犬細(xì)小病毒病研究進(jìn)展

黃雅琴 劉進(jìn)輝

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖南長沙 410128）

犬細(xì)小病毒病（Canine Parvovirus Infection，CP）是由犬細(xì)小病毒（Canine Parvovirus，CPV）引起的烈性傳染性疾病，對2～6月齡幼犬危害最大，嘔吐、腹瀉和出血性腸炎為主要臨床表現(xiàn)。該病在流行期間已分離出多株變異病毒，包括CPV-2、CPV-2a/2b、New CPV-2a/2b、CPV-2c（a）、CPV-2c（b） 和 CPV-2c。由于變異率高，該病至今一直在世界各地肆虐，給養(yǎng)犬業(yè)造成極大的威脅。

1 犬細(xì)小病毒

（1）CPV的形態(tài)結(jié)構(gòu)

CPV屬于細(xì)小病毒科（Parvoviridae），細(xì)小病毒亞科（Parvovirinae），原細(xì)小病毒屬（Protoparvovirus），該屬還包括貓細(xì)小病毒（FPV），水貂腸炎病毒（MEV）等其他病毒。有研究發(fā)現(xiàn)，CPV和FPV、MEV有非常密切的親緣關(guān)系[1]，三者的病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)、核酸DNA、蛋白核衣殼幾乎完全一樣[2]，有學(xué)者將這種現(xiàn)象歸納為細(xì)小病毒的不同分離株[3]。

CPV為線性負(fù)股單鏈DNA病毒，無囊膜，是一種食肉動物原病毒。病毒粒子呈正二十面體對稱，為圓形或六邊形，直徑約25 nm，核衣殼由32個長3 ～ 4 nm的殼粒構(gòu)成，整個病毒一共由60個VP1和VP2交替的基序構(gòu)成。蛋白質(zhì)質(zhì)量占總質(zhì)量的60%以上，其余為DNA。病毒粒子的分子質(zhì)量為5.5×106 ～ 6.2×106 Da，在氯化銫中的浮力密度為1.39 ～ 1.42 g / cm3[4]，沉淀系數(shù)為23 S～ 27 S。

（2）CPV的理化性質(zhì)

穩(wěn)定性：所有細(xì)小病毒在外界環(huán)境中都是高度穩(wěn)定的[5]。在pH 3～9、56℃條件下，CPV可保持1 h以上的活性。長期存放于低溫環(huán)境對CPV的感染力基本不會有影響[6]，常溫下可存活至少3個月，并且CPV的感染力只是略有下降，即使在常溫下放置數(shù)月甚至數(shù)年，仍能從病犬的糞便中檢測到病毒的存在。該病毒對高溫也具有一定的耐受力，65℃條件下可存活至少30 min；80℃條件下也能存活數(shù)十分鐘[7]。酒精、乙醚、氯仿等脂質(zhì)溶劑、胰蛋白酶和大多數(shù)消毒劑不能有效殺滅CPV，但一些常規(guī)消毒劑，如0.5%福爾馬林、氨水、0.175%次氯酸鈉能起到很好的殺滅作用，另外氧化劑、紫外線也能使CPV失活[8]。

血凝性：因血凝素的存在，CPV能特異性地與豬、馬、恒河猴等多種動物的紅細(xì)胞結(jié)合，產(chǎn)生凝集現(xiàn)象。但不能與人和牛、羊、家禽等動物的紅細(xì)胞結(jié)合。CPV的血凝性很強(qiáng)，滅活后血凝性基本不變，4℃環(huán)境下仍可凝集豬、恒河猴的紅細(xì)胞。這種血凝特性可以作為CPV鑒定的參考指標(biāo)[9-11]。CPV的血凝活性對pH有一定的要求，當(dāng)pH ＞ 6.0時，CPV的血凝活性顯著降低，pH5.8～6.0是CPV血凝試驗的最適pH范圍。血凝活性對溫度也有要求，當(dāng)外界溫度處于37℃時，血凝試驗敏感性顯著降低，效果不佳。并且CPV在不同的溫度和pH條件下，對不同物種紅細(xì)胞的血凝性和敏感性都不同。比如，4℃環(huán)境下，豬、恒河猴等動物的紅細(xì)胞會發(fā)生凝集，但禽類、鼠類等紅細(xì)胞無凝集現(xiàn)象[12]。所以在進(jìn)行CPV的血凝試驗時，要合理設(shè)置實(shí)驗環(huán)境，以達(dá)到最佳試驗效果。

培養(yǎng)特性：CPV可在犬腎細(xì)胞（MDCK）、貓腎細(xì)胞（F81、CRFK）、犬腸管細(xì)胞等多種宿主細(xì)胞上生長，但不能在雞胚中增殖[13]。CPV的復(fù)制機(jī)制有缺陷，不能單獨(dú)進(jìn)行復(fù)制，需在宿主細(xì)胞染色體復(fù)制開始后，依賴于宿主細(xì)胞的聚合酶和其復(fù)制體系來進(jìn)行基因組復(fù)制。所以CPV傳代通常采用S期同步接毒或40%～50%貼壁時再接種，此時細(xì)胞中富含聚合酶，有利于提高病毒滴度和病毒收集率。若要延遲接毒，則不能超過24 h。接種后一般不會馬上出現(xiàn)細(xì)胞病變，通常盲傳到2～5代時可觀察到細(xì)胞脫落、崩解和破碎等明顯的細(xì)胞病變[14-18]。

