CpG ODN協同小鼠肝癌細胞裂解物對小鼠原位移植性肝癌的抑制作用研究①

孫 鵬 李歡歡 王衛芳 竇 瑤 周曉晶

(長春中醫藥大學臨床醫學院，長春 130117)

肝癌是最常見的肝臟原發惡性腫瘤，其致死率極高[1]。尋找抗肝癌免疫中有效靶抗原是抗肝癌免疫的難題[2]。在腫瘤細胞裂解物(tumor cell lysate,TCL)中含有豐富的腫瘤相關抗原(tumor associated antibody,TAA)，因此腫瘤細胞內所有抗原都可能是免疫攻擊靶點，從而引起作用更強的抗肝癌免疫反應[3，4]。但腫瘤抗原的免疫原性弱，研究者們嘗試了多種方法來提高TCL的免疫原性。常用的方法包括：用DC裝載 TCL、以HSP為佐劑等[5，6]。Dong等[7]研究發現，結核分枝桿菌的HSP65能協助lewis肺癌的細胞裂解物誘導抗肺癌免疫反應。此外，人們也研究了含有胞苷酸-鳥苷酸的寡聚脫氧核苷酸(CpG ODN)與肝癌細胞裂解物聯合應用的效果，CpG ODN是一種Th1型免疫增強劑，刺激機體產生Th1型細胞因子IFN-γ、IL-12等，并且能夠輔助TAA產生CTL反應從而清除腫瘤細胞[8]。Dong等[9]研究發現，CpG1826能增強TCL的免疫原性，從而應用于人類HPV病毒永生化的腫瘤模型中。因此CpG ODN或許會輔助TCL誘導抗肝癌免疫。根據以上推測，我們將小鼠肝癌細胞H22的TCL與具有免疫刺激增強作用的C型CpG ODN聯合應用于小鼠原位移植性肝癌模型，研究其抑瘤效果及機制。

1 材料與方法

1.1材料 H22細胞株由本實驗室液氮冷凍儲存，為懸浮生長，使用含10%FBS IMDM培養基，培養于5%CO2、37℃培養箱中。純化的單鏈寡聚脫氧核苷酸購自日本TaKaRa大連分公司(OPC級，純度90%，HPLC級，純度99%)。IFN-γ、IL-17檢測試劑盒購自R&D System公司。本研究使用的CpG ODN序列如下：C274(5′-TCGTCGAACGTTCGAGATGAT-3′)，被溶于無菌PBS中，紫外分光光度計定量，檢測內毒素<0.03 EU/mg，符合動物實驗要求，于-20℃ 冷藏備用。雌性BALB/c 小鼠，6～8 周齡，18～22 g，購自吉林大學白求恩醫學院動物實驗中心。

1.2方法

1.2.1TCL的制備和鑒定 將生長狀態良好的H22細胞用PBS洗滌、計數后取適量細胞制成細胞懸浮液。……