凋亡抑制蛋白Survivin和p300/CBP相關因子在宮頸癌組織中的表達以及臨床意義

李 蕾 王青青 許艷華 張俊濤

1.山東省東營市東營區人民醫院病理科，山東東營 257000；2.山東省濱州市人民醫院病理科，山東濱州 256600

宮頸癌是全世界女性第四大常見的惡性腫瘤，嚴重影響女性健康[1]。在我國每年宮頸癌新發病例13.15 萬，宮頸癌已成為我國中青年女性的第二大高發惡性腫瘤，占到全球病例的28%以上，且發病人群出現傾向年輕化的趨勢，同時每年有5 萬左右的人死于該病[2]。目前，雖然隨著篩查工作的普及患者的病死率逐年降低，但是宮頸癌傳統的治療方式損傷大，易產生耐藥性，效果不理想，因此找到合理有效的治療手段是臨床醫務工作迫切需要解決的問題。Survivin蛋白和p300/CBP相關因子參與了腫瘤細胞的發生發展、凋亡、侵襲轉移和腫瘤中血管的生成，目前研究發現Survivin蛋白在多種腫瘤組織中呈現高表達，同時p300/CBP相關因子低表達甚至不表達。本研究通過檢測宮頸癌組織內Survivin蛋白和p300/CBP相關因子的表達水平，探討Survivin蛋白、p300/CBP相關因子與宮頸癌的關系以及兩種蛋白之間的關聯性，以期為宮頸癌的預后判斷以及治療提供新的思路，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇東營市東營區人民醫院2016年2月～2020年2月病理科保存并經病理證實的宮頸癌組織40例（30例為鱗狀細胞癌，10例為腺癌）和非宮頸癌宮頸組織10例（因子宮肌瘤或子宮脫垂行全子宮切除術），分為宮頸癌組和非宮頸癌組。宮頸癌組中，年齡38～70歲，中位年齡46歲；≥50歲20例，<50歲20例；腫瘤分期：Ⅰ期+Ⅱ期28例，Ⅲ期+Ⅳ期12例；病理分級：G1級+G2級26例，G3級14例。非宮頸癌組中，年齡35～69歲，中位年齡44歲。兩組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）,具有可比性。本研究經東營市東營區人民醫院醫學倫理委員會批準，患者及家屬均知情并簽署同意書。納入標準：①臨床資料完整；②均為首發病例。排除標準：術前有化療、放療以及免疫治療史者。

1.2 方法

所有組織石蠟塊5 μm 切片，免疫組化SP 法進行標記。Survivin 單克隆抗體（Abcam，美國，CSR-0290）購自上海威奧生物科技有限公司，p300/CBP相關因子單克隆抗體（Santa Cruz 生物公司，美國，sc-13124）購自上海煊翎生物科技有限公司。

1.3 觀察指標及評價標準

細胞內出現棕色或棕黃色顆粒為陽性細胞，Survivin蛋白表達定位在細胞質，p300/CBP相關因子定位在細胞質和細胞核，根據陽性細胞百分比進行判讀：陽性細胞百分比≥10%判定為陽性結果。

1.4 統計學方法

采用SPSS 18.0 統計學軟件進行數據分析，計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Pearson列聯系數C 來分析兩個分類變量之間關系的密切程度，以P<0.05 為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 宮頸癌組、非宮頸癌組Survivin蛋白及p300/CBP相關因子陽性表達率的比較

宮頸癌組Survivin蛋白陽性表達率（72.5%）高于非宮頸癌組（0.0%），差異有高度統計學意義（χ2=17.262，P<0.001）；宮頸癌組p300/CBP相關因子陽性表達率（40.0%）低于非宮頸癌組（80.0%），差異有統計學意義（χ2=5.128，P=0.024）（表1）。

2.2 不同類型宮頸癌組織中，Survivin蛋白及p300/CBP相關因子陽性表達率的比較

Survivin蛋白的陽性表達率隨宮頸癌腫瘤分期及病理分級的增高而逐漸增高（P<0.05），與患者年齡和組織學類型無關（P>0.05）；p300/CBP相關因子的陽性表達率隨宮頸癌腫瘤分期及病理分級的增高而逐漸降低（P<0.05），與患者年齡和組織學類型無關（P>0.05）（表1）。

表1 不同類型宮頸癌組織中Suvivin蛋白和CBP/p300 相關因子表達陽性表達率的比較

2.2 Survivin蛋白和p300/CBP相關因子在宮頸癌中表達的相關性

Survivin蛋白和p300/CBP相關因子在宮頸癌中的表達有密切的關聯性（χ2=16.385，P<0.001，C=0.539）（表2）。Survivin蛋白和p300/CBP相關因子在宮頸癌中的表達呈負相關（r=0.64，P<0.05）。

