本文研究的脂溶性貝類毒素氮雜螺環(huán)酸類AZA1、AZA2、AZA3, 鰭藻毒素 DTX1、DTX2, 環(huán)亞胺毒素GYM、大田軟海綿酸OA、扇貝毒素PTX1、PTX2, 螺環(huán)內(nèi)酯毒素SPX1, 蝦夷扇貝毒素YTX 標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自加拿大海洋生物科學(xué)研究所(The National Research Council Canada, Marine Analytical Chemistry Standards Program,Halifax NS, Canada)。毒素提取所需的分析純級(jí)甲醇購(gòu)自中國(guó)國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司, HPLC-MS/MS分析所需的色譜純級(jí)甲醇和乙腈購(gòu)自美國(guó)的 Fisher公司。

1.2 SPATT 吸附裝置制作

SPATT 盤具體制作參考渠佩佩等(2016), 即將干重 9.00 g±0.05 g 的 Diaion?HP-20 樹脂(H&E Co., Ltd,China)放在 23 cm×12 cm 的 120 μm 孔徑篩絹(SEFAR NITEX 03-120/49)中, 繡花繃子(直徑9 cm)固定。使用前活化: 100%甲醇中浸泡48 h, 取出, 用大量MilliQ 超純水反復(fù)沖洗, 然后MilliQ 水中超聲10 min, 取出后用MilliQ 水沖洗三遍后, 浸泡其中4—6oC 冷藏待用。

1.3 樣品采集

2015 年 10 月至 2016 年 9 月在欽州灣養(yǎng)殖區(qū)海水交換口設(shè)置采樣點(diǎn)S1、S2 和S3 (圖1)。在距水面2m 處將已經(jīng)活化的SPATT 盤用漁線系在香港牡蠣養(yǎng)殖鏈上, 同一位置兩個(gè)重復(fù)(n=2), 采樣時(shí)取出SPATT 樹脂盤放入密封袋內(nèi), 同一位置放入新的SPATT 吸附裝置, 并采集該采樣點(diǎn)的香港牡蠣樣品,三個(gè)重復(fù)(n=3), -20°C 冷凍保存待后續(xù)分析。研究中每月采樣一次, 若海況欠佳不利作業(yè), 采樣時(shí)間相應(yīng)提前或滯后＜5 天, 共采集 51 份 SPATT; 2015 年 11 月?lián)p失一個(gè)貝類樣品, 共采集35 份香港牡蠣樣品。

1.4 樣品分析

1.4.1 SPATT 毒素提取 將SPATT 盤置于燒杯中,用500 mL MilliQ 水浸泡5 min, 輕甩去水分并除去多余的鹽分, 重復(fù)一次。將樹脂轉(zhuǎn)移至30 mL 玻璃注射針筒中, 加入 30 mL 甲醇, 用玻璃棒輕輕攪動(dòng)樹脂,使之充分浸泡于甲醇中。1 min 后打開塞閥, 調(diào)節(jié)流速, 以 1 mL/min 過 0.22 μm 濾膜收集在血清瓶中。氮吹濃縮, 用 100%甲醇定容到 5 mL, 渦旋 1 min。取1 mL 過 0.22 μm 有機(jī)相濾膜裝進(jìn)色譜進(jìn)樣小瓶中,-80oC 冷凍保存, 待 LC-MS/MS 分析。

圖1 采樣點(diǎn)Fig.1 Sampling sites

1.4.2 香港牡蠣毒素提取 牡蠣樣品解凍去殼攪成勻漿, 準(zhǔn)確稱取2.00 g±0.02 g 并加入9 mL 100%甲醇, 渦旋混勻 1 min, 離心(4000×g, 10 min), 取上清液轉(zhuǎn)移至30 mL 玻璃針筒中。殘?jiān)儆?mL 甲醇重復(fù)提取 1 次, 合并上清液過 0.22 μm 針式過濾器, 收集樣品至血清瓶中, 氮吹濃縮, 用甲醇定容到 5 mL,-80oC 冷凍保存, 待 LC-MS/MS 分析。由于 OA/DTXs類毒素易發(fā)生轉(zhuǎn)化, 為了評(píng)估 OA 類毒素食用安全,需對(duì)貝肉水解后測(cè)定毒素總量(OA、DTX1、DTX2):取 1 mL 上述提取液于進(jìn)樣小瓶中, 加入 125 μL 2.5 mol/L NaOH, 渦旋 0.5 min 后 76oC 加熱 40 min, 待流水冷卻至室溫后用 125 μL 2.5 mol/L HCl 中和, 過0.22 μm 濾膜后, 于-80oC 保存, 待 LC-MS/MS 分析。

