CK5/6在浸潤性乳腺癌中的表達及預后意義

王昭君 盧鴦鴦 戴燕燕 許踐剛 馬海廣 胡曉清

乳腺癌是全世界女性最常見的癌癥，也是女性癌癥死亡的第二大主要原因[1]。盡管乳腺癌的診斷和治療上有了很大的進展，但仍有30%～40%的患者在疾病的進展中出現遠處轉移 (異時性轉移)，轉移性乳腺癌治療效果很不理想，5年生存率僅為20%[2～4]。CK5/6屬于CK家族成員之一,其陽性表達已成為上皮細胞及其腫瘤細胞較為敏感和特異的指標[5]。本研究回顧性分析了溫州市中心醫院174例乳腺癌患者的臨床病理及隨訪資料，研究CK5/6與臨床病理因素的相關性，及其對患者生存及復發轉移的影響。

資料與方法

1.臨床資料：選取2015年7月24日～2017年11月25日期間于溫州市中心醫院因乳腺癌行手術治療的浸潤性乳腺癌患者作為研究對象。入組標準：174例患者均經病理學證實且病歷資料完整，排除肝臟、腎臟疾病及其他婦科疾病, 術前未行化療、放療或內分泌治療。收集患者的相關臨床病理資料, 計算體重指數(body mass index，BMI)。根據《中國成人超重和肥胖癥預防控制指南》，BMI=體重/身高2[kg/(m2)][6]。乳腺癌家族史定義為患者家系中一、二級家屬中至少1人有乳腺癌。

2.病理結果判讀：(1)ER/PR狀態的判定標準：采用免疫組織化學方法檢測組織ER/PR表達情況。ER/PR陽性定義為≥1%的腫瘤細胞核呈現不同程度的著色。ER/PR陰性定義為整張切片中<1%的腫瘤細胞核呈現不同程度的著色或完全無著色[7]。(2)Her-2狀態的判定標準：IHC(3+),則判定為Her-2陽性；IHC(1+)或IHC(0),則判定為Her-2陰性;IHC(2+)，則認為Her-2不確定，應進一步通過ISH方法進行Her-2基因狀態檢測[8]。(3)Ki67表達判定標準：Ki67的表達水平以陽性細胞的百分數來計算，陽性細胞數≤14%為低表達，陽性細胞數>14%為高表達。(4)CK5/6表達判定標準：CK5/6陽性為在腫瘤細胞質上出現黃色或棕黃色顆粒,正常乳腺組織作陽性對照, 脂肪組織作陰性對照。標本中隨機選取5個高倍鏡 (×400) 視野, 陽性細胞百分比≥5%表示抗體呈陽性反應，<5%表示抗體呈陰性反應。

3.隨訪：采用門診復查、電話等相結合的方式，了解患者術后情況，以死亡或者轉移為終止事件。統一培訓隨訪調查人員，隨訪結局采用統一標準。隨訪截止日期為2020年2月, 中位隨訪39個月，本次研究最終失訪5例，失訪率2.87%。

4.統計學方法：采用SPSS 22.0統計學軟件對數據進行統計分析，計數資料以例數(百分比)[n(%)]表示，采用χ2檢驗。利用Logistic回歸方法分析影響CK5/6表達的危險因素。K-M生存分析及Log-Rank檢驗分析CK5/6對浸潤性乳腺癌患者無轉移生存率及總生存率的影響,以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1.CK5/6在浸潤性乳腺癌中的表達：174例乳腺癌患者年齡27～85歲,平均年齡為52.84±12.62歲，中位年齡為52歲,BMI為16.30～37.58kg/m2，平均BMI為24.03±4.01kg/m2。CK5/6陽性表達者47例(27.01%)，陰性表達者127例(72.99%)。CK5/6的表達與患者的年齡、腫瘤直徑、腋窩淋巴結有無轉移、家族史、病理類型無明顯關系 (P>0.05),而與乳腺癌的組織學分級、ER、PR、Ki-67、EGFR有關 (P=0.000)。CK5/6、ER、PR、Ki-67、EGFR在浸潤性乳腺癌中的表達詳見圖1、表1。

圖1 CK5/6、ER、PR、Ki-67、EGFR在浸潤性性乳腺癌中的表達A.浸潤性乳腺癌中CK5/6的表達；B.浸潤性乳腺癌中ER的表達；C.浸潤性乳腺癌中PR的表達；D. 浸潤性乳腺癌中Ki-67的表達；E. 浸潤性乳腺癌中EGFR的表達

表1 CK5/6與乳腺癌臨床病理因素的關系[n(%)]

2.CK5/6在不同分子分型乳腺癌中的表達：三陰性、Her-2陽性型、Luminal型浸潤性乳腺癌中CK5/6陽性表達率為78.37%、45.00%和7.69%，各組間比較差異有統計學意義(χ2=74.95,P=0.000)，詳見表2。

表2 CK5/6在不同分子分型乳腺癌中的表達[n(%)]

3.影響CK5/6表達的多因素分析：利用Logistic回歸方法對CK5/6與乳腺癌臨床病理特征的相關性進行分析。高組織學分級、EGFR陽性、ER陰性是影響CK5/6表達的獨立危險因素(P<0.05),詳見表3。

