TLR4與IL-23在鼻息肉組織中的表達(dá)及其意義①

吳 建,牟基偉,張愛華 (.佳木斯大學(xué)研究生學(xué)院, 黑龍江 佳木斯 54007;.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科, 黑龍江 佳木斯 54003)

鼻息肉是鼻腔及鼻竇黏膜上皮組織的慢性炎癥性疾病，為耳鼻喉科的常見疾病之一[1]。前鼻鏡示鼻腔可見一個(gè)或多個(gè)表面光滑、灰白色、半透明的新生物(小的需要進(jìn)行鼻腔黏膜的收縮方可看到)，狀如新鮮荔枝肉，觸之柔軟，且可移動(dòng)，觸之不易出血，也無觸痛。多源于中鼻道或鼻竇腔黏膜。主要癥狀:雙側(cè)進(jìn)行性鼻塞伴有清涕或黏性鼻涕、部分患者有嗅覺障礙、頭面部悶脹沉重感、部分嚴(yán)重的患者有聽力下降。鼻息肉好發(fā)于篩竇、上頜竇、中鼻道、中鼻甲、篩泡等處。中鼻道結(jié)構(gòu)復(fù)雜，參與形成中鼻道的中鼻甲黏膜也易與中鼻道外側(cè)壁黏膜相互擠貼或向內(nèi)與中隔黏膜相互接觸，在正常情況下中鼻道黏膜的血供就比鼻腔其他部位的血供明顯減少，中鼻道微環(huán)境缺氧狀態(tài)時(shí)常發(fā)生，其環(huán)境稍微變化就會(huì)為鼻息肉的形成提供有利的條件[2]。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)分析48例實(shí)驗(yàn)組和40例對(duì)照組中TLR4、IL-23的表達(dá)和分布。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科2018-12～2019-10收治的48例鼻息肉的患者為研究組，其中男29例，女19例，平均年齡(47.9±6.3)歲，排除復(fù)發(fā)性鼻息肉，真菌性鼻竇炎等。并同期選擇了40例鼻中隔偏曲的患者手術(shù)中正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織為對(duì)照組，排除慢性鼻竇炎，過敏性鼻炎疾病等，其中男23例，女17例，平均年齡(39.1±5.2)歲，所有入組患者都簽署了知情同意書，本研究已通過醫(yī)院倫理常委會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 方法

患者取臥位全麻后常規(guī)消毒鋪巾，鼻腔用呋麻滴鼻液、丁卡因浸濕棉片收縮鼻腔黏膜后，鼻內(nèi)鏡下用切鉗切取鼻息肉和下鼻甲頭端組織，用生理鹽水沖洗組織，用無菌紗布蘸干，放入福爾馬林液中固定后送到病理科進(jìn)行標(biāo)本的進(jìn)一步處理。采用免疫組化DAB法、石蠟切片脫蠟至水、抗原修復(fù)、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶、血清封閉、加一抗、加二抗、DAB顯色、復(fù)染細(xì)胞核、脫水封片、顯微鏡鏡檢圖像采集分析。試劑盒都從Wuhan servicebio technology CO.,LTD購買。按試劑盒的說明進(jìn)行了免疫組織化學(xué)的染色。石蠟切片免疫組化結(jié)果的判讀：蘇木素染細(xì)胞核為藍(lán)色、DAB顯出的陽性表達(dá)為淡黃色或深棕黃色顆粒出現(xiàn)在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中。

1.3 觀察指標(biāo)

用Image-Pro Plus6.0軟件選取相同的棕黃色作為判斷所有照片陽性的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析與處理。研究組(伴鼻息肉的慢性鼻竇炎患者)以及對(duì)照組(正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織)各組間TLR4、IL-23表達(dá)程度的差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 TLR4、IL-23免疫反應(yīng)

TLR4、IL-23主要表達(dá)在上皮細(xì)胞、腺體細(xì)胞、固有層炎性細(xì)胞細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中。見圖1～4。

2.2 TLR4在研究組與對(duì)照組中的表達(dá)

在鼻息肉組織中有表達(dá)、在正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織中也有表達(dá)，但是在鼻息肉組織中的陽性表達(dá)率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織中，為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.3 IL-23在研究組與對(duì)照組中的表達(dá)

在鼻息肉組織中有表達(dá)、在正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織中也有表達(dá)，但是在鼻息肉組織中的陽性表達(dá)率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織中，為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

圖1 TLR4在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)(×200) 圖2 TLR4在對(duì)照組中的表達(dá)(×400) 圖3 IL-23在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)(×200) 圖4 IL-23在對(duì)照組中的表達(dá)(×400)

表1 TLR4在研究組與對(duì)照組中的表達(dá)

表2 IL-23在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中的表達(dá)