表2 Survivin蛋白和p300/CBP相關因子在宮頸癌中表達的相關性（例）

3 討論

Survivin蛋白是凋亡抑制蛋白家族的新成員，廣泛表達于人類多種惡性腫瘤中，涉及腫瘤細胞的分化增殖及浸潤轉移。Survivin蛋白對腫瘤的影響主要表現在干擾細胞凋亡、調控細胞周期促進細胞的有絲分裂、促進血管形成。Survivin蛋白通過多種復雜機制參與腫瘤細胞凋亡，如可以與促凋亡蛋白Smac/Diablo結合，從而對抗其促凋亡的功能[3]。可以與半胱天冬酶-3（Caspase-3）和半胱天冬酶-7（Caspase-7）直接結合，從而防止它們裂解和被半胱天冬酶-9（Caspase-9）激活，進而阻斷細胞凋亡[4]。在細胞增殖過程中，高表達Survivin蛋白的細胞可越過G2/M，直接完成異常有絲分裂，造成細胞周期縮短，導致腫瘤增殖速度加快[5]。有研究結果顯示，Survivin蛋白具有促進血管內皮生長因子誘導腫瘤新生毛細血管形成的作用，從而為腫瘤的無限增殖創造了良好的營養環境[6]。近年來，已經有研究發現針對腫瘤相關抗原的免疫事件，能夠在一定程度上延緩腫瘤的生長速度，提高腫瘤凋亡率。小鼠乳腺癌模型中Survivin蛋白和促黃體激素釋放激素融合蛋白的聯合免疫治療可顯著抑制腫瘤生長，增強腫瘤抑制作用[7]。Survivin蛋白作為一種新的重要的凋亡抑制蛋白，以其為靶點的抗癌藥物的研究亦成為熱點。Dang[8]研究發現富半胱氨酸蛋白61 可以抑制Survivin 的表達、激活p53，從而誘導了食管腺癌腫瘤細胞的凋亡。本研究結果提示，Survivin蛋白在正常宮頸組織中不表達，這與以往人們研究的結果一致[9]。本研究結果顯示，隨著宮頸癌腫瘤分期及病理分級的增高，Survivin蛋白的陽性表達率逐漸增高（P＜0.05）。提示Survivin蛋白的陽性率越高，腫瘤的侵襲性越強，患者的愈后愈差，Survivin蛋白可作為評估宮頸癌預后的一種潛在性指標。同時本研究為宮頸癌的免疫治療及靶向治療提供了理論基礎。

組蛋白的乙酰化作為一種重要的表觀遺傳修飾，與腫瘤的關系極為密切，腫瘤細胞的組蛋白大部分呈現低乙酰化狀態。p300/CBP相關因子是真核細胞內一種重要的組蛋白乙酰轉移酶，通過乙酰化組蛋白和非組蛋白的方式參與基因的轉錄調控，與細胞分化、凋亡、腫瘤發生等密切相關。p300/CBP相關因子與多種惡性腫瘤的發生發展存在一定聯系，在多種腫瘤細胞中p300/CBP相關因子表達下調，并且與患者不良預后密切相關。在大多數原發性肝細胞肝癌中p300/CBP相關因子呈現低表達，并發現p300/CBP相關因子的下調與門靜脈侵犯顯著相關。p300/CBP相關因子可以誘導肝癌細胞的凋亡和自噬、抑制肝癌轉移[10]。在結腸癌的研究中發現，p300/CBP相關因子的降低損害p53 的乙酰化，減弱p53 依賴性p21 的轉錄，從而導致腫瘤細胞周期蛋白D1 和磷酸化增加[11]。p300/CBP相關因子對骨肉瘤細胞有正向調節作用，p300/CBP相關因子通過靶向自噬相關基因5（ATG5）和ATG7 調節骨肉瘤細胞組蛋白H3S28 磷酸化，進而促進瘤細胞的自噬[12]。p300/CBP相關因子亦可以抑制細胞周期的進展，抵消腺病毒癌蛋白E1A 的有絲分裂活性[13]。目前表觀遺傳學藥物的研究取得了巨大的進步，有些藥物已應用于臨床并取得較好的療效。Mazzà 等[14]研究發現，p300/CBP相關因子促進鋅指轉錄因子Gli1 的泛素化進而來抑制Hh 信號通路對DNA 損傷的反應，提示p300/CBP相關因子是Hh 信號通路依賴性腫瘤潛在的治療靶點。本研究結果顯示，宮頸癌組p300/CBP相關因子陽性表達率低于非宮頸癌組，并且隨著宮頸癌的腫瘤分期及病理分級增高，p300/CBP相關因子蛋白的陽性表達率顯著降低（P＜0.05），提示p300/CBP相關因子可能是一個潛在預測宮頸癌患者預后的分子標志物。本研究又為宮頸癌的個性化治療提供一個新的方向。

本研究結果顯示，Survivin蛋白和p300/CBP相關因子兩種蛋白在宮頸癌中的表達密切相關，提示這兩種蛋白可能共同參與了宮頸癌的發生發展過程，并在局部的浸潤和局部或遠處的轉移中發揮協同作用。p53、Fas 等細胞凋亡基因可被高表達的Survivin蛋白抑制，導致細胞的凋亡減少，促進腫瘤的無限增殖。Adamkov 等[15]研究發現p53 蛋白的過度表達可抑制基底細胞癌細胞中Survivin蛋白的表達及其抗凋亡活性。另有研究發現宮頸癌組織中Survivin 的表達與p53 和Bcl-2 蛋白的異常表達密切相關[16]。p300/CBP相關因子是抑癌基因p53 的共激活子，其影響細胞分化、凋亡與腫瘤形成的原理是通過調節p53 的活性及其蛋白的穩定性來使細胞周期停滯和細胞凋亡[17]。由此說明Survivin蛋白和p300/CBP相關因子這兩種蛋白可能通過p53 基因在宮頸癌的發生發展中存在著千絲萬縷的聯系，具體機制有待于進一步研究。

綜上所述，宮頸癌的發生是多個基因共同作用的復雜過程。本研究證明隨著宮頸癌的臨床分期和組織學分級的增高，Survivin蛋白的陽性表達率逐漸增高而p300/CBP相關因子的陽性表達率逐漸降低，并且兩種蛋白之間存在密切的關聯性。這一結果為宮頸癌的預后判斷提供新的分子標志物，給宮頸癌的精準治療提供了新思路和新方法。