1.4.3 LC-MS/MS 分析 采用四級(jí)桿-線性阱復(fù)合型液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(5500 QTRAP LC-MS/MS system, AB Sciex Instruments, Foster City, CA, USA)對(duì)貝類毒素進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。HPLC 條件:Phenomenex Kinetex XB-C18色譜柱(100 mm×2.1 mm,2.6 μm), 柱溫 40oC, 流速 0.350 mL/min, 進(jìn)樣體積5 μL。流動(dòng)相 A 為含 50 mmol/L 甲酸、2 mmol/L 甲酸銨的水, 流動(dòng)相B 為含50 mmol/L 甲酸、2 mmol/L甲酸銨的 95%乙腈水溶液。梯度洗脫: 0—0.01 min,80% A; 0.01—7.0 min, 由80% A 線性梯度至10% A;7.0—10.0 min, 10% A; 10.0—10.10 min, 回到 80% A;10.10—12.0 min, 80% A。質(zhì)譜條件見王玉(2018)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用外標(biāo)法進(jìn)行毒素定量, 用對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)回歸方程進(jìn)行含量計(jì)算。對(duì)于沒有標(biāo)準(zhǔn)品的毒素, 參照王玉(王玉, 2018)進(jìn)行去簇電壓和碰撞能量設(shè)定, 通過對(duì)比定性離子對(duì)的質(zhì)荷比確定。OA、DTX-1、DTX-2 毒素含量根據(jù)毒素當(dāng)量因子 1.0、1.0、0.6 (Alexander et al,2009)換算成μg/kg OA 當(dāng)量, 以評(píng)估OA 類毒素食用安全。計(jì)算結(jié)果扣除空白值, 保留二位有效數(shù)字。

2 結(jié)果

2.1 毒素種類及含量

在監(jiān)測(cè)的14 種脂溶性貝類毒素AZA1、AZA2、AZA3、DTX1、DTX2、GYM、OA、PTX1、PTX2、SPX1、YTX、Homo-YTX、45-OH-YTX、45-OH-homo YTX 中, GYM 在SPATT 吸附裝置和香港牡蠣中都有檢出, OA 和 PTX2 僅在 SPATT 檢出, DTX2、SPX1 和Homo-YTX 僅在香港牡蠣檢出(表1)。SPATT 分析的毒素最高值為 OA: 143.94 μg/(kg resin·30d), 香港牡蠣分析的最高值為GYM: 52.14 μg/kg (表1)。海水和香港牡蠣中檢出率最高的成分分別為 OA (98.0%)和GYM (100%)。

2.2 海水毒素變化

以 SPATT 樹脂盤吸附的脂溶性貝類毒素表征海水中相應(yīng)的毒素, 三個(gè)監(jiān)控點(diǎn)毒素GYM、OA、PTX2標(biāo)準(zhǔn)差分別為 0—0.4 4、 1.5 4—3 9.6 3、0.14—4.36 μg/(kg resin·30d), 變化幅度較大, 故用毒素含量平均值進(jìn)行比較分析, 發(fā)現(xiàn)在整個(gè)監(jiān)控期內(nèi),海水中共檢出GYM、OA、PTX2 三種毒素, 其中OA的含量最高, PTX2 其次, GYM 的含量最低(圖2)。以3—5 月為春季、6—8 月為夏季、9—11 月為秋季、12月至次年2 月為冬季, 發(fā)現(xiàn)海水中OA 和PTX2 的均值夏季高, 其他季節(jié)低。其中 OA 在 7 月最高, 為53.09 μg/(kg resin·30d), 次均值 31.04 μg/(kg resin·30d)在 6 月; PTX2 均值在 6 月最高, 為 6.68 μg/(kg resin·30d), 次均值 4.17 μg/(kg resin·30d)在 8 月(圖 2)。海水GYM 在冬季的2 月最高, 但全年含量變化不明顯, 為 ND—1.26 μg/(kg resin·30d) (圖 2)。

