‘紅霞’金線蓮組培培養(yǎng)基配方優(yōu)化技術(shù)研究

徐雙雙 李怡清 馮慧敏 朱建軍 杜楊微 王巍偉 余宏傲

摘 要：以金線蓮品種‘紅霞’為試驗(yàn)材料，采用L9（33）正交法添加不同濃度的有機(jī)添加物香蕉、蔗糖，以篩選出對(duì)金線蓮培苗培育壯苗最有利的培養(yǎng)基。結(jié)果表明：金線蓮母苗剪成帶1個(gè)莖節(jié)、長(zhǎng)1～2cm的莖段，接種于培養(yǎng)基，培養(yǎng)130d即可獲得健壯苗。不同含量的香蕉及蔗糖對(duì)于金線蓮的株高、莖粗和生根數(shù)的影響有明顯差異。在有機(jī)添加物香蕉成分不變的條件下，蔗糖含量提高，株高、莖粗和生根數(shù)也隨之提高影響但不顯著。當(dāng)有機(jī)添加物蔗糖成分不變，香蕉成分不同對(duì)株高、莖粗和生根數(shù)有顯著影響。說(shuō)明有機(jī)添加物香蕉成分對(duì)金線蓮組培有效苗率的影響大，有機(jī)添加物蔗糖成分對(duì)金線蓮組培有效苗率的影響小。有機(jī)添加物的含量以香蕉300g/L+蔗糖20g/L培養(yǎng)金線蓮壯苗的效果最佳。

關(guān)鍵詞：金線蓮;培養(yǎng)基;有機(jī)添加物;香蕉;蔗糖

中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2021）24-0015-03

Study on the Formulation Optimization Technology of ‘Hongxia’ Anoectochilus roxburghii Tissue Culture Medium

XU Shuangshuang1 et al.

（1Wenzhou Vocational College of Science and Technology， Wenzhou 32500， China）

Abstract： ‘Hongxia’ variety of Anoectochilus roxburghii was used as experimental material. In order to select the most favorable medium for Anoectochilus roxburghii culture， banana and sucrose with different concentrations were added by L9 （33） orthogonal method.The experimental result shows： the female shoots of Anoectochilus roxburghii were cut into stem segments 1-2cm long with a stem node and inoculated in the culture medium. After 130 days of culture， robust seedlings were obtained. The effects of different banana and sucrose contents on the plant height， stem diameter and root number of Anoectochilus roxburghii were significantly different. There was no significant effect of sucrose composition on the effective seedlings rate in Anoectochilus roxburghii tissue culture when banana composition of organic additive was unchanged.With the increase of sucrose content， plant height， stem diameter and root number also increased when the concentration of organic additive banana remained unchanged.The plant height， stem diameter and root number were affected by different banana composition when the concentration of sucrose was unchanged. The results showed that banana composition of organic additives had a greater effect on the effective seedling rate of Anoectochilus roxburghii， while sucrose composition of organic additives had a smaller effect on the effective seedling rate of Anoectochilus roxburghii. The optimum content of organic additives was banana 300g/L and sucrose 20g/L for Anoectochilus roxburghii. This study laid a foundation for improving the technical system of Anoectochilus Roxburghii group culture.

Key words： Anoectochilus roxburghii; Culture medium; Organic additives; Banana; Sucrose

金線蓮[Anoectochilus roxburghii （wa11.） Lind1.]，又稱花葉開(kāi)唇蘭、金線草、烏參、金線入骨消等，為蘭科開(kāi)唇屬多年生珍稀草本藥用植物。金線蓮化學(xué)組成成分多樣，全草均可入藥，其主要含有糖類、牛磺酸、黃銅類、甾體化合物、強(qiáng)心甙類、生物堿等活性成分，主要功效為滋陰降火、消炎鎮(zhèn)痛等。現(xiàn)代藥理研究表明，金線蓮主要用于治療糖尿病、肝炎、肺炎、心臟病等疾病[1]。金線蓮自然生長(zhǎng)下對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境的要求較為苛刻，且種子沒(méi)有發(fā)育完善，在自然狀態(tài)下萌發(fā)十分困難，因此金線蓮的有性繁殖較為困難;且由于其藥用價(jià)值較高，采摘人數(shù)過(guò)多，繁殖困難與過(guò)度采挖導(dǎo)致金線蓮的野生資源稀缺[2]。因此，目前市場(chǎng)上金線蓮大多由人工繁殖和栽培。金線蓮品種‘紅霞’葉片橢圓，顏色較深，葉脈呈金色，莖干粗壯黑硬，是一種比較完美的金線蓮。但目前針對(duì)‘紅霞’的研究較少，沒(méi)有投入批量生產(chǎn)，價(jià)格較高。因此本實(shí)驗(yàn)采用‘紅霞’進(jìn)行研究，試圖探索‘紅霞’的組培快繁技術(shù)。

