狂犬病診斷技術研究

鄭守潔 陳炫華

（廣東省湛江市畜牧技術推廣站，廣東湛江 524094）

狂犬病是由狂犬病病毒引起的一種人畜共患的高致死性傳染病，該病的發病范圍廣，致死率高，對人畜的威脅很大。狂犬病是一種古老的疾病，遠在公元前556年在《左傳》上就有記載，那時候人們就已經認識到瘋狗咬傷人后可導致發病。狂犬病毒潛伏在已經發病的犬的唾液腺內，人畜被帶毒的犬咬傷后，如果沒有正確處理傷口，就會感染。近年來，隨著犬養殖數量的增加以及各地對犬的免疫注射開展情況的差異，導致狂犬病的疫情有所提升。本文對此病的診斷方法做了詳細的闡述，以期提高診斷效率。

1 根據流行病學診斷

人和各種畜禽都對狂犬病比較易感，其中犬、狐、狼為人畜狂犬病的傳染源和病毒貯存的宿主。病毒通過病畜和帶毒者的唾液大量排出到外界環境中，健康的動物通過損傷或咬傷的皮膚黏膜感染發病；近年來，據研究報道，狂犬病毒也可以經呼吸道和消化道傳染。此病的發生沒有季節性，一年四季均可發生，每年的4～5月份，犬的性活動旺盛，發病率較高，感染后的致死率為100%。

2 根據臨床癥狀診斷

狂犬病的潛伏期長短不一，短的為2～8周，長的可達數月或1年以上。感染后，各種動物的臨床癥狀大體相似，一般分為狂暴型和麻痹型。

犬的狂暴型可分為三個階段，分別為前驅期、興奮期和麻痹期。前驅（沉郁）期一般持續0.5～2d，病犬精神沉郁，性情反常，喜歡呆在黑暗處，不愿接近人，不聽呼喚，強迫牽引常會咬傷畜主，瞳孔散大，容易興奮，望空撲咬，性欲較強，唾液的分泌量增多；興奮（狂暴）期一般持續2～4d，病犬高度興奮，常攻擊人畜，斜視，無目的的到處亂跑，恐水，犬的狂暴與沉郁常常交替出現，隨著病情的發展，咽喉麻痹，吞咽困難；麻痹期一般持續1～2d，病犬張口垂舌，口中流出含有泡沫的唾液，四肢及后驅麻痹，臥地不起，最后死亡。

犬的麻痹型表現為興奮期很短，或者沒有明顯的興奮癥狀就進入麻痹期。病犬因為喉頭、下頜、后軀、舌咽等部位的麻痹而亡。病程很短，多為2～4d 死亡。

其他動物的狂犬病癥狀與犬的狂犬病非常相似，但是牛多為興奮型，表現為反芻異常，前胃馳緩，便秘等癥狀，常常會被誤診為消化道疾病；病豬常出現嘶啞尖叫，躲在角落；貓也為興奮型，喜歡接近人，行動迅速，對人的威脅較大。

3 病原學診斷

3.1 病毒分離

無菌采集病死動物的新鮮腦組織，腦干要包含在采集的腦組織混合物中，將采集到的病毒標本根據需要，采用不同的方法進行保存，常用的方法有兩種，分別為低溫冷凍保存和冷凍真空凍干保存。狂犬病毒的分離方法主要有兩種，一種為小鼠腦內接種試驗，另一種為快速組織培養感染試驗，后一種方法需要的時間短，費用低，比較經濟。

3.2 熒光抗體試驗

熒光抗體試驗是最普遍的用于診斷狂犬病的方法，這種方法是將采集的樣品制成涂片，然后滴加異硫氰酸酯熒光素和狂犬病毒免疫球蛋白，干燥、沖洗后，放在熒光顯微鏡下觀察是否存在狂犬病毒抗原。這種方法適用于新鮮病料或冷凍病料的檢測，比較靈敏，迅速，準確度高，檢出率高達95%以上。但是這種方法也受到很多因素的影響，如樣品的性質、檢測人員操作的熟練程度、熒光抗體的品質以及熒光顯微鏡質量等，有時會出現誤判的可能。

3.3 快速酶免疫診斷

該方法也是檢測狂犬病抗原的一種免疫化學實驗。該檢測方法簡單、方便、快速，特別適用于大批量樣品的流行病學調查，但需注意的是該試劑盒在運輸過程中必須進行冷藏，且在實驗過程中移液器、水浴箱校正時很容易出現誤差造成假陰性或假陽性事件發生，因此，在操作中必須嚴格注意實驗條件。此種方法需要腦組織為樣品，也不適合動物臨死前的檢測。

4 血清學診斷

4.1 病毒熒光抗體中和試驗

這種方法是運用梯度稀釋血清中和固定量病毒的原理，來快速、安全的檢測狂犬病毒。這種方法重復性好，敏感度較高，容易操作，但是比較費時間，不適合與大批量的檢測。

4.2 斑點酶聯免疫檢測法

該方法需以微孔膜為載體，如若酶免疫反應結果為陽性，微孔膜上就會出現斑點。其具體操作步驟為制備樣品、點樣、滴加酶標抗體、加底物、再洗膜最后顯色，該方法檢測結果的準確程度受膜、封閉液、洗滌劑以及抗體結合物的影響。這種檢測方法需要的時間短，靈敏，特異性強，適合于大批量樣品的檢測，也適合于基層單位的推廣應用。

4.3 酶聯免疫吸附試驗

這種方法操作簡單，不需要制備活病毒，對血清的品質也要求不高，需要的時間短，適合大批量樣品的快速檢測工作，也適用于對貓、狗接種疫苗后血清樣品中的狂犬病抗體的定性檢測。但是這種方法的靈敏度較低，據研究發現，當抗體保護水平在0.5 IU/cm3左右時，抗體含量的微量的變化就可以影響檢測結果，導致假陽性或假陰性現象的出現。

5 結語

狂犬病是一種危害嚴重的人畜共患病，隨著人們生活水平的提高，飼養貓、犬的數量大幅度提升，但是人們對寵物的管理水平較低，對疾病的預防意識也不強，導致流浪狗、貓的數量增加，患病的幾率提升。預防狂犬病發生的關鍵就是加強對貓、狗等寵物的管理，定期進行預防免疫，定期進行抗體檢測，及時發現和確診疑似病例。當被貓、狗咬傷后要及時處理傷口并進行疫苗緊急接種。