水蛭超微粉調節兔肝臟脂代謝相關酶活性研究

趙耀光，王留

水蛭超微粉調節兔肝臟脂代謝相關酶活性研究

趙耀光，王留

（商丘職業技術學院，河南 商丘 476100）

應用試劑盒檢測添加0.05 %、0.10 %、0.15 % 水蛭超微粉的高脂飼料喂養兔血液、肝臟組織上清液乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、羥甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMGCR）、膽固醇7 α羥化酶（CYP7A1）的活性，研究水蛭超微粉對兔肝臟脂代謝相關酶活性的調節作用。結果表明，0.15 % 水蛭超微粉能夠顯著降低高脂飼料喂養兔ACC、FAS、HMGCR活性，顯著提高（P<0.05）高脂飼料喂養兔CYP7A1活性。

水蛭，中藥超微粉；高脂飼糧；脂代謝；酶活性

脂代謝是指脂類在生物有機體內的消化、吸收、遠轉、分解、轉化、排泄等一系列生物轉化過程，是機體的基本代謝活動之一，對機體血脂平衡和體脂沉積有重要的調節作用。脂代謝過程在脂代謝相關酶的作用下進行，脂代謝相關酶活性增強或降低會造成脂代謝紊亂，引起機體血脂的異常和體脂的過度沉積，引發代謝障礙綜合性疾病，如內分泌失調、動脈粥樣硬化性心血管疾病、肝功能障礙、神經功能紊亂等。臨床應用活血化瘀類中藥調節脂代謝是治療脂代謝障礙綜合性疾病的主要方法之一。水蛭超微粉是中藥水蛭飲片經超微粉碎處理加工而成的一種粉狀中藥散劑，具有活血化瘀、舒肝通經、消腫止痛等功效。試驗研究表明，水蛭超微粉能夠調節高脂飲食誘導的兔血脂水平，提高機體的抗氧化功能，顯著改善高脂飲食引起的血液流變學變化，恢復血液的正常流動性[1-2]。本研究以大耳白兔為試驗動物，研究在高脂配方日糧飼喂條件下，添加不同劑量的水蛭超微粉對脂代謝相關酶活性的影響，探索水蛭超微粉降血脂和調節脂代謝作用的機理，為水蛭超微粉新型制劑的開發與利用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗動物分組與處理

50只3月齡健康大耳白兔在動物飼養室適應性飼養7 d后，隨機分成5組，每組10只。正常對照組飼喂基礎日糧，高脂對照組飼喂高脂配方日糧，水蛭超微粉低、中、高劑量組分別飼喂添加0.05 %、0.10 %、0.15 % 水蛭超微粉的高脂配方日糧。試驗期40 d，試驗期內每天觀察兔的飲食情況和發病情況。

1.2 水蛭超微粉的制備

中藥水蛭超微粉由課題組自制，制備方法詳見參考文獻[1]。

1.3 樣本的采集及處理

1.3.1 血清樣品制備 試驗期結束后，每組隨機抽取試驗兔5只，心臟采血分離血清，-20 ℃ 保存備用。

1.3.2 肝組織上清液制備 試驗兔采血后，頸椎脫位致死，迅速打開腹腔切取肝臟組織0.5 g，用冷的生理鹽水沖洗肝臟組織并用濾紙吸干表面殘留液體，加入預冷的滅菌生理鹽水5 ml，冰浴中勻漿處理，勻漿液以2000 r/min冷凍離心10 min，取上清液-20 ℃ 凍存。

1.4 檢測指標及方法

血清和肝臟組上清液乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、羥甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMGCR）、膽固醇7 α羥化酶（CYP7A1）活性檢測采用試劑盒進行檢測，試劑盒購于南京建成生物工程公司。

1.5 數據分析

試驗數據采用“平均值±標準差”表示，用SPSS 20.0統計分析軟件進行單因素方差分析，P＜0.05為差異顯著。

2 結果與分析

2.1 水蛭超微粉對兔血清脂代謝相關酶活性的影響

由表1可知：高脂對照組兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性與正常對照組相比均差異顯著（P＜0.05），HMGCR酶活性與正常對照組相比均差異不顯著（P＞0.05）。0.05 % 劑量組兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性與正常對照組相比均差異顯著（P＜0.05），與高脂對照組相比均差異不顯著（P＞0.05）；HMGCR酶活性與正常對照組、高脂對照組相比均差異不顯著（P＞0.05）。0.10 % 劑量組兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性與正常對照組相比均差異顯著（P＜0.05），與高脂對照組相比均差異不顯著（P＞0.05）；HMGCR酶活性與正常對照組、高脂對照組相比均差異顯著（P＜0.05）。0.15 % 劑量組兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性與正常對照組相比均差異不顯著（P＞0.05），與高脂對照組相比均差異顯著（P＜0.05）；HMGCR酶活性與正常對照組、高脂對照組相比均差異顯著（P＜0.05）。

2.2 水蛭超微粉對兔肝臟脂代謝相關酶活性的影響

由表2可知：高脂對照組兔血清ACC、FAS、HMGCR、CYP7A1酶活性與正常對照組相比均差異顯著（P＜0.05）。0.05%劑量組兔血清ACC、FAS、HMGCR、CYP7A1酶活性與正常對照組相比均差異顯著（P＜0.05），與高脂對照組相比均差異不顯著（P＞0.05）。0.10 % 劑量組兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性與正常對照組相比均差異顯著（P＜0.05），與高脂對照組相比均差異不顯著（P＞0.05）；HMGCR酶活性與正常對照組比均差異不顯著（P＞0.05），與高脂對照組相比均差異顯著（P＜0.05）。0.15 % 劑量組兔血清ACC、FAS、HMGCR、CYP7A1酶活性與正常對照組相比均差異不顯著（P＞0.05），與高脂對照組相比均差異顯著（P＜0.05）。

