血清CEA、CYFRA21-1、CTC及PNI在胃癌腹膜轉移患者中的診斷價值

李劍峰，丁才智，周化敏

湖北省松滋市人民醫院檢驗科，湖北松滋 434200

胃癌是消化系統常見的惡性腫瘤，我國是胃癌高發國家之一，每年新發胃癌患者約40萬，死亡患者約30萬，占每年全球胃癌死亡人數的40%[1]。早期胃癌患者通常并無明顯癥狀，出現臨床癥狀時大多已是中晚期，治療后5年生存率低于10%，甚至部分患者在確診時就已經出現腹膜轉移，喪失手術治療的機會。所以，早期發現胃癌可提高患者治療效果和生存率[2]。目前，臨床用于診斷胃癌腹膜轉移的方法包括內鏡檢查、病理檢查、腹部CT、B超等，但上述檢查中內鏡檢查、病理檢查操作較為煩瑣，技術要求高，而腹部CT、B超等影像學檢查靈敏度、特異度較低。因此，尋找簡單、便捷的胃癌腹膜轉移診斷方法成為當前研究的熱點。血清癌胚抗原(CEA)、細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、循環腫瘤細胞(CTC)、預后營養指數(PNI)與腫瘤細胞的分化、浸潤、轉移，腫瘤患者的預后存在顯著相關性[3-4]。臨床中對于上述4項指標聯合檢測在胃癌腹膜轉移中的應用價值研究較少，故本研究對此進行了相關分析，以期為臨床診斷、治療提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年11月至2019年2月本院收治的胃癌患者93例作為研究對象，其中22例腹膜轉移患者為轉移組，71例無轉移患者為未轉移組。另選取88例同期健康體檢者為對照組。轉移組中男14例，女8例；年齡46～65歲，平均(55.62±8.77)歲。未轉移組中男37例，女34例；年齡45～66歲，平均(55.07±9.23)歲。對照組中男46例，女42例；年齡45～65歲，平均(55.28±9.17)歲。3組性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2納入及排除標準 納入標準：(1)臨床資料完整；(2)腹膜轉移患者不伴其他部位轉移。排除標準：(1)合并其他惡性腫瘤患者；(2)接受過化療、放療或免疫治療患者；(3)合并心、肝、腎等重要臟器嚴重疾病或功能不全患者；(4)合并免疫系統疾病或凝血功能障礙患者；(5)重度營養不良患者。

1.3方法

1.3.1CEA、CYFRA21-1檢測 抽取清晨空腹靜脈血4 mL，室溫下靜置后常規分離血清，將血清保存至-20 ℃冰箱中待測。使用貝克曼庫爾特公司生產的DXI800全自動免疫分析儀及配套試劑進行檢測，操作過程嚴格按照廠家提供的說明書進行。

1.3.2CTC檢測 抽取清晨空腹靜脈血4 mL，離心后加入磷酸鹽緩沖液(PBS)45 mL，再次離心5 min后棄上清液，加入紅細胞去除液45 mL，放置于垂直混勻儀中，室溫下充分裂解紅細胞；離心5 min后棄上清液，300 μL PBS重懸細胞沉淀，將適量磁珠加入細胞中，水平勻速傾斜搖晃20 min，讓其與細胞充分結合。加入3 mL分離介質于離心管內，將結合磁珠懸液疊加至分離介質頂層中離心，離心結束后將細胞層吸出，轉移至離心管內，再次離心5 min，棄上清液后加入1 mL PBS。將標本轉移至2 mL離心管內，放置于磁力架上2 min，隨后再將標本轉移至1.5 mL離心管內，離心3 min，棄上清液；加入100 μL固定液，充分混勻后將其涂片于載玻片上，放入烘箱中33 ℃干燥，24 h內進行后續處理。將標本經固定液固定，乙醇脫水后放置于室溫下晾干，加入100 μL CEP-8/CEP-17，封片后放于雜交儀中變性雜交1.5 h；將標本放置于43 ℃甲酰胺工作液中，洗脫探針15 min，隨后放入2×枸櫞酸鈉緩沖液中洗滌2次。將配置完成的CD45熒光抗體加入標本中，放入濕盒內，33 ℃烘箱孵育1 h；將熒光抗體吸干，滴加10 μL 4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)于標本中，蓋玻片封片，于熒光顯微鏡下觀察、計數。