表1 欽州灣海水和香港牡蠣脂溶性貝類毒素種類及含量Tab.1 Toxin profiles and contents in seawater and Crassostrea hongkongensis in the Qinzhou Bay

圖2 SPATT/海水中脂溶性貝類毒素季節(jié)變化特征Fig.2 Temporal variation of lipophilic shellfish toxins in SPATT resins/seawaters

2.3 香港牡蠣體內(nèi)毒素變化

香港牡蠣體內(nèi)共檢出 GYM、DTX2、SPX1、Homo-YTX 四種毒素, Homo-YTX 被檢出但未能定量。GYM、DTX2、SPX1 標(biāo)準(zhǔn)差分別為1.95—14.33、0.06—0.95、0—1.20 μg/kg, 變化幅度較大, 仍用毒素含量平均值進(jìn)行比較分析, 具體見圖 3, 發(fā)現(xiàn) GYM的含量最高, DTX2 和SPX1 次之。季節(jié)變化上, GYM冬季和夏季較高, 均值最高值和次高值分別為2 月和8 月的 43.19 和 38.22 μg/kg; DTX2 在春季和夏季較高,均值最高值和次高值分別為 3 月和 7 月的 7.55 和2.31 μg/kg。SPX1 冬季較高, 但含量全年變化小, 為ND—1.98 μg/kg。

2.4 海水與香港牡蠣毒素相關(guān)性

因海水(SPATT)與香港牡蠣體內(nèi)均檢出 GYM,且檢出率分別為58.8%和100%, 故選擇GYM 分析海水與香港牡蠣體內(nèi)毒素的相關(guān)性。發(fā)現(xiàn)海水和香港牡蠣體內(nèi)GYM 毒素均值變化趨勢(shì)基本一致, 呈正相關(guān)(圖 4), Pearson 相關(guān)系數(shù)為 0.70 (P=0.017, P＜0.05)。兩者的GYM 含量10 月至次年1 月趨勢(shì)有所不同, 但從 1 月份開始兩者均急劇增長(zhǎng), 在 2 月份達(dá)到峰值,隨后緩慢減少, 在夏季再次增加, 并在 8 月份達(dá)到第二個(gè)峰值(圖 4)。總的來(lái)說(shuō), 除了2 月出現(xiàn)短暫峰值,海水和香港牡蠣的GYM 含量春夏季高、秋冬季低。

將檢測(cè)到的 OA 和 DTXs 毒素?fù)Q算成 OA 當(dāng)量,對(duì)海水(SPATT)和香港牡蠣中的OAs 毒素含量進(jìn)行比較, 發(fā)現(xiàn)兩者亦呈現(xiàn)相近的變化趨勢(shì)(圖 5), 但相關(guān)性較弱, Pearson 相關(guān)系數(shù)為0.35, 分析與牡蠣體內(nèi)很長(zhǎng)時(shí)間 OA 類毒素含量低/未檢出有關(guān)。海水毒素含量峰值出現(xiàn)時(shí)間比香港牡蠣中提前: 前者2 月出現(xiàn)短暫的峰值后緩慢減少, 5 月開始急劇增長(zhǎng), 并在7 月達(dá)到峰值, 但后者直至3 月才出現(xiàn)短暫的峰值, 隨后維持在較低水平, 并從 6 月開始增長(zhǎng), 7 月達(dá)到次峰值(圖 5)。

圖5 OA 當(dāng)量在海水和香港牡蠣中的分布特征Fig.5 OA equivalents relationships between SPATT discs and Crassostrea hongkongensis tissues

