牛至混懸劑對雞體內外抗氧化性研究

馬建民，段素云，劉瑩，郭彤

牛至混懸劑對雞體內外抗氧化性研究

馬建民，段素云，劉瑩，郭彤*

（北京農業職業學院畜牧獸醫系，北京 102442）

為了研究牛至1 % β-環糊精混懸劑的抗氧化活性，試驗牛至1 % β-環糊精混懸劑和甲醇提取液對ABTS自由基的體外清除能力，并以40日齡散養北京柴雞為研究對象，以牛至1 % β-環糊精混懸劑為添加劑，研究牛至1 % β-環糊精混懸劑對北京柴雞血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的影響。結果表明：牛至1 % β-環糊精混懸劑和甲醇提取液對ABTS自由基的清除能力IC50值分別為0.124 mg/ml和0.157 mg/ml，無顯著差異；牛至混懸劑能極顯著提高北京柴雞血清中的SOD（P<0.01）活性和降低MDA含量（P<0.01）。說明牛至1 % β-環糊精混懸劑在雞體內外均表現出抗氧化活性，可以作為抗氧化添加劑在家禽養殖中推廣和使用。

牛至；抗氧化；北京柴雞；2,2-聯氮基-雙-二氨鹽；超氧化物歧化酶；丙二醛

家禽生產過程中，可能會由于飼糧中存在的問題，如溫度、光照和通風不足、腸道菌群的失衡、飼用抗生素的濫用及細菌或病毒感染等因素產生氧化應激，并因此受到不同程度的氧化損傷[1]。氧化應激是動物體內存在的過氧化物和自由基數量超過了其抗氧化能力。在氧應激中家禽激活機體復雜的調節機制，消耗了自身生長或生產所需要的大量能量來防御氧化損傷，這將導致家禽養殖成本的增加，生產性能或產品品質下降。為了提高機體抗氧化能力，在家禽飼糧中添加抗氧化物質是重要的有效緩解氧化應激損傷的手段之一[2]。

牛至有效成分牛至精油被證實具有較強的抗氧化活性[3]，能促進家禽生產[4-5]。生產牛至精油類產品，可使用超臨界流體進行提取[6]，然后進行包膜處理[7-9]，工藝復雜，成本高，主要原因為牛至精油不溶于水，易容于有機溶劑，很難用水浸出。林霜霜[10]研究顯示牛至水提取物抗氧化能力低于有機溶劑提取物。也有相反的結論，早克然·司馬義[11]研究牛至水提取物比醇提取物具有顯著的體外清除自由基能力。可能的解釋是，牛至中即含有水溶性和也含精油類脂溶性抗氧化成分。β-環糊精具有“內親油，外親水”的空腔結構，具有促進植物中非極性小分子的溶出作用[12]。把牛至粉浸泡于1 % β-環糊精水溶液中，制成牛至1 % β-環糊精混懸劑，通過體外和體內實驗，評測牛至1 % β-環糊精混懸劑抗氧化能力，為牛至產品的開發提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 2020年9月9日至2020年10月14日，在北京王家磨養殖場選擇160只40日齡北京柴雞。

1.1.2 藥品 牛至，購自玉林市玉州區菩提藥源食品經營部。

1.1.3 主要試劑 2,2-聯氮基-雙-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨鹽（ABTS）、甲醇（分析純），均購自國藥集團化學試劑有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測試劑盒、丙二醛（MDA）含量檢測試劑盒，均購自北京索萊寶科技有限公司。

1.1.4 主要儀器 分級超細連續式水冷粉碎機（DLF-555），購自溫州頂歷醫療器械有限公司；超聲清洗機（KQ-500DV），購自昆山市超聲儀器有限公司；高速離心機（GT10-1），購自北京時代北利離心機有限公司；多功能酶標儀（Spectra Max i3X），購自美谷分子儀器（上海）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 牛至混懸劑的制備 將牛至干燥，粉碎，過100目篩，得牛至粉。精確稱取牛至粉末20 g，置玻璃瓶中，量取500 ml 1 % β-環糊精溶液，密封，40 ℃超聲40 min，210 ℃滅菌20 min，得牛至混懸劑。

