生鮮乳中抗生素殘留的檢測(cè)要點(diǎn)分析

劉 笑

（遼寧省檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證中心（遼寧省農(nóng)產(chǎn)品及獸藥飼料產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)院），沈陽 110036）

長(zhǎng)期以來，生鮮乳都憑借其豐富營(yíng)養(yǎng)價(jià)值備受人們喜愛，隨著人們物質(zhì)生活條件水平的快速提升，市場(chǎng)對(duì)生鮮乳供應(yīng)需求迅速增大，促進(jìn)了我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模化發(fā)展。在此過程中，一旦生鮮乳中出現(xiàn)殘留抗生素情況，則會(huì)難以保證食品安全，給人體正常機(jī)能造成破壞，十分不利于兒童健康成長(zhǎng)發(fā)育。鑒于此，本文從實(shí)際出發(fā)，分析了生鮮乳中抗生素殘留的檢測(cè)要點(diǎn)，旨在通過檢測(cè)技術(shù)的科學(xué)應(yīng)用，保證生鮮乳質(zhì)量，推動(dòng)我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)健康、持續(xù)進(jìn)步發(fā)展。

1 檢測(cè)材料準(zhǔn)備要點(diǎn)

技術(shù)人員按照規(guī)范無菌操作標(biāo)準(zhǔn)在養(yǎng)殖戶進(jìn)行樣品抽取，明確檢測(cè)所需生鮮乳樣品，科學(xué)保存與運(yùn)輸，保證樣品能夠滿足檢測(cè)需求。樣品送至實(shí)驗(yàn)室后，將MC培養(yǎng)基和嗜熱乳酸鏈球菌準(zhǔn)備好，同時(shí)準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照牛乳、氯化三苯基四氮唑等試劑，一般情況下對(duì)照牛乳來源為質(zhì)量檢驗(yàn)監(jiān)督部門進(jìn)行提供，實(shí)驗(yàn)所需檢測(cè)儀器包括滅菌試管、滅菌吸管、溫度計(jì)（100 ℃規(guī)格）、天平、恒溫培養(yǎng)箱、水浴鍋、溫箱等。

掌握以上檢測(cè)材料準(zhǔn)備要點(diǎn)，能夠給接下來的生鮮乳中抗生素殘留的檢測(cè)技術(shù)順利應(yīng)用打好鋪墊基礎(chǔ)，是檢測(cè)技術(shù)水平和質(zhì)量的基礎(chǔ)保證，應(yīng)引起重視，不可掉以輕心忽略準(zhǔn)備事宜。

2 掌握檢測(cè)方法原理

檢測(cè)技術(shù)人員使用國(guó)標(biāo)TTC（食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)匯編GB4789 系列2010 版，已根據(jù)衛(wèi)生部2010年5月26日的勘誤公告進(jìn)行更新）檢測(cè)法，依據(jù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)要求掌握應(yīng)用原理，在生鮮乳樣品中放入菌種，科學(xué)培養(yǎng)菌種，觀察菌種一定時(shí)間內(nèi)的變化，接著加入TTC 指示劑，此時(shí)樣品發(fā)生顏色變化，根據(jù)不同顏色確定生鮮乳內(nèi)各種抗生素的真實(shí)殘留情況。處于不增殖狀態(tài)的生鮮乳菌種，并不會(huì)出現(xiàn)還原顯色情況，處于增殖狀態(tài)的生鮮乳菌種，可看見變成紅色的變化。

3 掌握采樣技術(shù)應(yīng)用要點(diǎn)

生鮮乳樣品規(guī)格通常為500 mL，經(jīng)過消毒處理后蓋上樣品瓶蓋，使用習(xí)慣從樣品瓶?jī)?nèi)取出25 mL 用以備檢，將其向錐形瓶?jī)?nèi)（已含有滅菌生理鹽水225 mL）導(dǎo)入，人工手搖操作令錐形瓶?jī)?nèi)溶液均勻，保持室內(nèi)處于約15 ℃溫度環(huán)境，采取3500 r·min-1的速度進(jìn)行10 min離心操作。完成以上步驟后，取出最上層脂肪，向另外裝置導(dǎo)入剩下的脫脂乳并安全存放管理。

4 掌握菌種使用要點(diǎn)

規(guī)范移種菌種，脫脂乳作為培養(yǎng)基，培養(yǎng)環(huán)境為恒溫狀態(tài)，控制培養(yǎng)時(shí)間超過15 h，控制溫度約36 ℃即可，滅菌脫脂乳后，進(jìn)行1:1稀釋操作，合理存放。

5 掌握試驗(yàn)指示劑調(diào)劑要點(diǎn)