3 討論

3.1 海水毒素含量比較

SPATT 技術(shù)通過聚合樹脂被動(dòng)吸附海水中由產(chǎn)毒藻釋放的生物毒素, 以期實(shí)現(xiàn)生物毒素實(shí)時(shí)監(jiān)控和提前預(yù)警(張亞亞等, 2020)。該技術(shù)最早見于新西蘭脂溶性貝類毒素監(jiān)測(cè)中(MacKenzie et al, 2004), 后在實(shí)驗(yàn)室及野外的脂溶性和水溶性貝類毒素研究中得到廣泛應(yīng)用, 它與傳統(tǒng)的有毒藻細(xì)胞、貝毒和魚毒檢測(cè)相比, 具有可靠、靈敏及同時(shí)監(jiān)測(cè)多類毒素的優(yōu)點(diǎn)(Roué et al, 2018)。至今研究者們使用了二十來(lái)種樹脂開展 SPATT 研究, 其中, DIAION?HP20 樹脂被證實(shí)為最常用有效的類型, 在海水脂溶性貝類毒素中得到了大量成功應(yīng)用(宿志偉 等, 2016; 渠佩佩等,2016; Roué et al, 2018)。

本文系首次對(duì)中國(guó)北部灣海水LSTs 含量進(jìn)行研究, 本研究應(yīng)用 SPATT 技術(shù)發(fā)現(xiàn)欽州灣海水中存在GYM、OA、PTX2 三種毒素, 未發(fā)現(xiàn)黃、東海海域常見的DTX1 和YTX(李兆新等, 2016; 宿志偉等, 2016;渠佩佩等, 2016; Li et al, 2017)。其中, OA 和 PTX2 在我國(guó)海域分布廣泛(渠佩佩等, 2016; 宿志偉等, 2017;Li et al, 2017; Chen et al, 2018), 而GYM 目前僅在局部海域檢出(渠佩佩等, 2016; 宋新成等, 2017; 宿志偉等, 2017)。欽州灣海水脂溶性貝類毒素含量較國(guó)內(nèi)其他海域低, 如黃海桑溝灣GYM、OA、PTX2 三種毒素最高值達(dá) 37.44、25.48、65.44 μg/(20g resin·7d)(宿志偉等, 2017), 單位換算成 μg/(kg resin·30d)后約為欽州灣海水對(duì)應(yīng)毒素最高值的224.0、2.1、57.7 倍, 欽州灣海水與浙江南麂相對(duì)比較接近, 前者GYM、OA、PTX2 最大值分別是后者最大值的1.8、6.2 和0.16 倍(渠佩佩等, 2016; 表 1)。可見, 我國(guó)各個(gè)海域海水LSTs 毒素組成和含量大小存在差別, 這與各自海域海水的產(chǎn)毒藻組成和豐度、理化特征、沉積環(huán)境等密切相關(guān)(Wang et al, 2015; 梁玉波等, 2019)。

3.2 牡蠣毒素含量與安全評(píng)估

本文系首次對(duì)欽州灣養(yǎng)殖的香港牡蠣LSTs 含量進(jìn)行研究。早在 2002 年, 廣西沿岸已發(fā)現(xiàn)貝類沾染腹瀉性貝毒(可能OAs、PTXs)(吳施衛(wèi)等, 2005), 但當(dāng)時(shí)檢測(cè)采用的是生物小白鼠法, 故無(wú)法得知結(jié)果是否可靠(假陽(yáng)性)、及確切的染毒成分和毒性大小。在最近采用的液-質(zhì)聯(lián)用法研究中, 欽州灣櫛江珧(Atrina pectinata)未檢測(cè)到 LSTs 毒素(戴梓茹等,2018), 但本文在該海域香港牡蠣體內(nèi)檢測(cè)到了四種常見的 LSTs 成分(DTX2、GYM、SPX1、Homo-YTX),結(jié)果很可能與兩者分析的貝類品種不同有關(guān)。本文的香港牡蠣GYM 和SPX1 平均含量與2008 年國(guó)內(nèi)首次報(bào)道的廣西北海緣齒牡蠣體內(nèi)的GYM 含量12.00μg/kg(劉仁沿等, 2008)接近, 但比2016 年春季廣西北海對(duì)角蛤(A. lamellaris)、櫛江珧(A. pectinata)、牡蠣(Crassostrea sp.)、厚殼貽貝(Mytilus coruscus)、短文蛤(Meretrix petechialis)、文蛤(Meretrix linnaeus)貝類體內(nèi)的 GYM 含量 49.75 μg/kg (2.47—211.47 μg/kg)和 SPX1 含量1.11 μg/kg (ND—2.35 μg/kg)(紀(jì)瑩等, 2018)低。毒素檢出率則與紀(jì)瑩等(2018)接近, GYM 均為100%,SPX1 分別為85.7%和83.3%, 上述差異很可能與貝類種類和采樣時(shí)間不同有關(guān)。至于本文頻繁檢出的DTX2 未被檢測(cè)(紀(jì)瑩等, 2018), 所以無(wú)法進(jìn)行比較。