（3）致病機(jī)理

CPV通過糞口傳播，對有絲分裂活性組織有親嗜性，如淋巴組織、腸隱窩上皮細(xì)胞和骨髓，以及新生幼犬的心臟[19]。病毒首先在口咽的淋巴組織、腸系膜淋巴結(jié)和胸腺進(jìn)行復(fù)制，隨后在血液循環(huán)的帶動下傳播到全身，3 ～ 5 d就會引起病毒血癥，然后傳播至小腸絨毛隱窩，形成嗜酸性核內(nèi)包涵體[20-21]。因淋巴和骨髓中病毒大量繁殖使白細(xì)胞數(shù)顯著減少，所以大多數(shù)病犬在血常規(guī)檢查時會出現(xiàn)白細(xì)胞低于正常值的現(xiàn)象[22]。在健康犬的小腸中，從隱窩端遷移出的腸上皮細(xì)胞在絨毛頂端分化成熟，然后得到消化吸收的能力進(jìn)而幫助機(jī)體吸收營養(yǎng)[23-24]。但CPV侵入腸隱窩后，正常腸上皮細(xì)胞的更新被破壞，而成型的絨毛鈍化、萎縮并逐漸失去吸收能力[25-26]。嚴(yán)重的腸炎，可因內(nèi)源性毒素被吸收而致自體中毒，還增加了病毒易位和大腸桿菌敗血癥的風(fēng)險，導(dǎo)致感染性休克并最終死亡[27]。研究發(fā)現(xiàn)，在2～3周齡血清陰性幼犬中，CPV可在心肌細(xì)胞中復(fù)制，引起急性心肌炎[28]。

2 犬細(xì)小病毒病

（1）臨床癥狀

腸炎型：潛伏期自然感染的為7～14d，人工感染的為4～5d，潛伏期期間患犬和健康犬無區(qū)別，潛伏期后，病犬開始出現(xiàn)精神沉郁、拒飲拒食、嘔吐、腹瀉等異常病理癥狀[29]。病初，病犬吐出白色泡沫狀穢物，逐漸變?yōu)辄S色粘稠狀，極少可見帶有血絲的淡綠色膽汁嘔吐物[30]，隨著病情發(fā)展，嘔吐物變?yōu)辄S綠色粘稠狀的膽汁。由于嘔吐，大量體液散失，病犬可能出現(xiàn)脫水；嘔吐嚴(yán)重時還可能造成腸套疊現(xiàn)象。典型臨床表現(xiàn)是腹瀉，病初犬糞便稀軟、不成型[31]，然后很快出現(xiàn)番茄水樣血便，伴有腐臭味；伴隨著犬大量失血，病犬的眼結(jié)膜、口腔粘膜呈現(xiàn)發(fā)紺，蒼白等病理現(xiàn)象。患病后期則出現(xiàn)黃疽、體溫過低、靜脈凝固等現(xiàn)象[32]。病犬的死因大多是脫水、電解液不平衡、大量的病毒感染等，其中幼犬因抵抗力差死亡率尤其高[33]。

心肌炎型：該類發(fā)病急，且無任何征兆，多是因4～6周齡的幼犬體內(nèi)母源抗體滴度不夠而導(dǎo)致發(fā)病。發(fā)病突然，且整個病程結(jié)束十分迅速，死亡率高達(dá)60～100%。病初，病犬精神狀況良好，偶見拉稀、嘔吐和體溫上升；隨后身體機(jī)能急劇減退，出現(xiàn)呻吟、可視粘膜蒼白、干咳、呼吸困難等癥狀，聽診時可發(fā)現(xiàn)心內(nèi)雜音、心律不齊等病理現(xiàn)象，最終病犬因急性心力衰竭而死亡[34-35]。

（2）防治

目前，針對犬細(xì)小病毒病的防制沒有特別有效的藥物，主要還是考慮免疫接種，一般使用生產(chǎn)成本較低的滅活疫苗和弱毒疫苗。我國主要使用的是CPV-2b型，但已被證實(shí)該型疫苗對幼犬無法起到完全免疫作用[36]。考慮到CPV的高突變率、弱毒苗毒力返祖、免疫接種失敗等現(xiàn)象，新型疫苗的研發(fā)依舊很急迫，例如基因工程疫苗、核酸疫苗、載體疫苗等都處于研發(fā)當(dāng)中。

主人在購買犬時應(yīng)仔細(xì)觀察犬的表現(xiàn)；對于流浪犬，在決定領(lǐng)養(yǎng)后，務(wù)必去正規(guī)醫(yī)院進(jìn)行檢查；在飼養(yǎng)過程中，要注意飲食飲水和犬舍的衛(wèi)生，做好定期消毒；春冬兩季時，應(yīng)加強(qiáng)保暖，加強(qiáng)營養(yǎng)；在幼犬未適應(yīng)環(huán)境前，應(yīng)細(xì)心照看，避免應(yīng)激；待犬適應(yīng)后，應(yīng)及時帶犬到正規(guī)醫(yī)院接種疫苗。

3 小結(jié)

隨著寵物行業(yè)的蓬勃發(fā)展，養(yǎng)犬人數(shù)一直在激增。近幾年來，犬細(xì)小病毒病的肆虐給養(yǎng)犬業(yè)和養(yǎng)犬人士帶來了巨大的傷害。高致病率和高致死率讓犬細(xì)小病毒病成為威脅犬科動物健康的可怕疾病之一，而現(xiàn)有疫苗的保護(hù)能力還有待提高，需要進(jìn)一步探索新型基因工程疫苗的可能性。