檢測(cè)技術(shù)人員要注意標(biāo)品的準(zhǔn)確稱量，嚴(yán)格控制使用量為TTC 1 g，將其裝進(jìn)燒杯內(nèi)，向燒杯倒入24 mL 蒸餾水，直到燒杯內(nèi)液體處于均勻狀態(tài)，再向棕色瓶導(dǎo)入，存放于冰箱內(nèi)（7 ℃），使用指示劑時(shí)需稀釋，按照1:5的比例稀釋即可，當(dāng)發(fā)現(xiàn)溶液呈現(xiàn)淡褐色、玉色情況時(shí)，指示劑不可再繼續(xù)使用。

6 嚴(yán)格規(guī)范試驗(yàn)操作步驟

首先，加熱處理樣品，將9 mL樣品取出，導(dǎo)入試管內(nèi)（160 mm×160 mm 規(guī)格），采取水浴方式對(duì)試管加熱處理，控制加熱時(shí)間5 min，控制試管處于80 ℃溫度條件，完成加熱操作后冷卻試管，直到溫度低于37 ℃。

其次，接種處理。向水浴內(nèi)（36±1℃）放入活性菌液（1 mL），控制培養(yǎng)時(shí)間2 h。

再次，顯色階段。把4%濃度TTC指示劑按照1:5比例進(jìn)行稀釋，將其中0.3 mL 取出來，導(dǎo)進(jìn)水浴內(nèi)開始培養(yǎng)，控制培養(yǎng)時(shí)間30 min，觀察顏色變化現(xiàn)象。

最后，復(fù)檢階段。準(zhǔn)備一式兩份檢測(cè)樣品，當(dāng)?shù)? 次檢測(cè)呈現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，需采取2 次檢測(cè)操作，同時(shí)開展陰陽性對(duì)照分析工作，將TTC、菌液、抗生素加入8 mL 無抗生素生鮮乳內(nèi)，作為復(fù)檢陽性對(duì)照組，將TTC、菌液、加入9 mL無抗生素生鮮乳內(nèi)，作為復(fù)檢陰性對(duì)照組。

7 掌握試驗(yàn)判定要點(diǎn)

觀察水浴內(nèi)培養(yǎng)發(fā)生的顏色變化時(shí)，要做到快速、及時(shí)，注意避光，當(dāng)抗生素殘留于生鮮乳內(nèi)，菌液放入檢測(cè)樣品進(jìn)行培養(yǎng)觀察后，沒有增殖現(xiàn)象出現(xiàn)，原因在于中實(shí)際加入進(jìn)入未被還原，因此顏色沒有變化。當(dāng)沒有抗生素殘留于生鮮乳內(nèi)，可觀察到增殖現(xiàn)象，被還原的TTC 呈紅色變化。判定試驗(yàn)時(shí)，發(fā)生紅色變化，可作出陰性判定結(jié)果，為原色情況，則可作出陽性判定結(jié)果。

8 抗生素殘留原因分析和控制對(duì)策

引起生鮮乳內(nèi)抗生素殘留的原因并不是單一的，在具體分析時(shí)要結(jié)合實(shí)際情況而行，常見原因包括以下幾方面：養(yǎng)殖戶面對(duì)動(dòng)物疫病現(xiàn)階段的多樣化發(fā)展趨勢(shì)，盲目使用抗生素治療，由于用藥不合理、混合用藥等引起殘留問題；養(yǎng)殖戶沒有進(jìn)行科學(xué)的修養(yǎng)期管理和執(zhí)行，引起抗生素超標(biāo)殘留在生鮮乳內(nèi)的問題；養(yǎng)殖人員將一定量抗生素加入飼料內(nèi)，奶牛通過飼料攝入提升了細(xì)菌耐藥性，自身免疫力降低，引起了體內(nèi)殘留超標(biāo)抗生素的問題。

針對(duì)以上情況，需加強(qiáng)對(duì)奶牛養(yǎng)殖抗生素使用的控制工作才能夠最大限度避免生鮮乳中發(fā)生抗生素殘留情況。在具體實(shí)踐中，可通過嚴(yán)格執(zhí)行休藥期；動(dòng)態(tài)監(jiān)管抗生素使用；做好環(huán)境衛(wèi)生管理；落實(shí)抗生素藥敏試驗(yàn)；構(gòu)建科學(xué)合理奶牛養(yǎng)殖模式；引入先進(jìn)奶牛養(yǎng)殖技術(shù)；按時(shí)接種疫苗加強(qiáng)疫病防治等途徑，多角度、全方位降低生鮮乳中抗生素殘留幾率，保障我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)良好發(fā)展。