與國(guó)內(nèi)其他海域貝類 LSTs 含量相比, 總的來(lái)說(shuō)廣西沿岸貝類 LSTs 毒素成分較少, 如常檢測(cè)不到OA、PTX2、YTXs 等, 毒素含量亦偏低, 但 GYM 例外, 其含量和檢出率明顯大于國(guó)內(nèi)其他海域來(lái)源的貝類(陳建華等, 2014; 紀(jì)瑩等, 2018; 陳雨等, 2018;Liu et al, 2019)。目前我國(guó)尚未對(duì)貝類LSTs 毒素制訂相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn), 食用安全評(píng)估往往參考?xì)W盟標(biāo)準(zhǔn),AZA、OA、PTX 為 160 μg/kg, YTX 為 1.0 mg/kg [EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM),2010], 環(huán)亞胺類毒素GYM 和SPX1 等成分國(guó)際上仍未設(shè)定標(biāo)準(zhǔn), 有時(shí)參考腹瀉性貝類毒素的標(biāo)準(zhǔn)160 μg/kg 進(jìn)行評(píng)價(jià)(紀(jì)瑩等, 2018), 參照上述標(biāo)準(zhǔn),本文采集的欽州灣香港牡蠣盡管受到多個(gè)LSTs 毒素組分污染, 但未超過食用安全標(biāo)準(zhǔn), 可放心食用。

3.3 毒素季節(jié)變化特征

海水和貝類中的脂溶性貝類毒素普遍存在季節(jié)變化特征。本文欽州灣海水和香港牡蠣體內(nèi)的 LSTs毒素通常夏季和冬季含量高, 尤其是夏季, 多個(gè)毒素成分達(dá)到峰值, 且海水和貝類相比, 達(dá)到峰值的時(shí)間同步或提前。我國(guó)黃海海區(qū)研究發(fā)現(xiàn)膠州灣(李兆新等, 2011)、靈山灣(張婷婷, 2015)、桑溝灣(宿志偉等,2016)海水中, LSTs 毒素成分如PTX2、OA、DTX1、GYM、PTX2 也在夏季7—8 月達(dá)到峰值, 東海南麂的LSTs 毒素夏季含量最高, 其次是春秋季(渠佩佩等,2016)。本文毒素峰值變化趨勢(shì)與這些研究類似, 分析可能因?yàn)橄募舅疁馗? 利于水體中 LSTs 產(chǎn)毒藻生長(zhǎng)從而釋放更多毒素至水體中, 高產(chǎn)毒藻密度也利于貝類攝食有毒藻并積累毒素。但其他研究則發(fā)現(xiàn)海水中 OA 濃度 5 月最高(宋新成等, 2017), 貝類 OA 和PTX2 傾向于春季和冬季, GYM 則于冬季達(dá)到峰值(Wu et al, 2015), 貝類 OA 秋季、PTXs 春季最高,AZAs、GYM 和YTXs 則無(wú)季節(jié)性差異, 具體隨品種而異(陳雨等, 2018), 最近更有學(xué)者提出貝類毒素季節(jié)變化呈地點(diǎn)特異性(site-specific seasonal variation pattern)(Liu et al, 2019)。因此, 關(guān)于欽州灣/北部灣貝類脂溶性毒素季節(jié)變化特征, 有必要進(jìn)一步擴(kuò)大采樣范圍, 并將更多的貝類品種納入研究。