金線蓮的人工繁殖主要有人工種子、種子無(wú)菌培養(yǎng)、離體快繁等幾種方式，對(duì)金線蓮離體快繁的影響因素較多，如光照、溫度、基本培養(yǎng)基、激素及有機(jī)添加物的成分及含量等。江建銘等研究認(rèn)為以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加一定比例的NAA和6-BA，再加入20%的香蕉或者椰汁，對(duì)金線蓮的壯苗生長(zhǎng)十分有利[3]。王建明等發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中適當(dāng)?shù)奶砑佑袡C(jī)物，如蛋白胨、香蕉汁能夠有效的促進(jìn)增殖及壯苗[4]。王麗芳研究發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基中添加香蕉和馬鈴薯對(duì)金線蓮產(chǎn)量增加均有明顯的促進(jìn)作用[5]。但有機(jī)添加物香蕉、蔗糖對(duì)金線蓮的壯苗培養(yǎng)影響，未見(jiàn)前人對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)研究。本研究在前人研究的基礎(chǔ)上，開(kāi)展了金線蓮組培苗有機(jī)添加物對(duì)金線蓮壯苗培養(yǎng)影響的正交試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料 金線蓮‘紅霞’組培母苗，由溫州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 增殖與生根培養(yǎng) 當(dāng)金線蓮母苗長(zhǎng)到6～8cm高時(shí)，剪成帶1個(gè)莖節(jié)、長(zhǎng)1～2cm的莖段，接種于自制的培養(yǎng)基中。自制培養(yǎng)基以1/2MS基本培養(yǎng)基+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+AG1.25mg/L+AC0.5g/L+瓊脂6g/L+蛋白胨1g/L作為基礎(chǔ)培養(yǎng)體系，添加不同濃度的有機(jī)物添加物香蕉、蔗糖，香蕉、蔗糖各設(shè)3個(gè)用量（見(jiàn)表1）。采用L9（33）正交法研究2種有機(jī)添加物在不同濃度下對(duì)金線蓮‘紅霞’壯苗的影響。每處理接種9瓶，每瓶18個(gè)芽，重復(fù)3次，培養(yǎng)室溫度（24±2）℃，接種后10d置于黑暗培養(yǎng)，10d后光照培養(yǎng)10h/d，光照強(qiáng)度為1750～2000lx，培養(yǎng)基pH值均為5.8。

1.2.2 指標(biāo)測(cè)定 培養(yǎng)130d后對(duì)各組苗的生長(zhǎng)情況進(jìn)行記錄，測(cè)定其株高（用直尺測(cè)定莖基部至最高芽頂端的長(zhǎng)度）、莖粗（用游標(biāo)卡尺測(cè)定莖基部直徑）和生根數(shù)（每個(gè)處理所有植株根系總條數(shù)/植株總數(shù)）。株高5～7cm、根數(shù)>2條、無(wú)污染的植株為有效苗，有效苗率（%）=有效苗數(shù)/接種數(shù)×100。

1.3 數(shù)據(jù)分析 運(yùn)用Excel 2010軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，使用SPSS17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)的分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同有機(jī)添加物對(duì)金線蓮成苗培養(yǎng)的影響 金線蓮成苗組培一般需要15d才能用肉眼觀察出其變化。接種10d時(shí)，對(duì)其進(jìn)行遮蔭處理，之后去蔭，剛長(zhǎng)出的小芽一般為黃白色，隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)慢慢變成黃綠色（如圖1），剛萌發(fā)的小芽，沒(méi)有十分明顯的辨識(shí)度，可能是剛萌發(fā)的緣故。接種45d后莖節(jié)處萌發(fā)出1～2個(gè)芽，新葉伴隨長(zhǎng)出（見(jiàn)圖2）;培養(yǎng)90～95d，植株長(zhǎng)成具有3～4個(gè)節(jié)的小苗，在基部第1和2節(jié)處分布許多白色毛狀根并長(zhǎng)出根系（見(jiàn)圖3）;隨著莖節(jié)不斷生長(zhǎng)，根系也逐漸變長(zhǎng)，部分根系扎入培養(yǎng)基中;培養(yǎng)130d可獲得健壯苗（見(jiàn)圖4）。

