兩種膠體金試紙條檢測血清人絨毛膜促性腺激素的性能評價

（南方醫(yī)科大學南海醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，廣東 佛山 528244）

人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）屬于一類糖蛋白激素，主要通過胎盤合體滋養(yǎng)層細胞進行分泌，其主要作用為促進性腺發(fā)育。在正常人體內(nèi)HCG含量極少，但在受孕后第4天便開始分泌，并逐漸升高。在妊娠1周后，血液的HCG為5～50 mIU/mL，尿液HCG＞25 mIU/mL，在妊娠第8～10周時達峰值，持續(xù)1～2周后迅速降低，之后逐漸下降并以1/10～1/5的峰值水平維持至分娩[1]。目前，臨床上對正常早孕、異位妊娠、肝癌等疾病通常都會通過采集人體血清或尿液進行評估，并檢測其中HCG水平，從而對疾病進行有效的鑒別和診斷[2]。通常利用HCG檢測的方式輔助早期妊娠檢測的方式種類較多，其中膠體金免疫層析法（colloidal gold immunochromatographic assay，GICA）較為常用，主要原因在于該方法操作簡便快速，在使用過程中不需要使用其他特殊設備或儀器，同時便于儲存。但由于生產(chǎn)廠家的不同，其個別性能指標或操作使用方面都略有不同。本研究旨在評價兩個不同廠家“早早孕”試紙條（膠體金免疫層析法）檢測血清中人絨毛膜促性腺激素（HCG）的檢測性能。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 本次研究樣品均為2019年11月16～20日本院門診或住院患者中采取的血清樣本，共計65例，所有研究樣品經(jīng)化學發(fā)光法檢測后均已測定HCG含量，且無明顯溶血、黃疸等情況的發(fā)生。

1.1.2 試劑 選擇由潤和生物醫(yī)藥科技（汕頭）有限公司生產(chǎn)的大衛(wèi)“早早孕”檢測試紙（膠體金法），其生產(chǎn)批號以及生產(chǎn)許可證編號分別為20190314、粵食藥監(jiān)械生產(chǎn)許20030850號，產(chǎn)品有效期至2021年9月，注冊證書編號為粵械注準20162400111。萬孚“早早孕”檢測試紙（膠體金法）由廣州萬孚生物技術(shù)有限公司提供，產(chǎn)品批號W00190833，產(chǎn)品有效期至2022年8月，生產(chǎn)許可證編號為粵食藥監(jiān)械生產(chǎn)許20030645號，注冊證書編號為粵械注準20162400006。

1.1.3 儀器 本次研究選擇的化學發(fā)光免疫分析儀，其品牌為西門子，型號為Centaur XP，可檢測出2～1000 mIU/mL范圍的HCG含量，同時試劑以及校準品均為原裝配套。質(zhì)控品是一種化學發(fā)光質(zhì)控物，由美國伯樂公司生產(chǎn)，其低值批號為40361、中值批號為40362、高值批號為40363。

1.2 方法

1.2.1 最低檢出限試驗 利用生理鹽水將樣品進行稀釋，樣品原濃度為392.6 mIU/mL，且已經(jīng)通過化學發(fā)光法檢測，將樣品稀釋成9個樣本，其濃度分別為392.6 mIU/mL、196.3 mIU/mL、98.2 mIU/mL、49.1 mIU/mL、24.5 mIU/mL、12.3 mIU/mL、6.1 mIU/mL、3.1 mIU/mL以及1.5 mIU/mL，并將陰性對照設置為生理鹽水，將所有樣品均經(jīng)過2種試紙條進行檢測，且均重復測定3次。

1.2.2 重復性試驗 利用2種試紙條對臨界值附近樣品進行重復檢測，樣品濃度分別為25.6、33.4 mIU/mL，每個樣品均重復檢測10次。

1.2.3 診斷性能對比 選擇經(jīng)過化學發(fā)光檢測后，濃度在2.0～200000 mIU/mL之間的樣品共計65例，利用2種試紙條將所有樣品分別進行檢測。將經(jīng)過化學發(fā)光法所測定出來的數(shù)值定為真值。若檢測結(jié)果在10 mIU/mL以下（且包含10 mIU/mL），則判定為陰性，若檢測結(jié)果在10 mIU/mL以上則判定為陽性。將所有測定結(jié)果與化學發(fā)光法測定結(jié)果進行比較，并對靈敏度、特異性、診斷準確度等進行對比評價。

1.2.4 試紙條的顯色情況對比 所有樣品均遵照濃度由低至高的順序進行排列，對2種試紙條顯色情況以及其梯度變化進行對比。注意所有操作都應保持在常溫狀態(tài)下進行，并遵照說明書加以操作，將試紙條下端在樣品血清中進行插入并保持5 s，注意其深度應當在MAX線以下，取出后平放，等待10 min后對檢測結(jié)果進行觀察。

1.2.5 判定標準 有效為質(zhì)控區(qū)有紅色條帶產(chǎn)生；陰性（－）：質(zhì)控區(qū)有紅色條帶產(chǎn)生，但是檢測區(qū)沒有出現(xiàn)條帶；弱陽性（±）：質(zhì)控區(qū)有紅色條帶產(chǎn)生，且檢測區(qū)出現(xiàn)較為微弱的條帶；陽性（＋）：質(zhì)控區(qū)有紅色條帶產(chǎn)生，且檢測區(qū)出現(xiàn)比較明顯的條帶，但顏色與質(zhì)控區(qū)相比略淺；強陽性（＋＋）：質(zhì)控區(qū)有紅色條帶產(chǎn)生，且檢測區(qū)出現(xiàn)清晰條帶，同時顏色與質(zhì)控區(qū)相近或更深。

