14 741例兒童7種常見(jiàn)呼吸道病毒檢測(cè)結(jié)果分析

蘇玉萍， 林建成， 吳海明， 徐 錦

（1. 廈門市兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，福建 廈門 361006；2.復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，上海 201102）

急性呼吸道感染是兒科常見(jiàn)的感染性疾病，大部分由呼吸道病毒引起，且不同地區(qū)引起呼吸道感染的病毒種類及流行特征存在差異，對(duì)治療藥物的敏感性也存在差異。本研究對(duì)廈門市兒童醫(yī)院住院患兒流感病毒A型（Influenza A，IFA）、流感病毒B型（Influenza B，IFB）、呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）、腺病毒（Adenovirus，ADV）、副流感病毒1型（Parainfluenza 1，PIV1）、副流感病毒2型（Parainfluenza 2，PIV2）和副流感病毒3（Parainfluenza 3，PIV3）抗原進(jìn)行檢測(cè)，為兒童呼吸道病毒感染的臨床診療提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2016年3月—2018年2月廈門市兒童醫(yī)院住院患兒14 741例，其中男9 141例、女5 600例，年齡0～12歲。根據(jù)患兒年齡分為4組：嬰兒組（＜1歲）、幼兒組（1～＜3歲）、學(xué)齡前組（3～＜6歲）和學(xué)齡組（6～＜12歲）。本研究四季劃分為：3～5月為春季、6～8月為夏季、9～11月為秋季、12～次年2月為冬季。

1.2 試劑與儀器

IFA、IFB、RSV、ADV、PIV1、PIV2、PIV3抗原檢測(cè)試劑盒（美國(guó)INC公司，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為YZB/USA5571-2014），Lecia DM2500型熒光顯微鏡（德國(guó)萊卡公司）。

1.3 方法

咽拭樣本采集：采用植絨拭子從患兒鼻孔插入到達(dá)鼻咽部，旋轉(zhuǎn)2～3圈放入無(wú)菌儲(chǔ)存管中；灌洗液樣本采集：在患兒處于仰臥體位時(shí)，將1～2 mL 0.9%氯化鈉溶液注入患兒鼻腔，吸出至無(wú)菌儲(chǔ)存管中，立即送檢。將樣本劇烈渦旋15 s以分離黏附的細(xì)胞，用磷酸鹽緩沖液（pH值7.2～7.6）清洗沉淀2次，將底部沉淀物點(diǎn)樣于載玻片上，吹干后用丙酮固定細(xì)胞5～10 min，晾干，染色后用熒光顯微鏡觀察結(jié)果。同時(shí)做陰性和陽(yáng)性對(duì)照（試劑盒配套），以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。判斷標(biāo)準(zhǔn)：熒光顯微鏡下觀察到蘋果綠熒光的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞；當(dāng)放大倍數(shù)為100倍時(shí)，在視野中找到2或2個(gè)以上陽(yáng)性細(xì)胞判斷為陽(yáng)性。在每次進(jìn)行染色程序時(shí)，均需同時(shí)對(duì)1片未使用過(guò)的呼吸道病毒抗原對(duì)照玻片進(jìn)行染色，以保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性。陽(yáng)性孔應(yīng)有多個(gè)感染細(xì)胞，呈明亮的蘋果綠熒光；而未感染的陰性細(xì)胞則被試劑中包含的伊文斯藍(lán)負(fù)染為暗紅色。陰性孔內(nèi)應(yīng)只有被染為暗紅色的陰性細(xì)胞。陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照應(yīng)表現(xiàn)為相對(duì)應(yīng)的熒光。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 7種呼吸道病毒抗原陽(yáng)性率

14 741例呼吸道感染的患兒中，7種常見(jiàn)呼吸道病毒抗原陽(yáng)性3 693例，陽(yáng)性率為25.05%。其中男性患兒陽(yáng)性2 355例（15.98%）、女性患兒陽(yáng)性1 338例（9.08%），不同性別患兒感染陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。患兒7種呼吸道病毒抗原陽(yáng)性率由高到低分別為RSV（15.15%）、ADV（3.49%）、PIV3（3.12%）、IFA（1.08%）、IFB（1.01%）、PIV1（0.91%）、PIV2（0.29%）。

2.2 不同年齡、不同性別患兒7種呼吸道病毒抗原陽(yáng)性率比較

不同年齡患兒7種常見(jiàn)呼吸道病毒抗原陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中嬰兒組陽(yáng)性率最高（31.47%），學(xué)齡組陽(yáng)性率最低（11.21%），且學(xué)齡組未檢出PIV3抗原。嬰兒組ADV、RSV和學(xué)齡前組IFB不同性別患兒比較，陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；幼兒組、學(xué)齡組不同性別患兒比較，陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 不同季節(jié)患兒呼吸道病毒感染陽(yáng)性率比較