2.2 不同有機(jī)添加物對(duì)金線蓮壯苗培養(yǎng)的影響 從表2可以看出，培養(yǎng)基有機(jī)添加物成分對(duì)金線蓮組培有效苗率、株高、莖粗和生根數(shù)有較大影響，不同處理組培有效苗率有顯著影響（P<0.05）。培養(yǎng)130d，處理8和5的有效苗率顯著高于處理1，以處理8的有效苗率最高為93.2%，其次處理5的有效苗率為92.6%，處理1的有效苗率最低為82.7%。株高最高是處理9，培養(yǎng)130d后株高為6.61cm，其他依次為處理6、8、7、5、3、4、2和1;莖粗最大的是處理9，其莖粗為2.30mm，其他依次為處理8、6、7、5、4、3、2和1;由于增殖芽生長(zhǎng)不一致，導(dǎo)致株高和莖粗存在一定的差異。生根數(shù)最多的是處理9，培養(yǎng)130d后生根2.7條，其他依次為處理8、6、7、5、4、3、2和1。

當(dāng)有機(jī)添加物香蕉成分不變，蔗糖成分不同對(duì)金線蓮組培有效苗率無(wú)顯著影響，對(duì)株高、莖粗和生根數(shù)有影響，隨著蔗糖含量提高，株高、莖粗和生根數(shù)隨之提高的趨勢(shì)。當(dāng)有機(jī)添加物蔗糖成分不變，香蕉成分不同對(duì)處理（1、4、7）和處理（2、5、8）金線蓮組培有效苗率顯著影響（P<0.05），對(duì)處理（3、6、9）金線蓮組培有效苗率無(wú)顯著影響;對(duì)株高、莖粗和生根數(shù)有影響。說(shuō)明有機(jī)添加物香蕉成分對(duì)金線蓮組培有效苗率的影響程度大，有機(jī)添加物蔗糖成分對(duì)金線蓮組培有效苗率的影響程度小，影響程度大小為：香蕉>蔗糖，這可能與蔗糖含量提高，組培苗污染加重有關(guān)。有機(jī)添加物蔗糖和香蕉成分不同，對(duì)株高、莖粗和生根數(shù)有一定影響。

綜合成本和瓶苗質(zhì)量，金線蓮壯苗培養(yǎng)以處理8效果最顯著。

3 小結(jié)與討論

金線蓮母苗剪成帶1個(gè)莖節(jié)、長(zhǎng)1～2cm的莖段，接種于培養(yǎng)基，培養(yǎng)130d即可獲得健壯苗，較常規(guī)的增殖、生根分段培養(yǎng)縮短時(shí)間25～30d，節(jié)約能耗20%，節(jié)約勞動(dòng)力35%。在藥用植物的離體快繁過(guò)程中，常常向培養(yǎng)基中添加附加物以提高產(chǎn)物產(chǎn)量，常用的添加物有香蕉泥、椰乳、蔗糖等，添加物中的氨基酸、糖、植物激素等物質(zhì)[5]，研究表示這些添加物能夠有效促進(jìn)金線蓮細(xì)胞的增殖分化。通過(guò)添加香蕉和蔗糖不同用量培養(yǎng)基配方試驗(yàn)，以有機(jī)添加物香蕉300g/L+蔗糖20g/L培養(yǎng)金線蓮壯苗效果最佳，可能是因?yàn)檎崽桥c香蕉為金線蓮提供了高糖高鹽的環(huán)境，使其擁有足夠的營(yíng)養(yǎng)進(jìn)行生長(zhǎng)代謝。其中添加物香蕉比蔗糖對(duì)金線蓮組培有效苗率影響更大，這可能與蔗糖含量提高，組培苗污染加重有關(guān)。有機(jī)添加物蔗糖和香蕉成分不同，對(duì)株高、莖粗和生根數(shù)有一定影響。優(yōu)化培養(yǎng)基配方為1/2MS基本培養(yǎng)基+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+AG1.25mg/L+AC0.5g/L+瓊脂6g/L+蛋白胨1g/L+香蕉300g/L+蔗糖20g/L。但有機(jī)添加物香蕉300g/L是否最佳用量，有待進(jìn)一步配比研究。

參考文獻(xiàn)

[1]福建中醫(yī)藥研究所編.福建藥物志[M].第二冊(cè).福州：福建科技出版社，1982;215.

[2]許文江，陳裕，林坤瑞.藥用野生金線蓮植物資源的研究[J].福建熱作科技，2000（4）：9-10.

[3]江建銘，俞旭平，沈曉霞，等.金線蓮組培快繁技術(shù)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（02）：408-410.

[4]王建明，王松良，詹巧杰，等.金線蓮組織培養(yǎng)的條件優(yōu)化研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2013，15（01）：45-49.

[5]王麗芳.不同培養(yǎng)基及添加物對(duì)金線蓮生長(zhǎng)量的影響[J].北方園藝，2011（05）：175-176.

（責(zé)編：王慧晴）