表3 乳腺癌 CK5/6 表達與臨床病理因素的 Logistic 回歸分析

4.CK5/6與生存預后的關系：本研究中位隨訪39個月，8例患者出現復發轉移，復發率4.60%，轉移灶主要位于骨、肝臟、肺、縱隔淋巴結、對側胸壁軟組織、脾臟。最終6例患者死亡，病死率為3.45%。K-M生存分析及Log-Rank檢驗顯示,CK5/6對浸潤性乳腺癌患者無轉移生存率(FDM)的影響，差異有統計學意義(P=0.020)，詳見圖2。但對總生存率比較，差異無統計學意義(P=0.181)。進一步分析轉移灶中CK5/6表達情況，發現肝轉移者CK5/6陽性表達率為0，骨轉移者CK5/6陽性表達率為100%，其他轉移灶CK5/6陽性表達率為42.86%，組間比較差異有統計學意義(χ2=6.48,P=0.050)，詳見表4。

圖2 CK5/6表達與浸潤性乳腺癌患者無轉移生存率的關系

表4 CK5/6表達與不同乳腺癌轉移灶部位的關系

討 論

CK5/6是上皮細胞分化的根本標志物,其特定成分反映了細胞的類型和分化[9]。文獻報道CK5/6的陽性表達率為24%～72%，因為在IHC研究中對CK5/6的評分系統不同，沒有準確的臨界值[10]。本研究中27.01%浸潤性乳腺癌患者CK5/6 陽性表達，72.99%患者陰性表達，CK5/6的表達與患者的年齡、腫瘤直徑、腋窩淋巴結有無轉移無明顯關系(P>0.05),而與乳腺癌的組織學分級有關 (P=0.000)，這與李紀男等[11]研究結果一致，認為CK5/6反映了腫瘤的起源，不隨腫瘤的發展而改變，而且CK5/6在浸潤性乳腺癌中的表達與ER(P=0.000)、PR(P=0.000)、Ki-67(P=0.000)、EGFR(P=0.000)間比較，差異有統計學意義，與既往研究結果相似[12～14]。CK5/6與淋巴結轉移及Ki-67表達呈正相關性[15]。本研究利用Logistic回歸分析顯示高組織學分級、EGFR陽性、ER陰性是影響CK5/6表達的獨立危險因素(P<0.05)。CK5/6 陽性為乳腺癌預后差的標志[16]。

三陰性乳腺癌(TNBC)常常預后較差, 在常規工作中可依靠ER、PR免疫組化陰性、Her-2免疫組化或熒光原位雜交陰性來確定與發現TNBC[17]。基底樣乳腺癌 (basal-like breast cancer, BLBC) 是一類乳腺癌分子亞型，與三陰性乳腺癌存在交叉重疊，臨床上認為預后更差，CK5/6是識別基底細胞樣乳腺癌的重要分子標志物, 并且可能是TNBC預后的獨立影響因素[18]。本研究中三陰性乳腺癌占比21.26%，其CK5/6陽性表達率為78.37%，明顯高于Her-2陽性、Luminal型組，CK5/6表達的研究人群可能屬于基底樣亞型[18]。任新瑜等[19]研究認為EGFR與CK5/6聯合檢測敏感度及特異性分別可達98.7%和100%。有研究認為EGFR、CK5/6具有共表達性，免疫組化只查EGFR、CK5/6中的一項對于BLBC診斷及TNBC進一步分型也有重要意義[20]。本研究認為免疫組化檢測CK5/6經濟實惠，較基因表達譜檢測判斷BLBC容易開展臨床工作，不失為良好的生物學指標，若有條件可兩者聯合檢測以提高基底細胞樣乳腺癌的病理識別。

晚期乳腺癌患者大多出現骨轉移造成溶骨性破壞,會導致一系列骨相關事件,如發生疼痛、高鈣血癥、病理性骨折等表現，嚴重影響患者的生存質量[21]。而發生乳腺癌肝轉移的患者對臨床治療反應不敏感、預后差,患者可能在短時間內死亡[22]。研究發現腫瘤轉移擴散存在器官特異性，癌細胞和靶組織的分子特征都能證實轉移的器官特異性[23]。本研究顯示，CK5/6對浸潤性乳腺癌患者復發轉移的影響比較差異有統計學意義(P=0.020)，并且發現CK5/6陽性表達率與乳腺癌轉移部位有關，其中肝轉移與骨轉移乳腺癌患者CK5/6陽性表達比較差異有統計學意義，認為CK5/6可作為腫瘤轉移擴散器官特異性的分子標志物，可進一步增加臨床病例以論證。

綜上所述，CK5/6蛋白的表達與患者的OS和DFS顯著相關[24]。本研究僅發現CK5/6蛋白的表達與患者FDM顯著相關，并未發現與OS相關，認為與隨訪時間較短或者樣本量不夠有關。CK5/6作為分子標志物具有較好的預后預測價值，臨床在對乳腺癌進行分子分型的同時可常規檢測 CK5/6 表達并評估預后。