六神曲炮制及現代研究進展

尹 磊，朱月健，李冬梅，段體斌，葛德助

(1.安徽普仁中藥飲片有限公司，安徽 亳州 236800；2.中藥提取安徽省技術創新中心，安徽 亳州 236800；3.安徽濟人藥業有限公司，安徽 亳州 236800)

六神曲為面粉(麥粉)和其他藥物混合后，經發酵而成的加工品，其一般制法為取面粉(麥粉)，與杏仁、赤小豆以及青蒿、蒼耳、辣蓼汁或煎煮液混合均勻后發酵、切丁、干燥而成，其性溫，味甘、辛，歸脾、胃經，具有健脾和胃、消食調中等功效[1]。六神曲臨床應用廣泛，但主要化學成分尚不清晰，各省地方炮制規范和標準也具有一定差異性，歷版中國藥典至今未收載該品[2]。本研究主要對六神曲的古代文獻記載內容以及現代炮制工藝、化學成分、藥理作用和質量標準等文獻資料進行綜述分析，為制定統一的炮制加工標準提供參考。

1 六神曲炮制工藝歷史沿革

1.1 古代炮制工藝

“曲”最早載于南北朝《雷公炮炙論》：“曲，凡使，搗作末后，掘地坑深二尺，用物裹，內坑中至一宿，明出，焙干用。”根據歷代古籍記載，最早在宋代已記載“六神曲陳久者良，炒用”，雖然各個朝代所記載的炮制方法和組分比較相似，但其配方物料比例和發酵方法出入很大。具體內容見表1。

表1 六神曲古代炮制工藝

續表1

通過對歷代古籍的搜集整理發現，不同朝代的制曲工藝都不盡相同，元代制神曲是用白面、生姜等，組方較少比較單一；到了明代則用白面、青蒿、赤小豆、杏仁、蒼耳、野蓼等，雖然制曲的工藝各有出入，但其基本組方物料種類已和現代六神曲組方物料種類基本相同，并且發酵時間和發酵溫度均提出在六月進行高溫發酵，至表面生黃白衣，與當前發酵條件、發酵終點判斷類似。

1.2 現代各省地方炮制方法

六神曲是發酵類中藥的代表之一，各個地區的炮制工藝和標準不盡相同。北方地區多使用面粉，而南方地區麥麩用量較大，各原料比例也不同[3]，且包括辣蓼、青蒿和蒼耳草鮮藥與干品，直接榨汁和煎煮取汁混勻發酵，赤小豆與苦杏仁煮熟后發酵與生品粉碎直接發酵等。具體情況，見表2。

表2 六神曲現代炮制工藝

通過對各省份炮制標準的對比，發現各省標準規范中六神曲的組方雖有一定區別，但均主要由面粉(麥麩)、赤豆、苦杏仁和青蒿、蒼耳草、辣蓼組成。主要區別在于物料的鮮用與干用以及赤小豆、苦杏仁的生熟制用及軟材發酵形態等，浙江省制定的炮制規范15版限定單一發酵菌種，生產的成品相對品質穩定。同時根據以上炮制工藝方法記載，很多工藝方法較為簡單，且不適合飲片企業大規模生產，需要進一步的優化。

2 六神曲現代研究

2.1 炮制工藝研究

目前六神曲的炮制用料種類基本固定，工藝相關的研究主要集中在物料配比、發酵條件和發酵菌種研究等。高慧[4]比較蒼耳草、辣蓼與青蒿鮮品、干品以及直接干品粉碎投料發酵后成品的色譜圖和酶活性，發現三種結果沒有顯著性差異，同時也比較了苦杏仁生品和煮后拌料發酵薄層圖和酶活性，二者之間也沒有顯著性差異。程亦雄[5]通過篩選單一純化菌種賽氏曲霉進行六神曲深層次液態發酵研究，并確定其工藝：面粉麥麩量12 g(比例為1∶6)，苦杏仁與赤小豆各0.48 g，青蒿、蒼耳草、辣蓼各0.28 g，KH2PO40.20 g，150 mL清水混勻，發酵溫度28 ℃，搖床轉速180 r/min，發酵7 d，濃縮干燥。賈丹丹[6]通過分析六神曲發酵過程中的微生物種類，發現其呈現先上升后下降的趨勢，并且最終分離鑒別的菌種包括細菌、真菌和酵母菌，對于六神曲物料的耐受性較強且均產生酶解活性，該項發現也證實了六神曲發酵時混合菌種的共同作用。相較于傳統發酵工藝，當前關于六神曲的炮制工藝逐步延伸到單一菌種發酵或優勢種群發酵，規范物料組方配比和發酵條件逐步固定，形成的產品質量也不斷提升和可控。

