大豆異黃酮增強免疫作用的實驗研究

郭智慧

（開灤總醫(yī)院內分泌二科，河北 唐山 063001）

大豆異黃酮被稱為植物雌激素，屬于一種黃酮類化合物。近年研究發(fā)現(xiàn)大豆異黃酮通過調節(jié)體內雌激素水平對防治更年期婦女癥狀，骨質疏松，抑癌（胃癌、乳腺癌、肺癌和直腸癌等），心血管疾病，老年癡呆等多種病癥有改善作用[1-2]，而對其增免作用研究較少。本實驗對其增免作用做一研究，為后期上市推廣提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 受試物：

大豆異黃酮（純度為40%），生產(chǎn)企業(yè)為東明薈仁生物制品有限公司。

1.2 實驗動物：

清潔級昆明種小鼠，體重18～22g，由斯貝福（北京）實驗動物科技有限公司。實驗前適應性飼養(yǎng)一周。

1.3 分組及給藥：

將小鼠按體重隨機分為三批12個實驗組，每組10只。分別為對照組、高（30mg/kg·BW）、中（20mg/kg·BW）、低劑量組（10mg/kg·BW）。稱取大豆異黃酮，與蒸餾水混合均勻配成3mg/ml、2mg/ml、1mg/ml濃度的受試物溶液，實驗組給予相應受試物溶液，對照組灌胃等體積蒸餾水。灌胃體積均為10ml/kg·BW， 1次/d，連續(xù)30d。

1.4 方法

1.4.1 臟器/體重比值：給藥結束后，小鼠稱重，處死，取脾臟和胸腺，處理干凈臟器表面血污，并濾紙吸干，稱脾臟重和胸腺重量，計算臟器/體重比值。

1.4.2 脾淋巴細胞轉化試驗：小鼠脫頸椎處死后無菌取脾，研磨后制成脾細胞混懸液。用Hanks液將細胞懸液洗滌后離心，置于完全培養(yǎng)液中，將細胞濃度調整為3×106個/ml。每只小鼠脾細胞混懸液分兩孔加入到24孔培養(yǎng)板中，一孔做對照，一孔加ConA液，每孔1mL。置5%CO2，在37 ℃培養(yǎng)箱72 h。培養(yǎng)結束前4 h，每孔都吸去上清液0.7 ml，同時加入0.7 ml不含小牛血清的1640培養(yǎng)液，并加5m/mL MTT， 50μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。結束后，每1孔加1 ml酸性異丙醇，吹打均勻，至紫色結晶溶解完全。用酶標儀570nm處測光密度值（OD）。

1.4.3 測定NK細胞活性：小鼠脫頸椎處死后無菌取脾，研磨后制成脾細胞混懸液。調整脾細胞濃度到2×107個/ml，為效應細胞，傳代后的YAC-1細胞濃度調整到4×105個/ml，為靶細胞，二者比例50：1，加入96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)；將100μL靶細胞和1%NP40均加到最大釋放孔中，于37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)4h，每孔加入LDH基質液反應3min，后加入HCL溶液終止。酶標儀測定OD值。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計：

數(shù)據(jù)采用Spss軟件統(tǒng)計，以±s表示，P＜0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 對小鼠體重的影響：

經(jīng)口給予大豆異黃酮30d后，低、中、高三個劑量組與與對照組相比，小鼠體重無顯著性差異（P＞0.05），提示大豆異黃酮對小鼠體重無影響。

2.2 對小鼠臟器/體重比值的影響：

經(jīng)口給予大豆異黃酮30d后，與對照組相比，中、高劑量組的脾臟/體重比值與對照組相比明顯升高（P＜0.05），高劑量組的胸腺/體重比值與對照組相比明顯升高（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義。結果見表1。

表1 大豆異黃酮對小鼠臟器/體重比值的影響

2.3 對小鼠淋巴細胞增殖能力和NK細胞活性的影響：

經(jīng)口給予大豆異黃酮30d后，與對照組相比，中、高劑量兩個的組脾淋巴細胞增殖能力明顯提高，NK細胞活性率顯著增加（均P＜0.05）。結果見表2。

表2 小鼠脾淋巴細胞增殖能力和NK細胞活性指標結果（ ±s）

表2 小鼠脾淋巴細胞增殖能力和NK細胞活性指標結果（ ±s）

注：與對照組相比，*P＜0.05。

組別（n=10） 脾淋巴細胞的增殖能力 NK細胞轉化率（%）對照組 0.051±0.008 22.23±6.40低劑量組 0.062±0.005 26.54±5.13中劑量組 0.071±0.011* 30.36±5.03*高劑量組 0.082±0.014* 33.29±5.56*

3 討 論

脾臟和胸腺均是體內重要的免疫器官，含有多種免疫活性細胞和細胞因子，脾臟在細胞免疫和體液免疫中發(fā)揮重要作用；胸腺是誘導淋巴細胞增殖分化成免疫細胞的重要場所，臟器體重比值與淋巴細胞增殖的程度相關，是衡量免疫能力強弱的一項基本指標[3-4]。MTT法通過檢測細胞的轉化而間接反應細胞增殖程度，是機體免疫的重要指標；通過Con A誘導脾淋巴細胞增殖，刺激免疫活性細胞的增殖。NK細胞是非特異免疫重要組成部分，LDH法是巨噬細胞激活重要的標志[5]。

本研究實驗前后，各給藥組小鼠體重與對照組相比無顯著差異（P＞0.05），說明大豆異黃酮對小鼠體重無影響。給予大豆異黃酮30d后，中、高劑量組的脾臟/體重比值和高劑量組的胸腺/體重比值與對照組相比明顯升高（均P＜0.05），且中、高劑量組能明顯提高脾淋巴細胞的增殖能力并能提高NK細胞的轉化率（P＜0.05），從而說明大豆異黃酮通過促進淋巴細胞增殖，促進免疫器官發(fā)育，從而提高機體的免疫能力。