飼料添加劑中5種有機酸的測定方法研究

侯林叢，黃好強，徐志海，王彩杰，向霞霞，張 星

（1.河南海瑞正檢測技術有限公司，河南 鄭州 450001；2.鄭州賽科藥業科技有限公司；3.河南牧經養殖技術研究院有限公司；4.河南牧業經濟學院）

目前，飼料酸化劑中有機酸的測定方法有酸堿滴定法、離子色譜法、氣相色譜法、氣質聯用法、液相色譜法等。高效液相色譜法具有分析范圍廣、檢測速度快等優點，利用高效液相色譜測定有機酸大多是關于青貯發酵液、食品及飲料等，而利用高效液相色譜同時測定飼料添加劑中蘋果酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸含量的報道較少，該方法在大量的實驗基礎上，建立了一種同時測定5種有機酸的高效液相色譜法，以期為基層飼料檢驗人員提供新的檢測參考。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

分析天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司）；高效液相色譜儀（美國waters公司）：配紫外檢測器；超聲波處理器（昆山超聲儀器）；離心機（安徽嘉文儀器裝備有限公司）。

蘋果酸、甲酸、乙酸標準品：含量≥99.0%（北京壇墨質檢科技有限公司；丙酸、丁酸標準品：含量≥99.0%（北京曼哈格生物科技有限公司）；磷酸（色譜純）；乙腈（色譜純）；實驗用水為超純水。

1.2 標準溶液的配制

精密稱取蘋果酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸標準品100 mg于10 mL 容量瓶中，加少量超純水溶解，用超純水定容至刻度，搖勻，分別得出濃度為10.0 mg/mL 各有機酸標準貯備液，根據樣品含量適當稀釋成一系列混合標準工作液。

1.3 樣品前處理

稱取適量樣品（根據樣品中各有機酸含量稱取0.2～2 g）于100 mL容量瓶中，加入70 mL超純水，于超聲波中提取20 min，期間不斷搖晃促使溶解，用超純水定容至刻度，1 000 r/min 離心10 min，取上清液經0.45 靘濾膜過濾，上機測定。

1.4 色譜條件

色譜柱：C18柱，長250 mm，內徑4.5 mm，粒徑5 靘（大連依利特）；柱溫：30 ℃；流動相：0.1 %磷酸溶液（pH 值2.5）：乙腈=98∶2；流速：1.0 mL/min；檢測波長：210 nm；進樣量：10霯。

2 結果與討論

2.1 色譜條件

該文選用依利特C18色譜柱，針對不同比例的流動相對5 種有機酸的分離結果進行比較，結果表明，流動相中pH 值過高、有機相比例偏大均會影響5 種有機酸的分離效果，致使蘋果酸和甲酸兩個相鄰色譜峰重合。當使用0.1%磷酸溶液pH值為2.5時，能夠使5種有機酸進行有效分離。另外還實驗了0.5%、20%等不同比例的有機相對出峰時間的影響，當有機相比例為0.5%時，丁酸保留時間在40 min左右，分析時間過長。有機相比例為20%時，甲酸保留時間在1 min左右，無法進行積分。當有機相比例為2%時，各有機酸保留時間不受雜質干擾，分析時間控制在30 min以內，且各物質都能得到完全分離。

2.2 標準曲線的測定

分別取25～1 000 靏/毫升系列混合標準溶液注入高效液相色譜儀中，以標準溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，該系列標準曲線線性良好，滿足實際標準要求。

2.3 精密度的測定

按照本方法，選取同一飼料添加劑進行精密度試驗，平行測定6 次，6 組數據的相對標準偏差（RSD）在8.0%以內，測定結果見表1。

2.4 回收率試驗

分別取同一基質樣品兩份，一份為本底，另一份添加不同濃度的有機酸標液，回收率結果見表2。

2.5 討論

該方法采用同一流動相利用高效液相色譜分析方法同時測定飼料添加劑中5 種有機酸的含量。該方法步驟簡單、易于操作，重復性好，準確度高，可用于飼料添加劑中有機酸含量的分析與質量控制，具有很大的實用價值?！?/p>

表1 方法精密度測定結果

表2 方法回收率測定結果