2.2 化學成分研究

有關六神曲化學成分的研究較少，并且其發酵物料種類較多，發酵過程中的內在成分轉化也較為復雜。練晶軍[7]研究發現六神曲主要成分為揮發油、維生素B族、麥角固醇、苷類、淀粉酶和蛋白酶等。陳繽[8]分析發現，神曲發酵后青篙素和苦杏仁普色譜峰均消失，推測其在發酵過程中成分結構發生轉化，并分離到發酵后新化合物，初步推斷為十八碳烯酸。王麗芳等[9]比較分析六神曲發酵過程中使用青蒿等鮮品與干品的藥效物質，結果顯示鮮品組發酵槲皮苷等成分均顯著高于基本組及干品組。張慧茹等[10]從六神曲氯仿提取物中分離得到11個長鏈烯酸類化合物，其中部分化合物具有抗炎活性。徐云等[11]通過分析六神曲發酵過程中多種消化酶活性動態變化，發現糖化酶、淀粉酶、纖維素酶、脂肪酶在發酵4天后達到高峰，隨后逐步穩定，蛋白酶在發酵前4天變化不大，隨后逐步增加并穩定。練晶軍[7]分析發現，市場上六神曲淀粉酶活性及指紋圖譜等均顯示出較大差異，通過分析發酵過程中淀粉酶活性和指紋圖譜變化，發現淀粉酶活性隨著發酵時間延長而增加，并于7天后趨于穩定，指紋圖譜顯示信息組成在發酵3天后基本穩定。綜上所示，六神曲作為多組分藥物發酵品，其成分較為復雜，且發酵前后變化較大，并產生新化合物，需要對其發酵過程進一步分析，以明確其能夠反映六神曲發酵程度的優劣。

2.3 藥理作用研究

作為健胃消食要藥，六神曲自古代即被臨床使用，尤善消米面食。張紅玲等[12]分析食積小鼠灌服六神曲后的胃泌素、膽堿酯酶以及血清中NO等的含量變化，發現小鼠胃泌素、膽堿酯酶的分泌增加，血清中NO的含量降低。王秋紅等[13]研究麩炒六神曲乙酸乙酯提取部位的抗菌效果，發現最低抑菌濃度為0.64 g·L-1，最低殺菌濃度為0.65 g·L-1。郭麗雙等[14]通過實驗研究，破壞小鼠腸道微生物菌群，形成腸道組織潰瘍，并灌服六神曲液，以自然恢復為對照，結果發現實驗組腸道潰瘍恢復速度較快，也證實了六神曲對于小鼠腸道潰瘍的修復作用。劉峰等[15]通過分析六神曲對大鼠腸平滑肌收縮作用，發現六神曲能夠增強對大鼠腸平滑肌的收縮作用。莊彥華等[16]通過比較患有腸易激綜合征(IBS)患者服用六神曲煎液前后糞便乳酸桿菌和雙歧桿菌以及腸桿菌的數量變化，結果顯示服藥后患者糞便中有益菌群數量增加，腸桿菌的生長受到抑制。六神曲中含有豐富的消化酶，發酵過程中因特種微生物或微生物群分解發酵基質產生淀粉酶、蛋白酶等，進而達到健胃消食的作用。

2.4 質量標準研究

現有各省地方炮制規范關于六神曲的質量標準多是性狀描述，部分增加了顯微鑒別，對于六神曲發酵層度的優劣性無法評價。而文獻資料針對六神曲的成分含量測定、指紋圖譜以及酶活性等質量控制已有大量記載，尤其酶活性的檢測更能反映出其臨床療效。黃國能[17]研究發現消化酶是曲劑發酵過程中的代謝產物和重要的藥效物質，其含量變化可作為判斷質量優劣的標準。王云庭等[18]以麥芽低聚糖酶的活力作為分析評價指標，考察不同產地、不同樣品六神曲的品質差異。王麗芳等[9]比較各組六神曲樣品間發酵前后化學成分的差異，建立15個共有指紋峰，確定槲皮苷、木犀草素、槲皮素3種成分并檢測其含量，以槲皮素為參照峰，計算15個共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，能夠有效反映出六神曲的質量。謝彥博[19]對六神曲HPLC指紋圖譜進行研究，結果發現根據組方物料中有效峰的數量，可以在配方中調整物料的配比，通過加大蒼耳草和青蒿的比重，可有效調節六神曲的產品質量。朱德全等[20]研究發現利用六神曲的乙醇提取物的紅外光譜鑒別能快速鑒別六神曲飲片，并用于指導六神曲的真偽鑒別工藝，可以有效控制六神曲的質量。

3 結語

綜上所述，六神曲主要包括面粉(麥麩)、杏仁、赤小豆和蒼耳草、辣蓼、青蒿六種物料，但各地配比和發酵方式有所差異，北方地區發酵基質多采用面粉，南方多采用麥麩與面粉混合物，對于杏仁和赤小豆，處理方式多采用粉碎后直接混合發酵，蒼耳草等三種草藥鮮品榨汁與干品煎煮對于六神曲質量影響不大，對于發酵時間多以發酵7天左右為優，其酶活性和指紋圖譜等也均趨于穩定；同時對于發酵菌種目前多采用自然發酵，部分省市采用單一米曲霉孢子發酵，成品質量也符合傳統要求，并且對于發酵菌種或菌群的分離鑒別也先后分離出多種菌種，包括細菌、真菌、酵母菌等，類似傳統發酵技術，考慮是否能夠采用六神曲自然干燥后的成品進行優勢菌種群進行后期添加發酵，一方面逐步純化優勢菌種群，便于企業內菌種的不斷繁殖、保存，并且也能夠確保菌種群同時起到發酵作用，提升成品質量；最后對于發酵方式目前主要分為物料混勻整體發酵后切丁和制丁后發酵，結合目前行業生產實際，制丁后發酵便于行業規模化生產且發酵程度較整體發酵高。

通過比較六神曲傳統發酵工藝、當前研究文獻與行業實際，工業化和規模化生產需求迫切需要對當前生產水平進行轉變，其統一的炮制方法和標準也急需制定，以適應六神曲現代智能調控生產，提升其產能和質量的穩定性。