3.4 LSTs 潛在產(chǎn)毒藻

海水和貝類體內(nèi)的 LSTs 毒素來(lái)源于海洋微藻,我國(guó)北部灣之外海域已記錄多種 LSTs 潛在產(chǎn)毒藻(Gu et al, 2013; Jiang et al, 2014; Liu et al, 2017; 勾玉曉等, 2018), 但廣西北部灣 LSTs 產(chǎn)毒藻研究極為匱乏, 本文亦未能就海水樣品中的 LSTs 肇事藻開展識(shí)別工作。目前, 僅劉仁沿等(2016)指出廣西北海分布有網(wǎng)狀原角藻和具刺膝溝藻孢囊, Gu 等(2013)在防城港海域分離到部分腹孔環(huán)胺藻株能產(chǎn)生 AZA2 毒素(Gu et al, 2013; Li et al, 2016)。而對(duì)廣西沿岸反復(fù)檢測(cè)到、濃度多次達(dá)到全國(guó)最高, 潛在危害突出的GYM 產(chǎn)毒藻尚未分離發(fā)現(xiàn)。GYM 是一種螺旋形環(huán)亞胺結(jié)構(gòu), 最先從新西蘭牡蠣(Tiostrea chilensis)中分離到, 產(chǎn)毒藻為甲藻門(Dinophyta)、凱倫藻屬(Karenia)下的鞍狀凱倫藻(K. selliformis)和亞歷山大藻屬(Alexandrium)下的奧氏亞歷山大藻(A. ostenfeldii)(與A. peruvianum 同種異名) (Farabegoli et al, 2018)。目前, 中國(guó)其他沿海包括北部灣仍未分離明確能產(chǎn)GYM 毒素的微藻, 只在我國(guó)渤海灣發(fā)現(xiàn)了不產(chǎn)毒的奧氏亞歷山大藻(Gu, 2011)、香港海域發(fā)現(xiàn)對(duì)輪蟲具有急性毒性的鞍狀凱倫藻(李思等, 2018)。由于自然水體中 LSTs 肇事藻濃度往往不高, 通過傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)手段不易分離發(fā)現(xiàn)目標(biāo)藻, 接下來(lái)有必要借助在浮游植物檢測(cè)研究中得到廣泛應(yīng)用的實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)技術(shù)(Medlin et al, 2017), 完成北部灣LSTs 目標(biāo)藻定量定性分析。

4 結(jié)論

(1) 海水共檢出 GYM、OA 和 PTX2 三種組分, 平均濃度分別為 0.44、14.20 和 1.67 μg/(kg resin·30d)。香港牡蠣共檢出 DTX2、GYM、SPX1、Homo-YTX四種組分, 其中 Homo-YTX 為定性結(jié)果, DTX2、GYM、SPX1 三者平均濃度分別為 0.95、18.86 和0.95 μg/kg。

(2) GYM 毒素均值在海水和香港牡蠣之間變化趨勢(shì)呈正相關(guān), Pearson 相關(guān)系數(shù)為0.70; OAs 毒素則變化趨勢(shì)類似, 但Pearson 相關(guān)系數(shù)0.35。

(3) 毒素含量存在一定季節(jié)變化。海水 OA 和PTX2 夏季高, 其他季節(jié)低, 均值最高值分別發(fā)生在7月和 6 月; 香港牡蠣體內(nèi) GYM 冬季和夏季較高,DTX2 春季和夏季較高; 海水中的 GYM 和香港牡蠣體內(nèi)的SPX1 全年季節(jié)變化均不明顯。

因此, 欽州灣海水和香港牡蠣已受到多個(gè) LSTs毒素組分污染, 海水 LSTs 毒素含量較國(guó)內(nèi)其它海域低, 參考?xì)W盟 LSTs 毒素標(biāo)準(zhǔn), 欽州灣香港牡蠣脂溶性貝類毒素未超標(biāo), 可放心食用 。