2.4 TLR4、IL-23在鼻息肉組織的表達(dá)

呈正相關(guān)(r=0.516，P<0.05)。見表3。

表3 TLR4與IL-23在研究組中的相關(guān)性比較

3 討論

鼻息肉的病因比較復(fù)雜與病原微生物、遺傳因素、免疫機(jī)制、組織重塑、變態(tài)反應(yīng)、鼻部的解剖結(jié)構(gòu)及其炎癥等因素有關(guān)[3]。它是一個(gè)慢性炎癥性疾病有大量的嗜酸性粒細(xì)胞浸潤。藥物治療無效時(shí)我們會(huì)選擇功能性鼻竇內(nèi)窺鏡手術(shù)將息肉切除，但是由于各種原因?qū)е滦g(shù)后息肉的再次生長復(fù)發(fā)，據(jù)我們的不完全統(tǒng)計(jì)術(shù)后復(fù)發(fā)率可以達(dá)到40%左右[4]。隨著我們生活水平的提高，人們的意識(shí)也越來越深入，患者對(duì)此病的治愈心里也越來越強(qiáng)烈，也引起了對(duì)這方面比較有研究的專家教授們的高度重視，他們認(rèn)識(shí)到了炎癥因素的長期刺激及一些細(xì)胞因子的出現(xiàn)時(shí)是導(dǎo)致鼻息肉產(chǎn)生及其復(fù)發(fā)率的主要原因。在臨床上我們經(jīng)常會(huì)對(duì)鼻息肉患者進(jìn)行鼻腔結(jié)構(gòu)的檢查，我們發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)的患者存在鼻腔解剖結(jié)構(gòu)的異常，當(dāng)感冒受涼時(shí)加重了鼻竇感染的機(jī)率引起了鼻竇的炎癥反應(yīng)，這些因素加劇了局部缺氧環(huán)境的形成和誘發(fā)炎癥因子的聚集，它們和鼻息肉的形成和發(fā)展密切相關(guān)[1]。

IL-23是OppmannB[2]等人發(fā)現(xiàn)的, 它與IL-I2一樣，主要作為前炎細(xì)胞因子在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮作用，都是含有亞單位p40的異源二聚體細(xì)胞因子，有調(diào)節(jié)免疫的活性[5]。IL-23是由P40和IL-12的P19兩個(gè)亞單位通過二硫鍵相連接所構(gòu)成的異二聚體，只有在兩個(gè)亞單位共同的表達(dá)在同一細(xì)胞內(nèi)時(shí)，異二聚體才能發(fā)揮它的生物活性，IL-23有復(fù)雜的生物學(xué)功能，抗感染免疫和自身免疫在疾病的發(fā)病中具有很重要的作用[2]。IL-23通過調(diào)節(jié)JAK/STAT3信號(hào)途徑，從而抑制凋亡因子BCL-2和BCL-XL的過渡表達(dá)，引起嗜酸性粒細(xì)胞的聚集浸潤，導(dǎo)致鼻息肉的形成。IL-23作用于嗜酸性粒細(xì)胞促進(jìn)其凋亡，當(dāng)IL-23減少時(shí)則嗜酸性粒細(xì)胞凋亡延遲從而導(dǎo)致嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤聚集導(dǎo)致鼻息肉的形成。研究還發(fā)現(xiàn)了IL-23在T細(xì)胞依賴的免疫反應(yīng)中起了關(guān)鍵性的作用[6]。 IL-23作為Th1細(xì)胞因子中的一員，在某些致病因素的作用下，可以改變鼻腔微環(huán)境中Th1/Th2細(xì)胞因子的比例而對(duì)鼻息肉的發(fā)病起作用。Toll樣受體是近來新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)介導(dǎo)天然免疫的古老家族，它的發(fā)現(xiàn)來自于對(duì)果蠅蛋白的研究[7]。TLRs是medzhitor等首次在人類細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，后被命名為TLR4[8]。鼻腔作為上呼吸道的第一道天然防預(yù)屏障，其黏膜可以分泌細(xì)胞因子、殺菌物質(zhì)來參與炎癥反應(yīng)和宿主防御。TLRs在鼻-鼻竇黏膜防御反應(yīng)中也有表達(dá),可以識(shí)別病原相關(guān)分子模式來快速啟動(dòng)天然免疫應(yīng)答，起到保護(hù)機(jī)體和殺傷病原微生物的作用。TLR4在正常的鼻黏膜中也有表達(dá)，當(dāng)它受到病原微生物的侵害時(shí)，可以與其表面成分結(jié)合，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。它的大量激活及表達(dá)上調(diào)有利也有弊，其利是當(dāng)機(jī)體遭到病原微生物的入侵時(shí)可以通過提高免疫應(yīng)答反應(yīng)來應(yīng)對(duì)抵御其入侵[9]，其弊是當(dāng)機(jī)體組織有損傷時(shí)可出現(xiàn)炎癥瀑布效應(yīng)加重組織的損傷延緩病情的康復(fù)。雖然TLR4是機(jī)體固有免疫的重要組成部分，對(duì)病原微生物的抵抗入侵方面意義重大,但是在持續(xù)的高表達(dá)中固有免疫、特異性免疫也觸發(fā)了其免疫自身損傷，若持續(xù)的炎癥狀態(tài)存在，最終會(huì)導(dǎo)致鼻息肉的形成。所以、它們?cè)谠摍C(jī)制中也扮演著非常重要的角色，缺一不可。