致陸良縣哺乳仔豬腹瀉病原分析

董昱廷 王喬平

（曲靖市動物疫病預防控制中心，云南曲靖 655000）

1 材料與方法

1.1 材料

樣品采集自陸良縣5個規模化豬場，用棉拭子取腹瀉仔豬稀糞樣本147份，組織病料5份.

1.2 方法

1.2.1 大腸桿菌、沙門氏菌的分離鑒定

將棉拭子取得的稀糞樣本分別涂布于麥康凱瓊脂培養基上，37℃培養24 h，選取疑似大腸桿菌和沙門氏菌單個菌落，接種到新麥康凱瓊脂培養基上37℃純化培養24h。將分離菌株涂片，進行革蘭氏染色，在顯微鏡油鏡下觀察細菌形態。

取純培養菌落接種肉湯培養基，于37℃培養24h，用接種針蘸取菌液接種于自制生化管，接種項目為三糖鐵（TSI）、葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、MR試驗、V-P試驗，確定菌屬。

伊紅美藍培養基培養實驗，將分離菌株按常規細菌接種方法接種到伊紅美蘭培養基上，37℃恒溫培養24-48h，在折射光下觀察菌落，長出菌落呈紫黑色，帶有金屬光澤的為致病性大腸桿菌，菌落呈紫黑色，無金屬光澤的為非致病性大腸桿菌。

1.2.2 PCV、PRV的鑒定

取1000μl DEPC水到1.5ml離心管，把采集的糞便樣本（棉拭子）放入浸泡20min，4℃10000r離心10min，收集上清液4℃保存備用。

病毒DNA按照百泰克生物技術有限公司的全血基因DNA快速提取試劑盒的說明書操作步驟提取。

1.2.3 PEDV、TEGV的鑒定

取700μl上述病料上清液放入1.5ml離心管，加入800μl RNAiso Plus，充分混勻，靜置10min，4℃10000r離心10min；吸取上清液600μl到新的離心管，加入氯仿300μl，混勻后靜置10min，4℃10000r離心10min；吸取上清液400μl，加入400μl異丙醇，混勻，靜置10min，4℃10000r離心10min；棄上清液后加入1ml乙醇（DEPC水配制），4℃10000r離心5min；棄液干燥，加入冷藏的DEPC水20μl，混勻后瞬時離心，立即進行反轉錄。

2 結果與分析

來源于陸良縣的5個豬場均分離到大腸桿菌，152份樣品中陽性病料數147份，陽性豬場率100%。大腸桿菌陽性率為100%（152/152）。

A、B、C、D四個豬場分離到沙門氏菌，152份樣品中陽性樣品數26份，陽性豬場率80%，沙門氏菌陽性率為17.11%（26/152），其中19份來源于A豬場，3份來源于B豬場，3份來源于C場，1份來源于D場。A、B、C、D豬場的陽性率分別為為57.58%（19/33）、15%（3/20）、11.11（3/27）、14.29%（1/7）。

A豬場和E豬場檢測到199bp的PEDV特異條帶。總152份樣本，陽性樣品數共8份，陽性豬場2個。PEDV的陽性率為5.26%（8/152），其中，有6份來源于A豬場，有2份來源于E豬場，A豬場、E豬場的PEDV陽性檢出率分別為18.18%（6/33）、3.08%（2/65）。B、C、D三個豬場PEDV的陽性檢出率為零。5個豬場均未檢測到TGEV。

A豬場、C豬場、E豬場檢測到705bp的PCV特有條帶，總152份樣本中陽性病料數69份，陽性豬場3個。PCV的陽性率為45.39%（69/152），其中，有20個樣品來源于A豬場的，有2個樣品來源于C豬場，有47個樣品來源于E豬場的。A豬場、C豬場、E豬場PCV的陽性檢出率分別為60.61%（20/33）、7.41%（2/27）、72.31%（47/65）。B和D兩個豬場的PCV陽性檢出率為零。5個豬場均未檢測到PRV。

3 討論

PEDV于1971年在英國發現，會引起豬的豬流行性腹瀉（PED），我國自20世紀80年代以來陸續有該病的報道。PCV可分為PCV-1和PCV-2兩個血清型。PCV-2對豬具有致病性，可引起豬斷奶后系統衰弱綜合征、皮炎和腎炎綜合征、增生性壞死性間質性腎炎。沙門氏菌會引起豬的沙門氏菌病又稱豬副傷寒，是一種世界性疾病，在美國依阿華沙門氏菌病所造成的損失僅次于豬痢疾。本次試驗中，被檢的5個豬場中，有2個豬場混合感染大腸桿菌和沙門氏菌，1個豬場混合感染大腸桿菌、PCV和PEDV，1個混合感染大腸桿菌、沙門氏菌和PCV；1個混合感染大腸桿菌、沙門氏菌、PCV和PEDV。可見云南省陸良縣仔豬腹瀉病的病原混合感染現象十分嚴重，應做好加強生物安全措施；免疫接種，疫苗選擇需慎重，接種時間需嚴格遵守；加強飼養管理，注意畜舍的濕度、溫度、衛生情況；提高母豬飼料中維生素的營養水平，適當使用免疫增強劑；對疑似發病豬群做好隔離工作，對豬群緊急接種。