2 結(jié)果

2.1 對最低檢出限進行檢測對比 當HCG濃度在12.3 mIU/mL時，大衛(wèi)試紙條檢測結(jié)果為陰性，而萬孚試紙條檢測結(jié)果為弱陽性。在HCG濃度為24.5～392.6 mIU/mL時，2種試紙條的檢測結(jié)果均為弱陽性，具體結(jié)果見表1。

表1 2種試紙條最低檢出限試驗檢測結(jié)果

2.2 對重復性進行檢測對比 大衛(wèi)試紙條檢測HCG濃度為25.6 mIU/mL，萬孚試紙條為34.4 mIU/mL，同時利用2種試紙條對兩個樣品的10次結(jié)果進行對比發(fā)現(xiàn)，其顯色均一，且結(jié)果均為弱陽性。

2.3 對診斷性能進行對比 本次研究的全部樣品檢測結(jié)果見表2。在2種試紙條的診斷性能比較中，因靈敏度差值置信限包括了“0”，所以不能在統(tǒng)計學上做出靈敏度差異有顯著性的結(jié)論，而特異性的置信限不包括“0”，因此這就有證據(jù)說明2種試紙條特異性有差別[3]。具體結(jié)果見表3。

表2 2種試紙條診斷性能的檢測結(jié)果

表3 2種試紙條的診斷性能結(jié)果

2.4 試紙條的顯色情況對比 選取部分濃度值的檢測結(jié)果2種試紙條的顯色情況見表4。經(jīng)對比，大衛(wèi)試紙條的顯色結(jié)果更為突出，同時其條帶邊緣更加清晰、均勻。而萬孚試紙的顯色比較粗糙，條帶的顯色不夠均勻，部分條帶的邊緣相對模糊，層次感不夠明顯。

3 討論

在臨床眾多標記技術(shù)中，膠體金屬于較為常用的一種。在20世紀70年代，由Faulk和Taytor將其引入免疫化學，至此該技術(shù)便成為一種新的免疫學方法，同時被廣泛應用在生物醫(yī)學各領域[4]。現(xiàn)階段，在檢驗醫(yī)學中不斷將其應用在免疫層析法中，同時也在快速免疫金滲濾法中廣泛運用，在臨床上主要通過此方式進行HBsAg檢測、HCG檢測以及抗雙鏈DNA抗體檢測等，由于其具備簡單、便捷、迅速、精準和無污染等優(yōu)點，得到越來越多學者的青睞[5]。“早早孕”試紙條的基本檢測原理為利用膠體金顆粒為指示標記，示蹤物標記McAb、羊抗人HCG和羊抗鼠IgG多克隆抗體，運用大分子物質(zhì)對抗體進行保護，并將標志物在硝酸纖維素膜上進行固化。當檢測區(qū)域的待檢HCG呈現(xiàn)紫紅色時，說明McAb-HCG-羊抗人HCG雙抗體夾心抗原抗體復合物已經(jīng)形成。對照區(qū)域形成多克隆抗體復合物，也會呈現(xiàn)紫紅色[1]。隨著時代的發(fā)展，HCG膠體金試紙條已得到了廣泛運用，我國食品藥品監(jiān)督管理局在2009年頒布了相關(guān)行業(yè)標準，并對產(chǎn)品的分析性能做出相關(guān)要求，特別是明確要求試紙條的最低檢測限、重復性等內(nèi)容。在本次試驗中，萬孚試紙條與大衛(wèi)試紙條的最低檢測限分別為12.3 mIU/mL、24.5 mIU/mL，均符合標準要求（即不得超過25 mIU/mL）。通過進行重復性試驗發(fā)現(xiàn)，萬孚試紙條與大衛(wèi)試紙條的反應一致，且顯色度均一，重復性較好。

表4 2種試紙條的顯色對比

通過本研究發(fā)現(xiàn)，將大衛(wèi)試紙條以及萬孚試紙條同化學發(fā)光法進行對比，前者靈敏度為96.43%，特異性為100%。通過對56例陽性標本進行檢測發(fā)現(xiàn)，有2例大衛(wèi)試紙條檢測為陰性。萬孚試紙條靈敏度為100%，特異性為88.89%，在9例的陰性標本中，有1例萬孚檢測結(jié)果為弱陽性。因萬孚試紙條的最低檢測限達12.3 mIU/mL，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。在2種試紙條的診斷性能比較中，因靈敏度差值置信限包括了“0”所以不能在統(tǒng)計學上做出靈敏度差異有顯著性，而特異性的置信限不包括“0”，因此這就有證據(jù)說明兩方法特異性有差別。在顯色方面，與萬孚試紙條相比，大衛(wèi)顯色更為濃厚、均勻，且具有清晰、層次感突出的條帶的邊緣。而萬孚試紙的顯色比較粗糙，條帶的顯色不夠均勻，部分條帶的邊緣相對來說比較模糊，層次感不夠明顯。

通過對比2種廠家試紙條發(fā)現(xiàn)，二者最低檢測限、重復性等均有較好的檢測效果，同時大衛(wèi)試紙條在顯色方面更為均勻，更具層次感，這在估算血清HCG含量方面有較大的意義。