肺癌病人血清CD147表達及臨床意義 *

喬曉娟, 邢智偉, 趙美娜, 馬補換, 孫維廷, 劉彩霞

(內蒙古醫科大學附屬醫院,內蒙古呼和浩特010050)

CD147分子,又稱基質金屬蛋白酶誘導因子(extracellular matrixmetallo-proteinase inducer,EMMPRIN),可刺激成纖維細胞產生大量基質金屬蛋白酶從而促進腫瘤細胞的侵襲和轉移[1,2]。目前對肺癌病人血清中CD147表達臨床意義尚不明確。本研究擬通過檢測肺癌病人血清中CD147表達水平,分析其與臨床病理因素及預后因素的關系,明確其在肺癌診斷及預后中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇首都醫科大學附屬北京胸科醫院腫瘤科、胸外科2013-08～2014-06住院的初治肺癌病人82例為研究對象。均未接受手術、化療、放療、靶向及生物治療。所有病人均經病理和(或)細胞學確診。按美國癌癥聯合委員會(American Joint Committee on Cancer,AJCC)2010年第7版分期系統進行pTNM或cTNM分期。同期采集30例健康志愿者血清標本作為對照組。每一位入組病人、健康志愿者均知情同意并簽署留取血液標本知情同意書。每一份標本3000轉/min鐘離心10～15min后,收集血清置于-80℃冰箱保存,集中進行檢測。

1.2 主要試劑和儀器

CD147ELIAS 試劑盒購于武漢優爾生公司,BIO-RAD Mode1680酶標儀購于美國BIO-RAD公司。

1.3 實驗方法

ELISA法檢測血清中CD147水平。分別設標準孔、待測樣品孔、空白孔,向相應的孔中加入稀釋好的標準品或血清樣品,每個標準品及樣品均做復孔,100μL每孔。37℃溫育2h,棄去液體,甩干。每孔加檢測溶液A工作液100μL,37℃溫育1h,洗板3次。每孔加檢測溶液B工作液100μL,37℃溫育30min,洗板5次。每孔加底物溶液90μL,37℃避光顯色。每孔加終止溶液50μL,終止反應。用酶標儀在450nm波長測量各孔的OD值,根據酶標儀所測標準品OD值及對應濃度,制作出標準曲線及回歸方程式,將樣本的OD值代入方程,計算出樣本濃度,乘以稀釋倍數,得出血清中CD147的實際濃度。

1.4 隨訪

采用門診隨診和電話隨訪方式進行。隨訪時間截止至2017-06-30,仍存活病人按末次隨訪日期作為截尾數據。

1.5 統計學分析

所有數據經統計軟件SPSS19.0進行統計學分析,非正態分布的數據用中位數和范圍表示。分析分類變量之間關系,應用χ2檢驗。分析計量參數之間是否有差異,應用非參數檢驗。受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線的繪制應用SPSS19.0軟件進行操作,最佳臨界值(cut-off值)的確定在Excel表格中進行。應用 Kaplan-Meier 法計算生存曲線,并應用 Log-rank 檢驗進行比較。本研究以P<0.05(雙側檢驗)為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 肺癌病人及正常人血清CD147水平的檢測

ELISA法測定82例肺癌病人和30例健康志愿者血清CD147水平,結果顯示,肺癌病人血清CD147水平為563.77(范圍,50.32-910.80)pg/mL,健康志愿者血清CD147水平為381.05(范圍:43.38-474.52)pg/mL,肺癌病人血清CD147水平高于健康志愿者,兩者差異具有統計學意義(P<0.001)。

應用SPSS19.0繪制ROC曲線(見圖1),ROC曲線下面積為0.876(95%CI:0.812-0.939),曲線下面積差異有統計學意義(P<0.001)。血清CD147的cut-off值為466.14pg/mL時,敏感性:75.6%,特異性:96.2%,陽性預測值98.4%,陰性預測值59.1%。

以cut-off值466.14pg/mL為標準,肺癌病人血清CD147水平升高者占75.6%(62/82),僅有3.3%(1/30)健康志愿者血清CD147水平升高,肺癌病人血清CD147陽性率高于健康對照組,二者差異有統計學意義(P <0.001)。

2.2 肺癌病人血清CD147水平與臨床特征的關系

肺癌病人血清CD147水平與遠處轉移及TNM分期相關,與病人性別、年齡、吸煙狀態、PS評分、組織學類型、原發腫瘤大小、區域淋巴結轉移無相關性(P>0.05)。M1病人血清CD147水平571.35(范圍，50.32-898.71)Pg/mL顯著高于M0病人489.72(范圍，50.32-898.71)Pg/mL,差異有統計學意義(P=0.037)。Ⅳ期病人血清CD147水平顯著高于Ⅲ期病人,差異均有統計學意義(P=0.037)。