1.3.3計算PNI 抽取靜脈血進行血清清蛋白(ALB)檢測，PNI=ALB水平(g/L)+5×外周血淋巴細胞計數(×109/L)。

2 結 果

2.13組PNI、CTC、CEA、CYFRA21-1水平比較 轉移組CTC、CEA、CYFRA21-1水平高于未轉移組與對照組，PNI低于未轉移組與對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；未轉移組CTC、CEA、CYFRA21-1水平高于對照組，PNI低于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組PNI、CTC、CEA、CYFRA21-1水平比較

2.2CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI單獨及聯合診斷胃癌腹膜轉移的效能 ROC曲線分析結果顯示，CTC診斷胃癌腹膜轉移的靈敏度為63.6%、特異度為98.6%、AUC為0.857，高于CEA、CYFRA21-1、PNI單獨診斷；CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI聯合診斷胃癌腹膜轉移的AUC為0.906，高于各項指標單獨診斷。見圖1～3、表2。

圖1 CEA、CYFRA21-1、CTC診斷胃癌腹膜轉移的ROC曲線

圖2 PNI 診斷胃癌腹膜轉移的ROC曲線

圖3 CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI 4項聯合診斷胃癌腹膜轉移的ROC曲線

表2 CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI單獨及聯合診斷胃癌腹膜轉移的效能

3 討 論

胃癌腹膜轉移的機制尚不明確，有研究認為“種子-土壤學說”可能是胃癌腹膜轉移的機制，原發性胃癌細胞浸潤漿膜形成脫落的“種子”，而這些“種子”具有較強的侵襲與轉移能力，在各種因素作用下黏附于腹腔臟器或網膜，隨后著床形成胃癌轉移灶[5-6]。CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI等腫瘤標志物檢測對胃腸道腫瘤早期診斷、預后判斷、療效評價具有重要意義[7-8]。

本研究結果表明，胃癌腹膜轉移患者CTC、CEA、CYFRA21-1水平均高于未轉移患者與健康對照者，PNI低于未轉移患者與健康對照者；未轉移患者CTC、CEA、CYFRA21-1水平均高于健康對照者，PNI低于健康對照者。這提示胃癌腹膜轉移患者與未轉移患者均存在PNI、CTC、CEA及CYFRA21-1水平變化，且其可能與胃癌的發生、發展有關。CEA是腫瘤相關抗原的一種，廣泛存在于消化系統腫瘤中，在正常胚胎組織與健康人血清中也可被檢出。當腫瘤細胞失去極性時，其分泌的CEA增多，排出受阻，進入人體血液循環與淋巴循環中的CEA增多，導致CEA水平增高[9]。有研究指出，CEA不僅是胃癌的診斷標志物之一，在結直腸癌、乳腺癌、肺癌診斷中也均具有較高的價值[10-12]。正常情況下，CYFRA21-1在血清中水平較低，其主要存在于腫瘤細胞的細胞質中，腫瘤細胞壞死或被溶解時CYFRA21-1大量釋放，因此，在各類腫瘤中均可檢測到CYFRA21-1水平升高[13]。臨床研究表明，CTC可作為多種腫瘤預后、復發和轉移的評估指標，且血液中CTC越多，患者預后越差，出現復發、轉移的概率越高[14-15]。有研究指出，PNI是胃癌腹膜轉移患者預后不良的獨立危險因素，PNI越低，患者預后越差[16]。

本研究進一步行ROC曲線分析CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI對胃癌腹膜轉移患者的診斷價值，結果顯示，CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI單獨診斷時具有較高的特異度，但靈敏度均相對較低，考慮這可能與胃癌腹膜轉移患者與未轉移患者間樣本量差異較大有關。CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI 4項指標聯合診斷胃癌腹膜轉移的AUC為0.906，高于各項指標單獨診斷，提示4項指標聯合檢測對胃癌腹膜轉移具有較高的診斷價值，在一定程度上彌補了單一指標診斷靈敏度較低的缺陷。

綜上所述，胃癌腹膜轉移患者與未轉移患者均存在CTC、PNI、CEA及CYFRA21-1水平變化，其可能與腫瘤的發生、發展有關。CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI聯合診斷胃癌腹膜轉移的價值較高，臨床可將4項指標聯合檢測以提高診斷的準確性，減少漏診與誤診。