1.2.2 牛至甲醇提取液 精確稱取牛至粉0.20 g，置離心管中，量取甲醇5 ml，密封，40 ℃ 超聲40 min，離心取上清液，得牛至甲醇提取液。

1.2.3 體外抗氧化能力 供試品溶液的制備：分別精密量取牛至混懸劑和甲醇提取液1 ml，置10 ml容量瓶中，用甲醇定容，混勻，取適量10 000 r/min離心10 min，得供試品溶液。ABTS自由基溶液配制：精密稱取ABTS試劑200 mg，用蒸餾水定容至50 ml容量瓶中，再精密稱取35 mg過硫酸鉀，用蒸餾水定容至50 ml容量瓶中，搖勻后與ABTS水溶液混合，在室溫黑暗處反應12~16 ｈ，得ABTS自由基儲備液。再用甲醇稀釋ABTS自由基儲備液，使其在734 nm吸光度值為0.90±0.02，即得ABTS自由基溶液。依次吸取0、2、4、8、16、32 μl供試品溶液置96孔板中，依次加入甲醇70、68、62、54、38 μl，混勻，分別加入ABTS自由基溶液140 μl，避光室溫，反應6 min，734 nm測定吸光值，平行3次。根據以下公式計算ABTS自由基清除率，并計算出半數抑制率IC50值。

式中：I為供試品溶液對ABTS自由基的清除率；A0為ABTS自由基空白對照的吸光度值；AS為供試品溶液與ABTS自由基反應后的吸光度值。

1.2.4 試驗動物分組與給藥 北京柴雞按體重隨機分為對照組和試驗組，每組兩個重復，每個重復40只北京柴雞。每組北京柴雞置50 m2欄中散養。對照組飼喂基礎飼糧，參照NRC（1994）蛋雞的營養需要配制，試驗組每0.6 kg基礎飼糧添加100 ml牛至混懸劑，進行拌飼給藥。試驗期間動物自由采食和飲水。試驗為期35 d，其中前7 d為預試期，各組均飼喂基礎飼糧，正試期28 d，按組別飼喂各組飼糧。

1.2.5 血清中SOD活性檢測和MDA含量測定 在正試期的第28 d從各重復中選取5只試驗北京柴雞，翅下靜脈采血3 ml，靜置1 h后于4 000 r/min離心10 min，分離血清，采用試劑盒法測定血清MDA含量和SOD活性。

1.2.6 統計學分析 采用SPSS21.0軟件對試驗數據進行統計分析，試驗數據以“平均值±標準差”表示，采用t檢驗對實驗結果進行差異顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 牛至混懸劑清除ABTS自由基的能力

ABTS在過硫酸鉀作用下被氧化成綠色的ABTS自由基，抗氧化物抑制ABTS自由基的產生，使得綠色變淡，因此在734 nm處測量加入抗氧化物質前后ABTS自由基的吸光度值變化，可以計算出樣品的總抗氧化能力。牛至混懸劑和甲醇提取液對ABTS自由基的清除能力結果見表1。

表1 供試品溶液對ABTS自由基的清除能力

在測量范圍內，隨著牛至混懸劑和甲醇提取液濃度的增加，對ABTS自由基的清除能力都呈現出對數增加，半數抑制率IC50分別為0.124 mg/ ml和0.157 mg/ml。牛至混懸液對ABTS自由基的清除能力略高于牛至甲醇提取液，但統計學檢測差異不顯著。

2.2 牛至混懸劑對北京柴雞血清抗氧化指標的影響

表2 牛至混懸劑對北京柴雞血清抗氧化指標的影響

注：同列數據進行比較，大寫字母完全不同表示差異極顯著（P＜0.01）

由表2可知，與對照組相比，飼糧添加牛至混懸劑極顯著降低北京柴雞血清MDA含量和極顯著提高血清SOD活性。

3 討論

3.1 牛至混懸劑雞體外抗氧化能力

牛至混懸劑對ABTS自由基的清除能力高于牛至甲醇提取液。β-環糊精促進了牛至中揮發油成分的溶出，提高了水溶液的抗氧化水平。

3.2 牛至混懸劑雞體內抗氧化能力

生物體內，氧化應激過程中產生的自由基作用于脂質發生過氧化反應，其氧化終產物MDA，會引起蛋白質、核酸等生命大分子的交聯聚合，且具有細胞毒性。MDA含量是反映機體抗氧化潛在能力的重要參數，可以反映機體脂質過氧化速率和強度，也能間接反映組織過氧化損傷程度。SOD是機體代謝所產生內源性抗氧化酶，清除機體產生的自由基，活性高低可反應機體抗氧化的防御能力。北京柴雞用牛至混懸劑按照每0.6 kg飼糧添加100 ml懸液，進行拌飼給藥能及顯著提高血清中SOD活性和降低MDA含量，具有良好的抗氧化應激作用。

4 結論

牛至混懸劑制備簡單，體外抗氧化活性高于牛至甲醇提取物，能極顯著增加家禽抗氧防御能力，減少家禽的氧化應激損傷。可以作為植物抗氧化制劑在畜牧養殖中進行推廣。

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*通訊作者

（2020–10–28）

S816.76

A

1007-1733（2021）01-0014-03