醫院制劑復方苦參合劑對小鼠急性毒性實驗研究

朱 鳳，劉與進，吳 慧，楚 思，范 恒

(華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院，湖北 武漢 430022)

潰瘍性結腸炎是一種反復發作的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，臨床表現主要為腹痛、腹瀉、黏液膿血便，纏綿難愈，嚴重影響患者日常工作和生活[1]。該病西藥治療效果有限，且長期治療多伴有嚴重副作用。復方苦參合劑是由華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院中醫科研制的能有效治療潰瘍性結腸炎的院內制劑，具有清熱解毒、涼血燥濕的功效，臨床研究數據表明中西醫結合治療潰瘍性結腸炎的效果明顯優于單純西藥治療[2]，可以顯著改善患者生活質量。雖然與西藥相比，中藥復方具有毒副作用小、價格便宜的優點。但是，近年來隨著對中藥及其制劑的廣泛應用和毒性研究的深入，某些補益中藥和許多被認為無毒的中藥也被證實具有一定的毒副作用[3]。本研究依據《中藥、天然藥物急性毒性研究指導原則》的要求[4]，探討了復方苦參合劑灌胃給藥對小鼠的急性毒性，報告如下。

1 材料與試劑

1.1 實驗藥物

復方苦參合劑濃縮液：由湖北省中醫院藥劑科提供，批號：20181023。復方苦參合劑組成：苦參300 g、地榆炭300 g、白及200 g、青黛60 g、甘草200 g、三七粉60 g，加水煎煮2次，濃縮至800 mL，無菌分裝4瓶，藥物濃度為1.40 g/mL，成人每日用量為56 g生藥/60 kg。

1.2 實驗動物

4～5周(18～22 g)SPF級昆明(KM)小鼠60只，雌雄各半，由華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心提供，合格證編號為SCXK(鄂)2016-0009。實驗環境為華中科技大學實驗動物中心，室溫：(22±3)℃，相對濕度：55%～60%，無對流風，人工晝夜(12 h白晝、12 h黑夜)。適應性喂養1周后開始實驗。

2 實驗方法

2.1 預實驗

正式實驗開始前先進行預實驗，取SPF級KM小鼠20只，隨機分為2組，每組10只，雌雄各半。分為實驗組1、實驗組2。分別予以1.40 g/mL(可供灌胃最大濃度)、0.70 g/mL復方苦參合劑灌胃。灌胃體積均為0.4 mL/10 g(小鼠一次可承受的最大給藥容積)，24 h內給藥2次，給藥后觀察小鼠外觀、活動、飲食均無明顯變化，連續觀察7天，小鼠無毒性反應及死亡。因復方苦參合劑毒性低，動物灌胃給藥受藥物濃度和體積限制，測定不出LD50，故正式實驗進行最大給藥量實驗。

2.2 正式實驗(最大給藥量實驗)

取SPF級KM小鼠40只，隨機分為2組，每組20只，雌雄各半，分為正常對照組和實驗組。正常對照組予以生理鹽水，按0.4 mL/10 g灌胃；實驗組予以等體積1.40 g/mL復方苦參合劑灌胃。

2.3 給藥方法及觀察指標

給藥前小鼠禁食不禁水12 h，實驗當天實驗組和對照組分別灌胃給予濃度為1.40 g/mL的復方苦參合劑和生理鹽水，灌胃體積為0.4 mL/10g，24 h內給藥2次，間隔期間不進食，第二次給藥2 h后恢復正常飲食，觀察并記錄給藥后30 min、2 h及其后14 d小鼠毛發色澤、活動、飲食、排泄物、體質量變化、毒性反應及死亡數。若有死亡小鼠，立即解剖，觀察其內臟病理變化，若存在肉眼可見的異常變化則進行病理學檢查。所有小鼠于實驗第15天脫頸處死，解剖心肝脾肺腎結腸并觀察病理變化，每組各取雌雄小鼠一只，內臟組織標本經甲醛固定、石蠟包埋、切片、HE染色后，光鏡下觀察藥物對各臟器的影響。

2.4 統計學方法

3 實驗結果

3.1 各組小鼠死亡率及一般情況變化

實驗14 d內兩組小鼠死亡率(見表1)及臨床變化如下：實驗組及正常對照組小鼠在兩次灌胃30 min內活動稍減緩，飲食稍減少，精神狀態、毛發色澤、排泄物等均正常，2 h后活動自如、飲食正常，口鼻無異常分泌物，無毒性反應，連續觀察14天，動物一般情況良好，活動自如，皮毛光滑，飲食及二便未見明顯異常。無死亡小鼠，實驗結束后處死所有小鼠，大體解剖肉眼觀察小鼠心、肝、脾、肺、腎、結腸等主要臟器無明顯異常變化。

表1 小鼠死亡情況

3.2 各組小鼠體質量變化

灌胃復方苦參合劑及生理鹽水后，連續觀察并記錄14 d小鼠體質量變化情況(見表2及圖1)。實驗結果表明，兩組小鼠在給藥后體質量均較前增加，給藥后實驗組小鼠體質量增長與正常對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

表2 復方苦參合劑急性毒性實驗對小鼠體質量的影響

圖1 給藥后小鼠體質量變化情況

3.3 各組小鼠內臟組織病理學變化

兩組小鼠心、肝、脾、肺、腎及結腸組織病理染色結果見圖2。兩組小鼠結腸組織黏膜完整，腺體排列整齊，可見杯狀細胞；心臟組織心肌纖維呈不規則短圓柱狀，心肌細胞排列有序；肝臟細胞形態正常，排列緊密，肝小葉結構正常；脾組織形態正常，無瘀血、梗死等特征；肺組織肺泡間隔正常，結構清晰；腎組織結構正常，兩組各個臟器均無明顯炎性細胞浸潤、纖維化等病理變化。小鼠實驗組和正常對照組比較無顯著性差異。

注：A、C、E、G、M、Q為實驗組的結腸、心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟病理染色結果；

4 討論

急性毒性實驗是一次給予實驗動物某種受試物后，觀察藥物在短時間內對實驗動物所產生的毒性反應的試驗方法[5]。復方苦參合劑成人每日臨床給藥劑量為56 g/60 kg，小鼠灌胃一次最大給藥量為3 360 g/60 kg，本研究對小鼠進行急性毒性實驗，以最高濃度1.40 g/mL每日灌胃給藥2次(相當于臨床劑量的120倍)，連續觀察14天，未見動物出現毒性反應，因此本品小鼠灌胃最大耐受劑量大于3 360 g/60 kg。一般認為，按體質量計算，小鼠1天內最大給藥量相當于成人臨床日用量的100倍以上較為安全[6]。該實驗表明復方苦參合劑在最大給藥量時對小鼠內臟無急性毒副作用，故臨床擬用灌胃劑量是安全的。