表1 兔血清脂代謝相關酶活性檢測結果

注：同行數據肩標小寫字母不同表示差異顯著（P＜0.05）；字母相同表示差異不顯著（P＞0.05）。下表同

表2 兔肝臟脂代謝相關酶活性檢測結果

3 討論與結論

3.1 水蛭超微粉對兔ACC酶活性的影響

乙酰輔酶A羧化酶（ACC）催化乙酰輔酶A產生丙二酸單酰輔酶A，丙二酸單酰輔酶A在脂肪酸合成酶的作用下合成脂肪酸[3]。乙酰輔酶A羧化酶活性增強時會引起動物血液和肝臟內脂肪合成量增多，增加高脂血癥和脂肪肝的發病概率。本試驗顯示，在飼糧中添加0.15 % 劑量的水蛭超微粉能夠顯著降低高脂飲食兔血清和肝臟內ACC活性。

3.2 水蛭超微粉對兔FAS酶活性的影響

脂肪酸合成酶（FAS）是催化乙酰輔酶A和丙二酸單酰輔酶A生成長鏈脂肪酸，長鏈脂肪酸與甘油發生酯化反應生成甘油三酯，脂肪酸合成酶的活性決定了甘油三酯的合成速度。甘油三酯是動物血脂和體脂的主要成分，當脂肪酸合成酶活性增強時，動物機體內甘油三酯合成量增加，導致動物血脂含量升高引發高脂血癥，或體脂過度沉積引發肥胖[3]。劉作華等[4]研究表明，提高豬日糧的能量水平能夠顯著提高豬肌肉組織、肝臟組織、脂肪組織內脂肪酸合成酶的活性，使動物體內脂肪的合成能力提高，體脂沉積增加。本試驗結果證實，在飼糧中添加0.15 % 劑量的水蛭超微粉能夠顯著降低高脂飲食兔血清和肝臟內FAS活性。

3.3 水蛭超微粉對兔HMGCR酶活性的影響

羥甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMGCR）催化肝臟膽固醇的合成，調節HMGCR的活性可以維持機體血清膽固醇代謝的平衡。飼料中膽固醇和脂肪的含量可以影響HMGCR活性[5]梁婧婧等[6]試驗發現，飼糧中添加甘薯糖蛋白能夠競爭性抑制羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶活性，減少膽固醇的生成。陳詠然等[7]試驗表明，添加50 mg/kg染料木黃酮可顯著降低高能日糧喂養肉雞肝臟羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶的活性。本試驗發現，飼糧中添加0.1 % ~ 0.15 % 水蛭超微粉能夠顯著降低高脂飲食兔血液和肝臟HMGCR活性。

3.4 水蛭超微粉對兔CYP7A1酶活性的影響

膽固醇7 α羥化酶（CYP7A1）調節體內膽固醇和膽汁酸的代謝，增強CYP7A1活性可以促進肝臟內膽固醇轉化為膽汁酸，促進體內膽固醇的排出，所以調節CYP7A1活性是調節機體膽固醇代謝的重要途徑[8]。李瑞[5]研究顯示，乳桿菌能夠顯著提高育肥豬肝臟中CYP7A1活性。王先科[9]試驗結果表明，每天給高脂飼喂的SD大鼠灌服苜蓿皂苷150~240 mg·kg-1體重，能夠極顯著提高大鼠肝臟CYP7A1活性。本試驗研究發現，0.15 % 水蛭超微粉能夠顯著增強高脂飲食兔血液和肝臟CYP7A1活性。

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[2] 王志剛, 劉秀玲, 王留. 中藥水蛭超微粉對大耳白兔抗氧化功能和血液流變學的影響[J]. 黑龍江畜牧獸醫, 2018（22）: 182-184.

[3] 單安山, 徐奇友. 動物脂肪代謝與調控[J]. 東北農業大學學報, 2004, 35（2）: 129-134.

[4] 劉作華, 陳代文, 龍定彪, 等. 日糧能量水平對豬脂肪酸合成酶和激素敏感酯酶的影響[J]. 中國畜牧雜志, 2009, 45（5）: 31-33.

[5] 李瑞. 德氏乳桿菌對育肥豬膽固醇代謝的影響研究[D].長沙: 湖南農業大學, 2014.

[6] 梁婧婧, 蘇錫輝, 孟憲軍, 等. 甘薯水溶性糖蛋白對大鼠脂肪肝及羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶的影響[J]. 食品科技, 2013, 38（8）: 95-97.

[7] 陳詠然, 張明, 田寧, 等. 染料木黃酮對高能日糧肉雞膽固醇代謝的影響[J]. 中國畜牧雜志, 2018, 54（2）: 93-98.

[8] 張夢娜. D-松醇對高血脂倉鼠膽固醇代謝的影響[D]. 天津: 天津科技大學, 2017.

[9] 王先科. 苜蓿皂苷調節大鼠膽固醇代謝的機制研究[D].鄭州: 河南農業大學, 2011.

S853.72

A

1007-1733（2021）01-0017-03

河南省高等學校重點科研項目（20B230008）

（2020–10–05）