2.3 不同病理類型病人血清CD147水平與臨床特征關系

非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)病人血清CD147水平與病人性別、年齡、吸煙狀態、PS評分、組織學類型、原發腫瘤大小、區域淋巴結轉移、遠處轉移及TNM分期均無相關性(P >0.05)。

入組的SCLC病人29例,為Ⅲ期和Ⅳ期接受化療病人,無T1及N0、N1病人。SCLC病人血清CD147水平與遠處轉移及TNM分期相關,M1病人血清CD147水平顯著高于M0病人,差異有統計學意義(P=0.043)。Ⅳ期病人血清CD147水平顯著高于Ⅲ期病人,差異均有統計學意義(P=0.043)。而SCLC病人血清CD147水平性別、年齡、吸煙狀態、PS評分、原發腫瘤大小、區域淋巴結轉移均無相關性(P >0.05)。

2.4 肺癌病人血清CD147表達與肺癌病人生存的關系

以cut-off值466.14pg/mL為標準,將肺癌病人分為CD147低表達組和CD147高表達組,進行3年隨訪,生存分析結果顯示血清CD147表達與肺癌病人生存無關(P>0.05)。生存曲線提示與CD147高表達組比較,CD147低表達組病人生存期有延長趨勢,考慮CD147表達水平可能與肺癌病人的遠期生存相關(見圖2)。

3 討論

惡性腫瘤的侵襲和轉移往往是腫瘤治療失敗的主要原因,其相關的細胞和分子機制極為復雜[3]。近年來,在肺癌侵襲轉移分子機制的研究中發現許多與肺癌侵襲轉移有關的物質。CD147分子,是一種高表達于腫瘤細胞表面的糖蛋白,來源于人肺癌細胞系LX-1,屬于免疫球蛋白超家族。CD147在腫瘤發展過程中起到重要調控作用,通過一種和(或)多種信號通路使MMPs 的分泌增加,進而促使腫瘤細胞生長及侵襲。并且能調節腫瘤細胞增生和血管形成[4]。

目前研究表明:CD147在胃癌、頭頸部鱗癌等多種惡性腫瘤組織中表達增高,與腫瘤發生及發展密切相關[5,6]。Xu[7]的研究結果顯示:非小細胞肺癌組織中CD147高表達,與腫瘤的進展和預后相關。袁鈴[8]的研究同樣提示:非小細胞肺癌組織中CD147表達明顯高于癌旁組織及其相對應的正常肺組織,結合臨床病理特征發現CD147表達與腫瘤分化程度、腫瘤大小、是否伴淋巴結轉移及TNM 分期密切相關。但目前對肺癌病人血清中CD147表達臨床意義尚不明確。本研究應用ELISA法檢測肺癌病人血清中CD147水平,分析其與臨床病理參數的關系,探討肺癌病人血清CD147水平的臨床意義。

本實驗結果顯示肺癌病人無論是血清CD147水平還是血清CD147陽性率均顯著高于健康對照組,血清CD147水平有可能作為肺癌診斷的分子標志物。血清CD147診斷肺癌的ROC曲線下面積為0.876,敏感性:75.6%,特異性:96.2%,提示血清CD147在肺癌中的診斷效能較好。

本研究檢測了肺癌病人血清CD147水平,結果顯示血清CD147水平與遠處轉移及TNM分期相關,隨著遠處轉移的出現及TNM分期的進展,血清CD147的水平增高,提示CD147在腫瘤的進展中發揮著重要作用。

進一步分析不同病理類型血清CD147水平與臨床特征關系,結果顯示:NSCLC病人血清CD147水平與臨床特征無關,而SCLC病人血清CD147水平與遠處轉移及TNM分期相關。與NSCLC相比,SCLC具有腫瘤倍增速度快,惡性程度高,較早發生廣泛轉移,具有更高的侵襲性,CDl47通過刺激成纖維細胞產生大量基質金屬蛋白酶從而促進腫瘤細胞的侵襲和轉移,有可能在SCLC發展過程中起重要作用。

進一步對肺癌病人血清CD147表達水平與生存關系的研究顯示,血清CD147低表達組與高表達組生存期的差異無統計學意義(P=0.155)。但CD147低表達組病人生存期有延長趨勢,考慮CD147表達水平可能與肺癌病人的遠期生存相關。

本實驗結果提示血清CD147水平有可能作為肺癌診斷的分子標志物。血清CD147表達水平與遠處轉移及TNM分期有關,且分層分析顯示高侵襲性SCLC病人血清CD147表達水平與遠處轉移及TNM分期同樣相關,血清CD147水平有可能是小細胞肺癌預后的標志物,有待進一步探究。因本實驗樣本量少,實驗結論只有一定的參考意義,只有擴大樣本量,才能更精確分析CD147在肺癌診斷及預后中的價值。