2016年夏季RSV感染陽(yáng)性率最高（24.12%），其次為ADV（8.14%）；除PIV2外，其余6種呼吸道病毒陽(yáng)性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。2017年秋季RSV陽(yáng)性率最高（20.42%）、夏季ADV陽(yáng)性率最高（3.42%）；除PIV1、PIV3外，其余5種呼吸道病毒陽(yáng)性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同季節(jié)患兒呼吸道病毒抗原陽(yáng)性率見(jiàn)表2。

表1 不同年齡組不同性別患兒7種常見(jiàn)呼吸道病毒抗原陽(yáng)性率比較 例（%）

表2 不同季節(jié)7種常見(jiàn)呼吸道病毒抗原陽(yáng)性率情況比較 例（%）

3 討論

呼吸道病毒是引起急性呼吸道感染的最主要病原體，也是導(dǎo)致患者發(fā)病和死亡的主要原因，尤其是6歲以下的兒童[1]。引起急性呼吸道感染的病毒在不同地區(qū)或相同地區(qū)不同年份存在一定差異[2]，甚至由于地理、氣候以及社會(huì)經(jīng)濟(jì)條件的差異，不同國(guó)家或地區(qū)、不同人群的病毒病原學(xué)和流行病學(xué)表現(xiàn)也會(huì)出現(xiàn)差異[3-4]。因此，了解不同地區(qū)病原體的流行病學(xué)特征，為兒童呼吸道感染提供診斷與預(yù)防依據(jù)，具有重要意義。

本研究納入的廈門地區(qū)14 741例呼吸道疾病患兒中，檢出3 693例陽(yáng)性，占呼吸道疾病的25.05%。其中男性患兒陽(yáng)性2 355例，陽(yáng)性率為15.98%；女性患兒1 338例，陽(yáng)性率為9.08%。除學(xué)齡組患兒均未感染PIV3外，男、女性患兒其余6種呼吸道病毒陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究的7種病毒中，以RSV和ADV為主要感染病原體。RSV感染率陽(yáng)性率為15.15%，低于武漢地區(qū)的19.20%[5]。本研究中，嬰兒組RSV陽(yáng)性率明顯高于其他3個(gè)年齡段，且RSV感染陽(yáng)性率明顯高于其余6種病毒。而武漢地區(qū)嬰兒組RSV感染的陽(yáng)性率僅為3.9%，明顯低于IFB的陽(yáng)性率（15.9%）[6]。本研究結(jié)果顯示，隨著患兒年齡的增長(zhǎng)，RSV陽(yáng)性率呈明顯下降趨勢(shì)，與文獻(xiàn)報(bào)道[6-7]一致，可能與患兒來(lái)自母親的抗體對(duì)外界接觸傳播RSV感染無(wú)保護(hù)作用有關(guān)，隨著年齡的增長(zhǎng)，患兒免疫系統(tǒng)逐漸完善，RSV感染率逐漸下降。

本研究ADV感染率陽(yáng)性率為3.49%，明顯低于北京地區(qū)的9.56%[8]，在各年齡組中，學(xué)齡前組ADV陽(yáng)性率最高（6.10%），嬰兒組ADV感染陽(yáng)性率低于其他3個(gè)年齡段，與武漢地區(qū)患兒ADV感染陽(yáng)性率[6]一致。

本研究中，患兒IFB感染陽(yáng)性檢出率為1.01%，明顯低于武漢地區(qū)（8.27%）[6]；且隨年齡增長(zhǎng)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，PIV1、PIV2和PIV3陽(yáng)性檢出率隨年齡增長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)；PIV3陽(yáng)性檢出率嬰兒組最高（4.56%），學(xué)齡組未檢出陽(yáng)性，增長(zhǎng)趨勢(shì)與上海地區(qū)[7]一致。

本研究結(jié)果表明，廈門地區(qū)不同季節(jié)7種常見(jiàn)呼吸道病毒感染陽(yáng)性率存在差異，以冬季最高，春季次之；除PIV2（2016年）和PIV1、PIV3（2017年）外，IFA、IFB、RSV、ADV不同季節(jié)陽(yáng)性檢出率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

廈門地區(qū)12歲以下兒童不同年齡段、不同季節(jié)7種常見(jiàn)呼吸道病毒感染陽(yáng)性率不同。對(duì)呼吸道常見(jiàn)病毒譜進(jìn)行檢測(cè)可為患兒急性呼吸道感染的早期預(yù)防和臨床治療提供參考。但本研究尚存在以下不足之處：樣本來(lái)源僅為廈門市兒童醫(yī)院住院患兒鼻咽拭子或灌洗液，并不能完全反映廈門地區(qū)兒童呼吸道病原體流行情況。此外，本研究只納入7種常見(jiàn)呼吸道病毒，不能完全反映急性呼吸道感染病原體譜。后續(xù)將完善樣本來(lái)源及擴(kuò)大病原體譜，為臨床提供更全面的參考數(shù)據(jù)。