稻瘟病菌生理小種鑒定及防控技術研究

楊秀榮，霍建飛，郝永娟，孫淑琴

（天津市植物保護研究所，天津 300384）

水稻是世界上最重要的糧食作物之一，播種面積和總產量均居糧食作物首位，我國60%以上人口以稻米為主食。近年來隨著天津市“振興小站稻”戰略的發起，栽培面積也由2014年的1.67萬公頃增長到2020年的5.33萬公頃。

水稻稻瘟病與紋枯病、白葉枯病被稱為水稻三大病害，病原為稻梨孢（Pyricularia oryae Cav.）［1］，屬半知菌亞門真菌。稻瘟病是水稻生長過程中常發病害之一，每年全世界因為稻瘟病而造成嚴重減產。目前稻瘟病的防治一般從水稻品種自身的抗性基因［2］和栽培管理措施等方面進行。本試驗通過對水稻抗稻瘟病生理小種［3］進行研究，指導天津地區選用抗性水稻品種，降低稻瘟病的自然發生率［4］，減少不必要的經濟損失。另外通過篩選高效、低毒、低殘留的化學藥劑抑制稻瘟病的發生［5］，可減少田間水稻的發病率和傳染機會，從而大大降低水稻損失，提高該地區農民的經濟收入。

1 材料與方法

1.1 稻瘟病菌的采集、分離及培養

于水稻穗頸瘟發生盛期（9月下旬到10月上旬），采集不同栽培條件、不同土壤類型、不同水稻品種的發病植株，裝入干燥信封，記錄采集地點、時間，并進行編號，及時帶回實驗室進行分離純化。

將有明顯病斑的穗頸部剪成3 cm長小段（病樣），放置于鋪有滅菌濾紙的培養皿中。濾紙上用牙簽支撐，防止病樣直接接觸濾紙，同時保持濾紙濕潤。蓋上培養皿蓋，放置于25℃培養箱中培養，48 h后取出病樣，將產生的分生孢子振落于水瓊脂培養基中，顯微鏡下挑取單孢［6］，并進行純培養。

通過單孢分離獲得的菌株用大麥粒培養基培養10 d左右。將長滿菌絲體的大麥粒培養基取出，用自來水洗去麥粒表面的菌絲體，濾干后薄層攤開于有滅菌紗布的瓷盤內［7-9］，上蓋濕紗布，于24～26℃恒溫培養箱中培養2 d，使其產生足量的孢子以備接種使用。

1.2 生理小種的鑒定

選用中國的 7個鑒別寄主［7，10，11］（特特普、珍龍13、四豐43、東農363、關東51、合江18、麗江新團黑谷）進行生理小種測定。于水稻苗期將分離的稻瘟病菌株分別接種于7個鑒別寄主上，人為控制條件促進發病，7 d后調查不同品種發病情況，按照統一標準進行生理小種命名［12］。

1.3 抗病品種篩選

1.3.1 供試品種 津粳憂2186、天隆粳2號、津育粳 25、津墾 63、津稻 328、天隆粳 3號、津稻321、晶粳238、津原81、金農稻 353、津育粳 29、津原45ck、津粳憂 1619、天隆優 619、津原 50、晶粳236、天隆粳 628、津原 85、津原 U9、津墾 49、金稻777、津原87、津育粳27和津原E28CK。

1.3.2 篩選抗病品種 選擇蒙古稻作為誘發品種。將誘發品種播種在鑒定品種（株系）的四周，秧苗期間多施用氮肥。采用噴霧接種［13，14］，于水稻抽穗期，將稻瘟病菌（105個／mL）孢子懸浮液均勻噴在蒙古稻上，蓋遮陽網，同時鋪設淋水裝置，保證接菌環境的溫濕度，以利于稻瘟病的形成與擴散。于水稻黃熟期進行調查，調查方法參照水稻品種試驗稻瘟病抗性鑒定與評價技術規程（NY／T 2646—2014）［15］。

1.4 室內毒力測定

1.4.1 供試藥劑 30%三環唑懸浮劑、20%稻瘟酰胺懸浮劑，江蘇長青生物科技有限公司產品；40%稻瘟靈乳油，長春市長雙農藥有限公司產品；50%異稻瘟凈水乳劑，浙江泰達作物科技有限公司產品；25%咪鮮胺水乳劑，江蘇輝豐生物農業股份有限公司產品；430 g／L戊唑醇懸浮劑，興農股份有限公司產品；2%春雷霉素可濕性粉劑，延邊春雷生物藥業有限公司產品；80%乙蒜素乳油，浙江平湖農藥廠產品；250 g／L嘧菌酯懸浮劑，瑞士先正達作物保護有限公司產品。

1.4.2 藥劑對病原菌的毒力測定 抑菌試驗采用平皿法進行：用接種針將生理小種ZD1菌餅分別移入不同濃度的帶毒培養基上［16-18］，正面向下，含有無菌水的平板為空白對照，置于25℃恒溫培養箱中培養，于48 h后測量菌落直徑，3次重復。

1.4.3 毒力方程計算 以藥劑濃度的對數值為X，通過抑菌率查機率值表得到的數為Y，求出藥劑的毒力方程，計算出有效中濃度EC50值并進行藥劑的毒力比較［19］。

2 結果與分析

2.1 水稻稻瘟病病原菌采集、分離和培養

從天津寧河、寶坻、津南等水稻產區采集典型的稻瘟病病穗40份，穗頸部、主軸、枝梗等處有黑褐色病斑，病斑以上籽粒干枯（圖1）。經分離純化，獲得20株純培養單株。稻瘟病菌菌落呈灰色，接種點處變黑或變黃，分生孢子大小為（14～40）μm×（6～13）μm，有1～3個隔膜（圖2）。

圖1 水稻稻瘟病植株癥狀

圖2 稻瘟病菌菌落及分生孢子特征

2.2 生理小種的鑒定

由表1可以看出，20個菌株分屬于4個生理小種，分別是 ZG1、ZD1、ZC3、ZB17，其中 ZD1檢測頻次為70%，ZC3為15%，ZG1為10%，ZB17為5%。因此，優勢小種為ZD1。

表1 生理小種的鑒定

2.3 抗稻瘟病水稻品種篩選

24個品種間抗感差異明顯，其中表現中抗的品種有6個，分別是津墾63、津稻328、天隆優619、津原85、津原 U9、津育粳 27（表2），可以作為抗病品種或抗性資源加以利用。

2.4 室內毒力測定

由表3可知，9種化學藥劑對稻瘟病均有一定的防治效果，較好的有250 g／L嘧菌酯懸浮劑、25%咪鮮胺水乳劑、430 g／L戊唑醇懸浮劑、40%稻瘟靈乳油。但是要注意藥劑的輪換使用，防止病原菌抗藥性的產生。

表2 水稻品種對稻瘟病的抗性鑒定結果

表3 9種化學藥劑對稻瘟病的室內毒力

3 討論

研究稻瘟病菌生理小種種類是水稻稻瘟病的防控基礎和前提。種植和選育抗病品種是防治作物病害較經濟有效的方法，也是豐產和穩產的重要基礎［20，21］，既有利于農作物連年穩產高產優質、節省大量人力物力、降低農業投資，又不污染環境，有利于人畜健康。另外化學藥劑作為必不可少的補充措施，了解藥劑的防治效果和檢測抗藥性的存在與否，可為科學合理應用提供依據。