不同產地苦參質量評價

王夢桐,孫瑩瑩,榮樹良,朱鍵勛,李 勇,林 喆*

(1.長春中醫藥大學藥學院,吉林 長春 130117;2.梅河口市澤泉中草藥種植專業合作社,吉林 梅河口 135014)

苦參為豆科植物苦參Sophora flavescens Ait.的干燥根。春、秋二季采挖,除去根頭和小支根,洗凈,干燥,或趁鮮切片,干燥[1]。近年來,國內外對苦參的研究十分廣泛,涵蓋化學、活性、質量、藥理作用、臨床應用等,通過近幾年來的研究表明,苦參的化學成分主要有生物堿類和黃酮類[2-4]。生物堿中苦參型生物堿為主要活性成分,有多方面的藥理作用,如抗心律失常、抗菌、抗炎、抗風濕、抗腫瘤、抗過敏、抗病毒及生物反應調節作用等[5-10]。因此,本研究以擴大苦參藥用資源為目標,對吉林產區栽培苦參進行含有量測定,并依據2020 年版《中國藥典》 苦參項下相關內容與方法,同河北、河南、甘肅、內蒙古、山西等常用5 個產區的苦參藥材中苦參堿和氧化苦參堿進行含有量對比,以期為6 個產地苦參的質量評價提供實驗依據,進而實現對苦參藥用資源的進一步擴大和科學合理應用。

1 材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(日本島津公司)；XS205 型電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；ST-2000 旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)；KQ200B 型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑與藥物 苦參堿對照品(批號110805-201709)、氧化苦參堿對照品(批號110780-201508) 均購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈、無水乙醇為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。

1.3 樣品 苦參樣品于2017 年10 月采收于內蒙古、河南、甘肅、河北、山西、吉林梅河口6 個地區,經長春中醫藥大學藥學院林喆教授鑒定為豆科植物苦參Sophora fla-vescens Ait.的干燥根。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Platisil NH2色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相乙腈-無水乙醇-3% 磷酸溶液(8∶1∶1)；檢測波長220 nm；體積流量1.0 mL/min；進樣量對照品溶液5 μL,供試品溶液10 μL；理論板數按氧化苦參堿峰計算不低于2 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 采用2020 年版《中國藥典》 一部苦參項下含有量測定方法制備對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 采用2020 年版《中國藥典》 一部苦參項下含有量測定方法制備供試品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 系統適用性試驗 取“2.2” 項下對照品溶液和供試品溶液適量,在“2.1” 項色譜條件下進樣測定,記錄色譜圖,見圖1。苦參堿標準品液相色譜圖中苦參堿保留時間為17 min,氧化苦參堿保留時間29 min,理論板數均大于2 000。

2.3.2 線性關系考察 精密吸取“2.2.1” 項下對照品溶液100、200、300、400、500、600 μL 至10 mL 量瓶中,乙腈-無水乙醇(80∶20) 定容至刻線,在“2.1” 項色譜條件下進樣,以色譜峰面積積分值為縱坐標(Y),對照品濃度為橫坐標(X),分別進行線性回歸,得回歸方程分別為苦參堿Y=298 782X+607.14 (r=0.999 8)、氧化苦參堿Y=400 655X -5 890.3 (r=0.999 0),分別在0.04～0.37、0.12～1.83 μg 范圍內線性關系良好。

圖1 苦參中苦參堿、氧化苦參堿HPLC 色譜圖

2.3.3 精密度試驗 取質量濃度為50 μg/mL 苦參堿和0.15 mg/mL 氧化苦參堿對照品溶液,在“2.1” 項色譜條件下分別連續進樣6 次,測定峰面積。測得RSD 為1.95%,表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復性試驗 取山西苦參樣品約0.5 g,按“2.2.2” 下方法制備供試品溶液5 份,在“2.1” 項色譜條件下進行含有量測定,測得RSD 為1.56%,表明該方法重復性良好。

2.3.5 穩定性試驗 取山西苦參樣品,按“2.2.2” 下方法制備供試品溶液,在“2.1” 項色譜條件下,分別于0、2、4、6、8、10、12 h 進樣測定峰面積,測得氧化苦參堿和苦參堿RSD 分別為1.68%、1.27%,表明供試品溶液在12 h 內穩定性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 取山西苦參樣品0.3 g 共18 份,分兩大組,兩大組分3 小組分別精密加入苦參堿、氧化苦參堿對照品相當于樣品濃度的80%、100%、120%。按“2.2.2” 項下方法制備供試品溶液,另取“2.2.1” 項下苦參堿、氧化苦參堿對照品溶液進樣測定照,并計算苦參堿、氧化苦參堿低、中、高3 個濃度的加樣回收率。結果表明,苦參堿加樣回收率為97.9%～101.0%,平均回收率99.9%,RSD 為1.05%；氧化苦參堿加樣回收率為97.8%～101.9%,平均回收率100.1%,RSD 為1.19%。

2.4 樣品含有量測定 取6 個產區的苦參樣品,粉碎成粉末,過3 號篩。精密稱取0.3 g,河北、河南、甘肅、內蒙古、山西5 個產地各3 份；吉林梅河口產地取3 批樣品,每批3 份,共9 份。按“2.2.2” 項下方法制備供試品溶液。另取“2.2.1” 項下苦參堿、氧化苦參堿對照品溶液進樣測定,在“2.1” 項色譜條件下進樣,測得6 個不同產區供試品的中苦參堿、氧化苦參堿總含有量均大于1.2%,結果符合2020 年版《中國藥典》 規定,見表1。

表1 不同產區樣品中苦參堿、氧化苦參堿含有量測定結果（%，n=3）

3 討論

2020 年版《中國藥典》 一部項下規定苦參中苦參堿、氧化苦參堿總量不得低于1.2%[1]。實驗結果表明,6 個產地苦參藥材飲片均符合《中國藥典》 標準,其中河南含有量最高。

各產地間含有量及兩者相對含有量存在較大差異,除產地影響外,也可能與采收季節和生長年限有關[11],苦參堿與氧化苦參堿之間是否會隨著時間推移而相互轉化,或轉化成其他物質還有待進一步研究。2 種生物堿的藥理作用存在差別[12-15],雖然飲片符合《中國藥典》 含有量要求,但在臨床應用過程中藥效不穩定及能否真正達到某種特定藥效仍有待商榷。同時兩者均有一定毒性[16],其毒性與劑量的關系尚不明確。

苦參為常用傳統中藥,主要藥效物質基礎為生物堿與黃酮類,具有多種生物活性,而且苦參堿和氧化苦參堿并非專屬性有效成分,在質量評價方法中增加苦參指紋圖譜鑒定,建立真正的質量評價標志物,以期進一步提高苦參飲片質量的評價標準。